一種烏雞白鳳片中有效成分的檢測(cè)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及醫(yī)療領(lǐng)域，尤其是涉及中藥有效成分的檢測(cè)方法。
【背景技術(shù)】
[0002]烏雞白鳳片由烏雞、人參、白芍、丹參、當(dāng)歸、香附等二十味中藥組成，具有補(bǔ)氣養(yǎng)血、調(diào)經(jīng)止帶的功效，主治氣血兩虧引起的身體瘦弱，腰酸腿軟，陰虛盜汗，經(jīng)血不調(diào)，子宮虛寒，行經(jīng)腹痛，崩漏帶下，產(chǎn)后失血等癥。研究表明，烏雞白鳳片可降低大鼠甘油三酯及氧化低密度脂蛋白、阻止動(dòng)脈硬化有防治骨質(zhì)酥松，保護(hù)肝臟等作用，對(duì)阿爾茨海默病具有潛在的藥用價(jià)值。因此，烏雞白鳳片的臨床應(yīng)用越來(lái)越廣，目前國(guó)內(nèi)生產(chǎn)的廠(chǎng)家也越來(lái)越多。為了控制烏雞白鳳片質(zhì)量，2005年藥典也有含量測(cè)定方法和標(biāo)準(zhǔn)，也有文獻(xiàn)報(bào)告烏雞白鳳中丹參酮、丹參素或芍藥苷含量測(cè)定的方法。由于烏雞白鳳片是由20味藥材制備而成，有效成分復(fù)雜多樣性，現(xiàn)有技術(shù)含量都是測(cè)定其中一種成分，至今為止，還沒(méi)有同時(shí)測(cè)定多種成分的檢測(cè)方法出現(xiàn)，尤其是一種同時(shí)對(duì)芍藥苷和甘草苷定量定性的檢測(cè)方法，也沒(méi)有香附有效成分的定性定量方法。因此，為全面提高其產(chǎn)品質(zhì)量，一種方法可以檢測(cè)多種成分并操作簡(jiǎn)單，易于產(chǎn)業(yè)化日常檢驗(yàn)的質(zhì)量測(cè)定方法是迫在眉睫的。
[0003]香附RhizomaCyperi (Nutgrass Galingale Rhizome)性味:辛微苦甘，平。主要成分為揮發(fā)油，功能主治理氣解郁，調(diào)經(jīng)止痛。用于肝郁氣滯，胸、脅、脘腹脹痛，消化不良，月經(jīng)不調(diào)，經(jīng)閉痛經(jīng)，寒疝腹痛，乳房脹痛。藥理作用
[0004]①對(duì)子宮的作用。香附子5%流浸膏，能抑制豚鼠、家兔、貓、犬等離體子宮(已孕及未孕)的收縮，對(duì)子宮肌張力的弛緩作用，與當(dāng)歸流浸膏相似，但效力較弱。
[0005]香附所含的油有微弱的雌激素作用。
[0006]②鎮(zhèn)痛作用用小鼠電盤(pán)刺激法，香附子20%醇提取物0.5毫升/20克體重皮下注射，能明顯提聞小鼠痛閾。
[0007]③抗菌作用塊根有抗菌作用，其提取物對(duì)某些真菌有抑制作用。
[0008]目前揮發(fā)油的提取方法主要有水蒸氣蒸餾法、油脂吸收法、溶劑萃取法、超臨界流體萃取法和冷壓法等進(jìn)行提取。
[0009]其中最常用的方法是水蒸汽蒸餾法，但該方法在進(jìn)一步分離精制時(shí)，傳統(tǒng)的重蒸餾方法由于加熱次數(shù)及時(shí)間較長(zhǎng)，揮發(fā)油容易氧化變質(zhì)且得率低。
[0010]超臨界C02萃取揮發(fā)油得率較高，但在工業(yè)生產(chǎn)放大中投入的成本高。因此，如何獲得更多的揮發(fā)油成分，成為一個(gè)難題。
[0011]揮發(fā)油是中藥中特有的成分，具有多種藥理作用:揮發(fā)油過(guò)去采用傳統(tǒng)的水蒸氣蒸餾的方式，餾出液靜置分層后，分離油層，其中的芳香飽和水溶液，含有大量的揮發(fā)油成分，但水量大，無(wú)法分離，故最終棄去，造成浪費(fèi)；另外，部分中藥的揮發(fā)油成分溶于水，不形成油水分離層，故無(wú)法分離。
[0012]香附的有效成分為揮發(fā)油α-香附酮，提取收率低，直接照成日常檢驗(yàn)的含量范圍波動(dòng)比較大，不能真實(shí)檢驗(yàn)該產(chǎn)品的質(zhì)量，因此，確定一個(gè)烏雞白鳳片中香附有效成分的質(zhì)量測(cè)定方法是急需解決的問(wèn)題

【發(fā)明內(nèi)容】

[0013]為了解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明提供了一種烏雞白鳳片有效成分的檢測(cè)方法，該方法專(zhuān)屬性強(qiáng)，靈敏度高，準(zhǔn)確可靠，操作簡(jiǎn)單并適應(yīng)產(chǎn)業(yè)化的日常檢驗(yàn)。
[0014]本發(fā)明是通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的:
[0015]一種烏雞白鳳片香附有效成分檢測(cè)方法，采用薄層分析法檢測(cè)α -香附酮并同時(shí)用紫外-分光光度法測(cè)定含量，包括如下步驟:
[0016]a、供試品溶液制備:取烏雞白鳳片樣品，提取揮發(fā)油成分，用乙酸乙酯溶解，即得待測(cè)供試品。
[0017]b、對(duì)照品溶液的制備香附酮對(duì)照品，加乙酸乙酯溶解，即得對(duì)照品
[0018]溶液；
[0019]C、照薄層色譜法:取對(duì)照品和供試品溶液，分別點(diǎn)于同一硅膠薄層板上以甲苯-乙酸乙酯=8-10: 1-2為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干后，置于紫外燈下檢視后噴以二硝基苯肼試液顯色，斑點(diǎn)橙紅色。
[0020]上述步驟a中揮發(fā)油提取提取為水蒸氣蒸餾法，并采用有機(jī)溶劑為富集揮發(fā)油載體，所述的烏雞白鳳片樣品與有機(jī)溶劑重量體積比為1-5: I。
[0021]上述步驟a水蒸氣蒸餾法，揮發(fā)油測(cè)定器中加水量與有機(jī)溶劑體積比為150-200: 1，所述的有機(jī)溶劑選自為乙酸乙酯、氯仿、乙醚、乙酸甲酯中一種，優(yōu)選有機(jī)溶劑為乙酸乙酯，優(yōu)選乙酸乙酯:水體積比為1: 150。
[0022]優(yōu)選步驟a中所述水蒸氣蒸餾，用乙酸乙酯:水混合提取蒸餾2-5小時(shí)，取乙酸乙酯層作為供試品溶液。
[0023]優(yōu)選步驟c中所述的展開(kāi)劑還可用苯:乙酸乙酯=8: 2、氯仿:乙醚=9: 1、苯:乙醚=6: 4或環(huán)己烷:乙酸乙酯=I: I中一種。最佳展開(kāi)劑甲苯-乙酸乙酯
9.5: 1.5。
[0024]本發(fā)明所述的烏雞白鳳片是由下述重量份的原藥材制備得到的:
[0025]烏雞5-15份、鹿角膠100-110份、醋鱉甲50-60份、煅牡蠣30-50份、桑螵蛸50-60份、人參100-110份、黃芪20-30份、當(dāng)歸120-130份、白芍100-110份、醋香附100-110份、天冬50-60份、甘草20-30份、地黃200-220份、熟地黃200-220份、川芎50-60份、銀柴胡20-30份、丹參100-110份、山藥100-110份、芡實(shí)炒50-60份、鹿角霜30-50份.
[0026]本發(fā)明所述的烏雞白鳳片，優(yōu)選是由下述重量份的原藥材制備得到的:
[0027]烏雞5-10份、鹿角膠108份、醋鱉甲54份、煅牡蠣40份、桑螵蛸40份、人參108份、黃芪27份、當(dāng)歸122份、白芍108份、醋香附108份、天冬54份、甘草27份、地黃215份、熟地黃216份、川芎54份、銀柴胡22份、丹參108份、山藥108份、芡實(shí)炒54份、鹿角霜40份。
[0028]本發(fā)明的烏雞白鳳片按照現(xiàn)有技術(shù)制備，優(yōu)選是按照下述制備方法獲得的:
[0029]以上二十味，山藥、鹿角膠分別粉碎成細(xì)粉，香附提取揮發(fā)油，烏雞切成小塊，加水煎煮I小時(shí)，趁熱加入適量的固體石蠟，攪拌使其融化，靜置，棄去上層蠟及油脂固體，煎液攪拌成勻漿，加入適量的木瓜蛋白酶，攪拌，水解5小時(shí)，煮沸5分鐘，離心，取上清液，減壓濃縮成稠膏，減壓干燥成干膏，鱉甲加水煎煮二次，第一次2小時(shí)，第二次I小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，減壓濃縮成稠膏，再減壓干燥成干膏，人參，白芍，甘草，天冬加水煎煮二次，每次I小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，減壓濃縮至相對(duì)密度為1.07(50°C )，通過(guò)DlOl大孔樹(shù)脂，用5倍量水洗脫，棄去水液，再用90%乙醇洗脫至洗脫液無(wú)皂苷反應(yīng)為止，洗脫液減壓回收乙醇并濃縮致稠膏狀，再減壓干燥成干膏。丹參、黃苗、銀柴胡、川；、當(dāng)歸、桑螵蛸用75%乙醇回流提取二次，每次I小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，減壓回收乙醇并濃縮，減壓干燥成干膏，其余牡蠣等五味子加水煎煮二次，第一次2小時(shí)，第二次I小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，減壓濃縮至相對(duì)密度為1.28-1.33 (600C )的清膏,加乙醇至含醇量達(dá)到60 %，靜置，濾過(guò)，濾液減壓回收乙醇并濃縮成稠膏，再減壓干燥成干膏，將上述干膏與山藥和鹿角膠的細(xì)粉及適量微晶纖維素混合，粉碎成細(xì)粉，過(guò)篩，制成顆粒，混勻，干燥，噴加香附揮發(fā)油，混勻，悶潤(rùn)，加入適量硬脂酸鎂，制成1000片.
[0030]試驗(yàn)例I香附的鑒別
[0031]供試品溶液的制備:取本品5g，研細(xì)，照揮發(fā)油測(cè)定法(《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄XD)加300ml的水，在揮發(fā)油測(cè)定器內(nèi)加乙酸乙酯2ml，緩緩加熱至微沸，并保持微沸約3.5小時(shí)，放置半小時(shí)后，分取乙酸乙酯層，作為供試品溶液。
[0032]對(duì)照品溶液的制備:取α -香附酮對(duì)照品，加乙酸乙酯制成每Iml含Img的溶液，作為對(duì)照品溶液。
[0033]陰性對(duì)照液制備:按照工藝和處方制備不含香附的樣品，取該樣品按照供試品溶液制備方法制備，作為香附陰性樣品溶液。
[0034]照薄層色譜法，吸取上述三種溶液各2-5ul，分別點(diǎn)于同一硅膠GF25