一種滴液式自動(dòng)生物染色儀器的制造方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種生物染色儀器，尤其是涉及一種滴液式自動(dòng)生物染色儀器。
【背景技術(shù)】
[0002]染色是了解細(xì)菌和細(xì)胞形態(tài)的手段，革蘭、抗酸和血細(xì)胞染色是最主要和廣泛使用的方法，目前主要為人工操作，分別將革蘭染色和抗酸染色法簡(jiǎn)述如下:
[0003]革蘭染色法是1884年由丹麥醫(yī)師Gram創(chuàng)立。細(xì)菌先經(jīng)堿性染料結(jié)晶染色，再經(jīng)碘液媒染后，用酒精脫色，在一定條件下有的細(xì)菌紫色不被脫去，有的可被脫去，因此可把細(xì)菌分為兩大類，前者叫做革蘭氏陽(yáng)性菌(G+)，后者為革蘭氏陰性菌(G-)。為觀察方便，脫色后再用一種紅色染料如堿性蕃紅等進(jìn)行復(fù)染。陽(yáng)性菌仍帶紫色，陰性菌則被染上紅色。有芽孢的桿菌和絕大多數(shù)球菌，以及所有的防線菌和真菌都呈革蘭氏正反應(yīng)；弧菌、螺旋體和大多數(shù)致病性的無(wú)芽孢桿菌都呈現(xiàn)負(fù)反應(yīng)。
[0004]革蘭氏陽(yáng)性菌和革蘭氏陰性菌在化學(xué)組成和生理性質(zhì)上有很多差別，染色反應(yīng)不一樣。現(xiàn)在一般認(rèn)為革蘭氏陽(yáng)性菌體內(nèi)含有特殊的核蛋白質(zhì)鎂鹽與多糖的復(fù)合物，它與碘和結(jié)晶紫的復(fù)合物結(jié)合很牢，不易脫色，陰性菌復(fù)合物結(jié)合程度低，吸附染料差，易脫色，這是染色反應(yīng)的主要依據(jù)。另外，陽(yáng)性菌菌體等電點(diǎn)較陰性菌為低，在相同PH條件下進(jìn)行染色，陽(yáng)性菌吸附堿性染料很多，因此不易脫去，陰性菌則相反。所以染色時(shí)的條件要嚴(yán)格控制。例如，在強(qiáng)堿的條件下進(jìn)行染色，兩類菌吸附堿性染料都多，都可呈正反應(yīng)；PH很低時(shí)，則可都呈負(fù)反應(yīng)。此外，兩類菌的細(xì)胞壁等對(duì)結(jié)晶紫-碘復(fù)合物的通透性也不一致，陽(yáng)性菌透性小，故不易被脫色，陰性菌透性大，易脫色。所以脫色時(shí)間。脫色方法也應(yīng)嚴(yán)格控制。
[0005]革蘭氏染色原理如下:
[0006]G+菌:細(xì)胞壁厚，肽聚糖網(wǎng)狀分子形成一種透性障，當(dāng)乙醇脫色時(shí)，肽聚糖脫水而孔障縮小，故保留結(jié)晶紫-碘復(fù)合物在細(xì)胞膜上。呈紫色。
[0007]G-菌:肽聚糖層薄，交聯(lián)松散，乙醇脫色不能使其結(jié)構(gòu)收縮，其脂含量高，乙醇將脂溶解，縫隙加大，結(jié)晶紫-碘復(fù)合物溶出細(xì)胞壁，沙黃復(fù)染后呈紅色。
[0008]革蘭氏染色法一般包括初染、媒染、脫色、復(fù)染等四個(gè)步驟，具體操作方法是:(I)涂片固定，(2)草酸銨結(jié)晶紫染I分鐘，(3)自來(lái)水沖洗，(4)加碘液覆蓋涂面染I分鐘，(5)水洗，用吸水紙吸去水分，(6)加95%酒精數(shù)滴，并輕輕搖動(dòng)進(jìn)行脫色，30秒后水洗，吸去水分，(7)蕃紅染色液(稀)(或沙黃)染10秒鐘后，自來(lái)水沖洗，(8)干燥，鏡檢。
[0009]染色的結(jié)果，革蘭陽(yáng)性菌染呈紫色，革蘭陰性菌染呈紅。
[0010]以上是常規(guī)人工的革蘭染色為四步染色和四次水洗,其操作比較復(fù)雜、浪費(fèi)水和時(shí)間長(zhǎng)。現(xiàn)代實(shí)驗(yàn)室工作繁忙和成本高，對(duì)各項(xiàng)技術(shù)方法有力求簡(jiǎn)便和節(jié)約的要求，以便在有限的時(shí)間和成本內(nèi)完成更多的任務(wù)。
[0011]抗酸染色法是1882年由埃利希(F.Ehrlich)首創(chuàng)并經(jīng)F.齊爾(Ziehl)改進(jìn)而創(chuàng)造出的細(xì)菌染色法。其中最具代表性的為對(duì)結(jié)核菌的齊爾-尼爾森(Ziehl—Neelsen)染色法和齊爾-加貝特(Ziehl—Gabbet)染色法。用石炭酸復(fù)紅染色后，用鹽酸乙醇脫色，再用美藍(lán)進(jìn)行對(duì)比染色。
[0012]抗酸染色的原理如下:
[0013]分枝桿菌，含結(jié)核菌的細(xì)胞壁內(nèi)含有大量的脂質(zhì)，包圍在肽聚糖的外面，所以分枝桿菌一般不易著色，要經(jīng)過(guò)加熱和延長(zhǎng)染色時(shí)間來(lái)促使其著色。但分枝桿菌中的分枝菌酸與染料結(jié)合后，就很難被酸性脫色劑脫色，故名抗酸染色。
[0014]齊-尼氏抗酸染色法是在加熱條件下使分枝菌酸與石炭酸復(fù)紅牢固結(jié)合成復(fù)合物，用鹽酸酒精處理也不脫色。當(dāng)再加堿性美蘭復(fù)染后，分枝桿菌仍然為紅色，而其他細(xì)菌及背景中的物質(zhì)為藍(lán)色。
[0015]抗酸染色一般步驟如下:
[0016]I)初染:用玻片夾夾持涂片標(biāo)本，滴加石炭酸復(fù)紅2-3滴，在火焰高處徐徐加熱，切勿沸騰，出現(xiàn)蒸汽即暫時(shí)離開(kāi)，若染液蒸發(fā)減少，應(yīng)再加染液，以免干涸，加熱5分鐘，待標(biāo)本冷卻后用水沖洗。
[0017]2)脫色:3%鹽酸酒精脫色3分鐘；用水沖洗。
[0018]3)復(fù)染:用堿性美蘭溶液復(fù)染30秒，水洗，用吸水紙吸干后用油鏡觀察。
[0019]以上是常規(guī)的人工抗酸染色為三步染色和三次水洗,其操作比較復(fù)雜、浪費(fèi)水和時(shí)間長(zhǎng)?，F(xiàn)代實(shí)驗(yàn)室工作繁忙和成本高，對(duì)各項(xiàng)技術(shù)方法有力求簡(jiǎn)便和節(jié)約的要求，以便在有限的時(shí)間和成本內(nèi)完成更多的任務(wù)。
[0020]中國(guó)專利CN102220236A公布了一種革蘭染色二步法自動(dòng)染色儀，該染色儀由染色池、清洗池、暖氣流干燥池、機(jī)械手、軌道及顯示屏組成，染色池有兩個(gè)，第一染色池、第二染色池、清洗池及暖氣流干燥池依次排列設(shè)置在染色儀的前部，機(jī)械手設(shè)在染色儀的上部，該機(jī)械手的前端內(nèi)可放置待染片或質(zhì)控片，機(jī)械手的后端與所述的軌道連接，顯示屏設(shè)在染色儀頂部的一側(cè)。該發(fā)明生產(chǎn)工藝及操作流程簡(jiǎn)單，對(duì)水質(zhì)無(wú)特殊要求，生產(chǎn)及檢驗(yàn)過(guò)程中無(wú)有毒、有害物質(zhì)投入和產(chǎn)生，提供更快速、易標(biāo)準(zhǔn)化的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，結(jié)果易于觀察和判斷，安全可靠。但是由于該染色儀采用的是放入染色池中浸染的方式，導(dǎo)致染色效果不好。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0021]本發(fā)明的目的就是為了克服上述現(xiàn)有技術(shù)存在的缺陷而提供一種操作簡(jiǎn)便、方法可靠、性能穩(wěn)定、可滿足多種染色方式的滴液式自動(dòng)生物染色儀器。
[0022]本發(fā)明的目的可以通過(guò)以下技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn):
[0023]一種滴液式自動(dòng)生物染色儀器，包括機(jī)架、豎向軌道、玻片盒、橫向軌道、機(jī)械手、滴液式染色與清洗裝置、烘干器、廢液杯及控制模塊，所述的機(jī)架的頂端設(shè)有一裝載口，所述的豎向軌道從裝載口向下伸到機(jī)架內(nèi)部，所述的玻片盒設(shè)在裝載口處，并可沿豎向軌道上下升降，玻片盒內(nèi)裝有細(xì)菌或細(xì)胞染色用玻片，所述的橫向軌道橫向設(shè)在機(jī)架的內(nèi)部，所述的機(jī)械手的后端滑動(dòng)連接在橫向軌道上，機(jī)械手的前端用于夾持玻片盒內(nèi)的玻片，所述的滴液式染色與清洗裝置設(shè)在機(jī)架的頂端，所述的烘干器設(shè)在機(jī)架內(nèi)部，所述的廢液杯設(shè)在機(jī)架的底端，用于盛裝染液廢液與清洗廢液，所述的控制模塊設(shè)在機(jī)架的側(cè)面上，并與機(jī)械手、滴液式染色與清洗裝置及烘干器電連接；
[0024]玻片盒沿豎向軌道下降，機(jī)械手從玻片盒內(nèi)夾持出玻片，并在橫向軌道上橫向移動(dòng)，通過(guò)滴液式染色與清洗裝置的下方，滴液式染色與清洗裝置對(duì)玻片進(jìn)行染色與清洗，然后機(jī)械手將玻片送回玻片盒，取下一個(gè)玻片繼續(xù)同樣動(dòng)作，所有玻片染色完成后，烘干器對(duì)玻片盒內(nèi)的玻片進(jìn)行烘干，干燥后進(jìn)行鏡檢。
[0025]所述的滴液式染色與清洗裝置包括蠕動(dòng)泵與試劑瓶架，所述的蠕動(dòng)泵設(shè)有若干個(gè)，布設(shè)在機(jī)架的頂端，所述的試劑瓶架設(shè)在機(jī)架的底端，用于放置初染劑儲(chǔ)瓶、復(fù)染劑儲(chǔ)瓶與清洗液儲(chǔ)瓶，蠕動(dòng)泵上的輸液管一端伸入到初染劑儲(chǔ)瓶、復(fù)染劑儲(chǔ)瓶或清洗液儲(chǔ)瓶中，另一端射入到機(jī)架內(nèi)部，通過(guò)滴液的方式對(duì)玻片染色與清洗；所述的初染劑儲(chǔ)瓶?jī)?nèi)設(shè)有初染劑，所述的復(fù)染劑儲(chǔ)瓶?jī)?nèi)設(shè)有復(fù)染劑，所述的清洗液儲(chǔ)瓶?jī)?nèi)設(shè)有清洗液。
[0026]所述的蠕動(dòng)泵至少設(shè)有3個(gè)，分別用于輸送初染劑、復(fù)染劑及清洗液。
[0027]所述的蠕動(dòng)泵可設(shè)有多個(gè)，任意角度均可向玻片雙側(cè)垂直噴射染液或清洗液。
[0028]所述的廢液杯抽插式連接在機(jī)架的底端，可脫離機(jī)架。
[0029]所述的機(jī)械手可水平或豎向移動(dòng)或轉(zhuǎn)動(dòng)。
[0030]所述的控制模塊包括控制電路板及與控制電路板連接的操作界面。
[0031]所述的玻片盒內(nèi)設(shè)有玻片I?30片。
[0032]所述的玻片盒內(nèi)設(shè)有玻片5片、10片或20片。
[0033]所述的烘干器的烘干溫度設(shè)在40?60°C。
[0034]使用本發(fā)明的儀器進(jìn)行染色時(shí)，玻片上的待檢材料可選為培養(yǎng)的菌、血、痰、便或分泌物等。
[0035]本發(fā)明的滴液式自動(dòng)生物染色儀器可任選抗酸或熒光TB或革蘭染色。
[0036]使用本發(fā)明的儀器進(jìn)行抗酸染色時(shí)，首先一步滴加l_3ml的初染劑(含2.0%堿性復(fù)紅的溶液)覆蓋標(biāo)本,染色2-3分鐘，水洗，再滴加3.0 %鹽酸酒精，脫色30秒，水洗，復(fù)染劑(0.8%的美蘭溶液)l-3ml覆蓋標(biāo)本，染色20-30秒，水洗，干后鏡檢。在涂片中可見(jiàn)到，染成紅色的為抗酸陽(yáng)性菌和染成蘭色的為抗酸陰性菌，對(duì)比鮮明。
[0037]使用本發(fā)明的儀器進(jìn)行革蘭染色時(shí)，先滴加l_3ml的初染劑(含0.5%結(jié)晶紫溶液)覆蓋標(biāo)本，染色30秒，水洗，再滴加l-3ml媒染脫色劑(I %的碘和酒精丙酮溶液)覆蓋標(biāo)本，10秒，水洗，最后滴加0.6%的堿性復(fù)紅溶液，復(fù)染10秒，水洗，干后鏡檢。在涂片中可見(jiàn)到，染成的紫色為革蘭陽(yáng)性菌和染成紅色的為革蘭陰性菌，對(duì)比鮮明。
[0038]使用本發(fā)明的儀器進(jìn)行熒光TB染色時(shí)，先滴加l_3ml的初染劑(含0.75%吖啶醇溶液)覆蓋標(biāo)本，染色15分鐘，水洗；再滴加脫色劑(3%的鹽酸酒精溶液)l-3ml覆蓋標(biāo)本，脫色30秒，水洗；最后復(fù)染滴加l_3ml復(fù)染劑(0.5%的高錳酸鉀溶液)脫色30秒，水洗，干后鏡檢。在涂片中可見(jiàn)到，染成的明亮橘黃色為T(mén)B陽(yáng)性和背景無(wú)色，對(duì)比鮮明。
[0039]使用本發(fā)明的儀器進(jìn)行血細(xì)胞染色時(shí)，先滴加l_3ml的