一種hplc-esi-ms/ms法檢測飼料中多種喹諾酮類藥殘的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于分析測試領(lǐng)域，特別涉及一種HPLC-ESI-MS/MS法檢測飼料中多種喹 諾酮類藥殘的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 喹諾酮類，又稱吡酮酸類或吡啶酮酸類，是人工合成的含4-喹諾酮基本結(jié)構(gòu)的抗 菌藥。常用藥物有諾氟沙星、達(dá)氟沙星、環(huán)丙沙星等。此類藥物對多種革蘭陰性菌有殺菌作 用，廣泛用于泌尿生殖系統(tǒng)疾病、胃腸疾病，以及呼吸道、皮膚組織的革蘭陰性細(xì)菌感染的 治療。隨著我國畜牧業(yè)的飛速發(fā)展，以及全球生態(tài)環(huán)境不斷惡化引起的各種動物疾病頻發(fā)， 使得廣大養(yǎng)殖戶開始大量應(yīng)用藥物防治疾病或作為飼料添加劑以促進(jìn)動物生長。然而，動 物在使用藥物治療后，藥物的原形或其代謝產(chǎn)物可能蓄積、儲存在動物的細(xì)胞、組織或器官 中，形成"獸藥殘留"。
[0003] 人類長期食用含較低濃度喹諾酮類藥物的動物性食品、中成藥保健食品等，容易 誘導(dǎo)耐藥性的傳遞，從而影響該類藥物的臨床療效。因此，喹諾酮類藥物殘留問題越來越引 起人們的關(guān)注。此外，獸殘超標(biāo)食品的出口也將嚴(yán)重影響我國在國際貿(mào)易中的聲譽，影響出 口貿(mào)易的穩(wěn)定健康發(fā)展。喹諾酮類、磺胺類、大環(huán)內(nèi)酯類、硝基呋喃類等獸藥在動物飼喂過 程中應(yīng)用廣泛，是國內(nèi)外重點檢測和監(jiān)控的獸藥，也是國際貿(mào)易間設(shè)置技術(shù)壁皇的重要指 標(biāo)內(nèi)容。聯(lián)合國糧農(nóng)組織/世界衛(wèi)生組織食品添加劑專家聯(lián)席委員會、歐盟都已制定了多 種喹諾酮類藥物在動物組織中的最高殘留限量。美國食品藥品安全管理局于2005年宣布 禁止用于治療家禽細(xì)菌感染的抗菌藥物恩諾沙星的銷售和使用。我國也于2002年規(guī)定了 環(huán)丙沙星、單諾沙星、恩諾沙星、沙拉沙星、二氟沙星、惡喹酸和氟甲喹等7種喹諾酮類藥物 在動物肌肉組織中的最高殘留限量為10~500 μ g/kg。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的在于：利用高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜開發(fā)了一種同時檢測飼料中8 種喹諾酮類藥殘的方法，該方法具有快速、準(zhǔn)確、簡便、靈敏度高，適用范圍廣等特點，完全 滿足飼料的檢測要求，具有一定的推廣應(yīng)用價值。
[0005] 為解決上述問題，本發(fā)明采用如下方案：
[0006] 一種HPLC-ESI-MS/MS法檢測飼料中多種喹諾酮類藥殘的方法，包括如下步驟：對 經(jīng)前處理后的待測樣品進(jìn)行正離子MRM掃描，以環(huán)丙沙星-D8為內(nèi)標(biāo)，采用C18色譜柱分 離，以含甲酸的水-含甲酸的乙腈為流動相作梯度洗脫，對樣品進(jìn)行質(zhì)譜檢測。
[0007] 進(jìn)一步地，所述多種喹諾酮選自二氟沙星、達(dá)氟沙星、沙拉沙星、氧氟沙星、恩諾沙 星、培氟沙星、環(huán)丙沙星或諾氟沙星中的至少一種；優(yōu)選的為二氟沙星、達(dá)氟沙星、沙拉沙 星、氧氟沙星、恩諾沙星、培氟沙星、環(huán)丙沙星和諾氟沙星。
[0008] 進(jìn)一步地，所述梯度洗脫條件為：0~311^11，8相從10%變到30%8,3~61^118 相從20%變?yōu)?0%，811^11停止，將8相變到10%，運行51^11;流速：0.3111171^11，柱溫 ：30°〇； 其中，A相為含0. 1%甲酸的水溶液，B相為含0. 1%甲酸的乙腈溶液。
[0009] 進(jìn)一步地，所述質(zhì)譜檢測條件為：電噴霧電離源正離子掃描ESI+，多反應(yīng)監(jiān)測模 式皿冊 ；干燥氣：隊，干燥氣溫度：300°0，干燥氣流速：10171^11，霧化壓力 ：2.8\10午&，毛細(xì) 管電壓：4000V。
[0010] 進(jìn)一步地，所述待測樣品的進(jìn)樣量為：5yL。
[0011] 進(jìn)一步地，所述前處理的步驟為：準(zhǔn)確稱取〇. 50g樣品，加入5. OOmL甲醇和水的混 合溶液，震蕩混勻后，超聲30min，有機(jī)濾膜過濾。
[0012] 進(jìn)一步地，所述甲醇和水的混合溶液中，甲醇和水的體積比為1:1。
[0013] 進(jìn)一步地，所述質(zhì)譜檢測中，目標(biāo)組分MRM模式下質(zhì)譜分析參數(shù)如下：
【主權(quán)項】
1. 一種HPLC-ESI-MS/MS法檢測飼料中多種嗟諾酬類藥殘的方法，其特征在于，包括如 下步驟：對經(jīng)前處理后的待測樣品進(jìn)行正離子MRM掃描，W環(huán)丙沙星-D8為內(nèi)標(biāo)，采用C18 色譜柱分離，W含甲酸的水-含甲酸的己膳為流動相作梯度洗脫，對洗脫液進(jìn)行質(zhì)譜檢 測。
2. 如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述多種嗟諾酬選自二氣沙星、達(dá)氣沙星、 沙拉沙星、氧氣沙星、恩諾沙星、培氣沙星、環(huán)丙沙星或諾氣沙星中的至少一種。
3. 如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述梯度洗脫條件為；0~3min，B相從10 % 變到30 %B，3~6minB相從20 %變?yōu)?0 %，8min停止，將B相變?yōu)?0 %，運行5min;流 速；0. 3血/min,柱溫；3(TC;其中，A相為含0. 1 %甲酸的水溶液，B相為含0. 1 %甲酸的己膳 溶液。
4. 如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述質(zhì)譜檢測條件為；電噴霧電離源正離子 掃描ESI+，多反應(yīng)監(jiān)測模式MRM;干燥氣；馬，干燥氣溫度；300°C，干燥氣流速；1化/min,霧 化壓力；2. 8X105Pa，毛細(xì)管電壓；4000V。
5. 如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述待測樣品的進(jìn)樣量為；5yL。
6. 如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述前處理的步驟為：準(zhǔn)確稱取0. 50g樣 品，加入5.OOmL甲醇和水的混合溶液，震蕩混勻后，超聲30min，有機(jī)濾膜過濾。
7. 如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述甲醇和水的混合溶液中，甲醇和水的體 積比為1:1。
8. 如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述質(zhì)譜檢測中，目標(biāo)組分MRM模式下質(zhì)譜 分析參數(shù)如下：
〇
9. 如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述多種嗟諾酬為二氣沙星、達(dá)氣沙星、沙 拉沙星、氧氣沙星、恩諾沙星、培氣沙星、環(huán)丙沙星和諾氣沙星。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種HPLC-ESI-MS/MS法檢測飼料中多種喹諾酮類藥殘的方法，采用常溫超聲的方法同時提取飼料樣品中的多種喹諾酮類藥物，并建立了高效液相色譜-三重串聯(lián)四極桿質(zhì)譜檢測飼料中多種喹諾酮類藥殘的方法，不僅可以極大地縮短樣品預(yù)處理時間，而且檢測方法的回收率和重復(fù)性均滿足飼料中獸藥分析要求，回收率均在95％以上，RDS在6％以內(nèi)，檢測限可達(dá)50μg/kg。本發(fā)明操作簡單，檢測靈敏度高，且結(jié)果可靠，可實現(xiàn)飼料中8種喹諾酮類藥殘的快速、低成本檢測。
【IPC分類】G01N30-02
【公開號】CN104792899
【申請?zhí)枴緾N201510205676
【發(fā)明人】王珊珊, 趙汝松, 王曉利, 寧凡盛, 苑金鵬, 陳相峰, 陳躍, 李磊, 張莉莉, 趙金
【申請人】山東省分析測試中心
【公開日】2015年7月22日
【申請日】2015年4月27日