出口蔬菜中多種植物生長調(diào)節(jié)劑的同時(shí)測(cè)定方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于化學(xué)分析檢測(cè)領(lǐng)域，具體涉及一種出口蔬菜中17種植物生長調(diào)節(jié)劑 的同時(shí)測(cè)定方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 蔬菜不僅是多種維生素及鉀、鎂、鈣、磷、鐵等礦物質(zhì)和膳食纖維的主要供給來源， 并且是植物化學(xué)成分如類胡蘿卜素、植物多酚等抗氧化劑的重要來源，對(duì)增強(qiáng)體內(nèi)抗氧化 防御系統(tǒng)及營養(yǎng)修復(fù)基因、糾正基因弱點(diǎn)起著重要的作用。為了能通過化學(xué)調(diào)控改變蔬菜 生長、發(fā)育的固有模式，有效改善蔬菜生產(chǎn)狀況，提高蔬菜產(chǎn)量和品質(zhì)，植物生長調(diào)節(jié)劑已 廣泛應(yīng)用于蔬菜生產(chǎn)中。近年來，植物生長調(diào)節(jié)劑在蔬菜上的廣泛應(yīng)用，給使用者帶來了一 定的經(jīng)濟(jì)效益。但是，蔬菜中殘留的植物生長調(diào)節(jié)劑同樣也給人們的健康帶來了安全隱患， 例如生殖和內(nèi)分泌系統(tǒng)紊亂、免疫功能障礙、癌癥以及其他潛在的疾病。那么在既需要保障 農(nóng)業(yè)的經(jīng)濟(jì)利益的同時(shí)，又需要保護(hù)消費(fèi)者的身體健康，對(duì)蔬菜中植物生長調(diào)節(jié)劑殘留的 檢測(cè)成為了一項(xiàng)必要的工作，不僅有助于監(jiān)督食品安全也可以對(duì)植物生長調(diào)節(jié)劑施用提供 一定依據(jù)。
[0003] 目前，國內(nèi)外有關(guān)植物生長調(diào)節(jié)劑殘留的檢測(cè)方法主要有酶聯(lián)免疫法（ELISA)、離 子色譜法（1C)、氣相色譜法（GC)、氣相色譜-質(zhì)譜法（GC-MS)、高效液相色譜法（HPLC)和液 相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（LC-MS/MS)。采用ELISA易產(chǎn)生假陽性，運(yùn)用GC和GC-MS時(shí)通常要進(jìn) 行衍生化的復(fù)雜操作，HPLC的靈敏度較低且難以實(shí)現(xiàn)確證分析，而液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法 (LC-MS/MS)可對(duì)多組分同時(shí)進(jìn)行定性和定量分析，且具有專屬性強(qiáng)、選擇性好、靈敏度高等 優(yōu)勢(shì)，彌補(bǔ)了前述方法的不足，LC-MS/MS所具備的一系列優(yōu)勢(shì)，決定了它廣泛的應(yīng)用前景。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 鑒于此，本發(fā)明的目的是提供一種出口蔬菜中多種植物生長調(diào)節(jié)劑的同時(shí)測(cè)定 方法，采用UHPLC-QTRAP可同時(shí)檢測(cè)出待測(cè)蔬菜中的17種植物生長調(diào)節(jié)劑，包括赤霉素、 吲哚-3- 丁酸、對(duì)氯苯氧乙酸、阿維菌素、胺鮮酯、莠去津、西瑪津、6-芐氨基嘌呤、2, 4-二 氯苯氧乙酸、氯吡苯脲、助壯素、矮壯素、多效唑、烯效唑、脫落酸、噻苯隆、對(duì)氟苯氧乙酸。 UHPLC-QTRAP既保留LC-MS/MS較好的選擇性與靈敏度，也可作為線性離子肼增強(qiáng)二級(jí)碎片 離子定性功能。
[0005] 本發(fā)明方法具體包括如下步驟：
[0006] 1)提取
[0007] 加入蔬菜勻漿與含1% (v/v)乙酸的乙腈溶液于離心管中，按每lg蔬菜勻漿與 2mL含1% (v/v)乙酸的乙腈溶液的比例，水平振蕩lOmin，再按每lg蔬菜勾衆(zhòng)加入0. 5g氯 化鈉的比例加入氯化鈉于離心管中，再次渦旋混勻lmin，5000r/min離心3min，吸取上清液 I于離心管中，待凈化；
[0008] 2)凈化樣本
[0009] 將十八烷基硅烷鍵合硅膠和無水硫酸鎂按重量比1:5加入所述裝有上清液I的 離心管中，禍旋混勾2min，5000r/min離心3min，吸取上清液II于旋蒸瓶中；
[0010] 3)濃縮
[0011] 將旋蒸瓶置于40°C以下水浴中旋蒸濃縮至凈干，加入lmL含1% (v/v)乙酸的乙 腈，渦旋振蕩，溶解旋蒸瓶中殘?jiān)?，濾膜過濾后，供UHPLC-QTRAP測(cè)定；
[0012] 4)UPLC-MS/MS測(cè)定，測(cè)定條件如下：
[0013] 色譜柱：C18 ;
[0014] 流動(dòng)相：乙腈-2mmol/L乙酸銨緩沖液，梯度洗脫；
[0015] 各化合物的參考保留時(shí)間及質(zhì)譜參數(shù)見表1，其中帶*代表定性離子和定量離子；
[0016] 柱溫：4(TC;
[0017] 流速：0? 3mL/min;
[0018] 進(jìn)樣量：10yL;
[0019] 預(yù)運(yùn)行時(shí)間：1.Omin;
[0020] 正離子模式總運(yùn)行時(shí)間：5min;
[0021] 負(fù)離子模式總運(yùn)行時(shí)間：6min;
[0022] 獲得UHPLC-QTRAP圖；
[0023] 表1十七種植物生長調(diào)節(jié)劑的參考保留時(shí)間及質(zhì)譜參數(shù)
[0024]
【主權(quán)項(xiàng)】
1.出口蔬菜中多種植物生長調(diào)節(jié)劑的同時(shí)測(cè)定方法，其特征在于，包括如下步驟： 1) 提取 加入蔬菜勻漿與含1%乙酸的乙腈溶液于離心管中，按每Ig蔬菜勻漿與2mL含1%乙 酸的乙腈溶液的比例，水平振蕩IOmin，再按每Ig蔬菜勻漿加入0. 5g氯化鈉的比例，加入氯 化鈉于離心管中，禍旋混勾lmin，5000r/min離心3min，吸取上清液I于離心管中，待凈化； 2) 凈化樣本 將十八烷基硅烷鍵合硅膠和無水硫酸鎂按重量比1:5加入所述裝有上清液I的離心 管中，禍旋混勾2min，5000r/min離心3min，吸取上清液II于旋蒸瓶中； 3) 濃縮 將旋蒸瓶置于40°C以下水浴中旋蒸濃縮至凈干，加入ImL含1 %乙酸的乙腈，渦旋振 蕩，溶解旋蒸瓶中殘?jiān)?，濾膜過濾后，供UHPLC-QTRAP測(cè)定； 4. UHPLC-QTRAP測(cè)定，測(cè)定條件如下： 色譜柱：C18 ; 流動(dòng)相：乙腈-2mmol/L乙酸銨緩沖液，梯度洗脫； 各化合物的參考保留時(shí)間及質(zhì)譜參數(shù)見表1，其中帶*代表定性離子和定量離子； 柱溫：40°C ; 流速：〇. 3mL/min ; 進(jìn)樣量：10yL; 預(yù)運(yùn)行時(shí)間：1. Omin ; 正離子模式總運(yùn)行時(shí)間：5min ; 負(fù)離子模式總運(yùn)行時(shí)間：6min ; 獲得 UHPLC-QTRAP 圖； 表1十七種植物生長調(diào)節(jié)劑的參考保留時(shí)間及質(zhì)譜參數(shù)
5)結(jié)果計(jì)算 用色譜數(shù)據(jù)處理機(jī)或按公式（1)計(jì)算試樣中植物生長調(diào)節(jié)劑的含量，計(jì)算結(jié)果須扣除 空白值；
式中： Xi一一待測(cè)試樣中待測(cè)物質(zhì)的含量，單位為毫克每千克； Ci一一從UHPLC-QTRAP圖上得到的待測(cè)物質(zhì)的溶液濃度，單位為微克每毫升； V一一樣液最終定容體積，單位為毫升； m一一最終樣液所代表的待測(cè)試樣質(zhì)量，單位為克。
2.根據(jù)權(quán)利要求2所述出口蔬菜中多種植物生長調(diào)節(jié)劑的同時(shí)測(cè)定方法，其特征在 于：步驟4)中所述梯度洗脫的洗脫程序如下： 正離子模式：

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述出口蔬菜中多種植物生長調(diào)節(jié)劑的同時(shí)測(cè)定方法，其特征在 于：步驟3)所述濾膜選用0. 22 y m親油性尼龍66膜。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種出口蔬菜中多種植物生長調(diào)節(jié)劑的同時(shí)測(cè)定方法。包括提取、凈化、濃縮和超高效液相色譜-三重四級(jí)桿/復(fù)合線性離子肼質(zhì)譜(UHPLC-QTRAP)測(cè)定等步驟，該方法可同時(shí)測(cè)定赤霉素、吲哚-3-丁酸、對(duì)氯苯氧乙酸、阿維菌素、胺鮮酯、莠去津、西瑪津、6-芐氨基嘌呤、2,4-二氯苯氧乙酸、氯吡苯脲、助壯素、矮壯素、多效唑、烯效唑、脫落酸、噻苯隆、對(duì)氟苯氧乙酸17種植物生長調(diào)節(jié)劑。本發(fā)明提供的出口蔬菜中多種植物生長調(diào)節(jié)劑的同時(shí)測(cè)定方法具有步驟簡便、耗時(shí)短、準(zhǔn)確度和精密度高的優(yōu)點(diǎn)。
【IPC分類】G01N30-02
【公開號(hào)】CN104820034
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510238783
【發(fā)明人】曹淑瑞, 李賢良, 唐柏彬, 郗存顯, 周雪, 張雷
【申請(qǐng)人】重慶出入境檢驗(yàn)檢疫局檢驗(yàn)檢疫技術(shù)中心
【公開日】2015年8月5日
【申請(qǐng)日】2015年5月12日