高精度檢測飼料中的克侖特羅含量的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及動(dòng)物飼料的檢測領(lǐng)域，特別是一種高精度檢測飼料中的克侖特羅含量 的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 樣品前處理是分析檢測過程的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，是濃縮被測定的痕量組分，提高方法的 靈敏度，及除去對(duì)分析系統(tǒng)有干擾的物質(zhì)的重要手段。萃取是從樣品集體中分離出目標(biāo)化 合物的一項(xiàng)技術(shù)，是樣品預(yù)處理中最重要的方法之一。目前，液液萃取仍然是應(yīng)用最廣泛的 樣品制備方法之一，但是，傳統(tǒng)的液液萃取的操作繁瑣費(fèi)時(shí)、有機(jī)溶劑消耗量大，而且容易 出現(xiàn)乳化現(xiàn)象的缺陷，使得在實(shí)際應(yīng)用中具有一定的局限性。
[0003] 1998年，科學(xué)家提出了在傳統(tǒng)的液液萃取的基礎(chǔ)上，利用一種具有吸附性和較大 的比表面積的惰性多空填料作為介質(zhì)，建立的一種新型高效樣品的制備方法-介質(zhì)液液萃 ?。╯upportedliquidextraction簡稱SLE)，SLE萃取技術(shù)就是選用一種多孔性惰性材 料-煅燒硅藻土作為介質(zhì)，取代分液漏斗，增大了兩相接觸時(shí)的作用面積，實(shí)現(xiàn)高效、快速 的萃取過程。
[0004] 當(dāng)水溶液樣品加樣到固定的聚丙烯注射管中的煅燒硅藻土上后，經(jīng)過一定時(shí)間 (一般分為幾分鐘），水相溶液以一層薄薄的液膜形式分布在填料表面，之后，將有機(jī)溶劑 從柱管上端加入，當(dāng)互不相溶的兩相在硅藻土表面接觸的同時(shí)萃取立即發(fā)生，最后萃取液 在重力作用下流出，必要情況下，可以施加較小的壓力，而水相保留在介質(zhì)中。盛接的流出 液直接將溶劑吹干，復(fù)溶后，即可用于下一步分析檢測。
[0005] 現(xiàn)有的國標(biāo)和現(xiàn)有公開的文獻(xiàn)并未涉及動(dòng)物飼料中的克侖特羅的分離方法和檢 測方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的在于提供一種分離效率高、操作簡單的高精度檢測飼料中的克侖特 羅含量的方法。
[0007] 本發(fā)明的技術(shù)方案為：一種高精度檢測飼料中的克侖特羅含量的方法，包括以下 步驟：
[0008] 步驟1 :取飼料樣品，加入到緩沖溶液中，經(jīng)過漩渦混合器混合處理后再經(jīng)過離心 處理，取離心處理后的上清液少量；
[0009] 步驟2 :將上清液加入到SLE柱后，靜置2~4分鐘；
[0010] 步驟3 :采用二元洗脫劑對(duì)SLE柱洗脫至少兩次，接收洗脫液，得到含有克侖特羅 的洗脫液；
[0011] 步驟4 :采用高效液相色譜法對(duì)步驟3得到的洗脫液進(jìn)行檢測，所述的高效液相色 譜法的具體參數(shù)為：
[0012] 色譜柱：C18 柱，150mm*3. 9mmID
[0013]柱溫：室溫
[0014] 流動(dòng)相：0. 05%磷酸水溶液和乙腈的混合液，其中0. 05%磷酸水溶液和乙腈的體 積比為100:12;
[0015] 檢測器：UV檢測器；
[0016] 檢測波長：210nm;
[0017]進(jìn)樣量：50yL;
[0018] 其中，所述的緩沖溶液為：Ph范圍為6.0~6.5的磷酸緩沖液，所述的二元洗脫劑 為乙酸乙酯和乙酸甲酯的混合物，其中乙酸乙酯和乙酸甲酯的重量比為1:0.5~1。
[0019] 在上述的高精度檢測飼料中的克侖特羅含量的方法中，所述的飼料樣品為lg，緩 沖溶液為5ml，步驟2中所取的上清液為0. 5ml，所述的步驟3中，每次洗脫時(shí)所用的洗脫劑 為 0? 5ml。
[0020] 在上述的高精度檢測飼料中的克侖特羅含量的方法中，所述的步驟1中，漩渦混 合器混合處理的時(shí)間為0. 5~1. 5分鐘。
[0021] 在上述的高精度檢測飼料中的克侖特羅含量的方法中，所述的步驟1中，所述的 離心處理的具體操作為：將經(jīng)混合處理的溶液在離心機(jī)中以9000~11000轉(zhuǎn)/分鐘的速度 尚心0? 5~1. 5分鐘。
[0022] 在上述的高精度檢測飼料中的克侖特羅含量的方法中，所述的SLE柱為奧秘山東 科技有限公司生產(chǎn)的介質(zhì)液液萃取SLE柱，所述的高效液相色譜法所采用的儀器型號(hào)為 LC-2010型高效液相色譜儀。
[0023] 本發(fā)明的有益效果如下：
[0024] 采用SLE法分離飼料中的克侖特羅分離效率高，本發(fā)明的緩沖溶液能夠有效的分 離樣品中的克侖特羅，二元洗脫劑對(duì)克侖特羅有特別優(yōu)異的萃取效果，可以應(yīng)用于以96孔 板結(jié)構(gòu)為代表的高通量體系。結(jié)合HPLC法分析，本發(fā)明的方案的萃取率為：95.4%，同時(shí)檢 測方法準(zhǔn)確，其誤差范圍符合相關(guān)規(guī)定。
【具體實(shí)施方式】
[0025] 下面結(jié)合【具體實(shí)施方式】，對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案作進(jìn)一步的詳細(xì)說明，但不構(gòu)成對(duì) 本發(fā)明的任何限制。
[0026] 實(shí)施例1
[0027] 步驟1 :取飼料樣品lg，加入到5ml的緩沖溶液中，經(jīng)過漩渦混合器混合處理處理 1分鐘后再經(jīng)過離心處理，取離心處理后的上清液0. 5ml;離心處理的轉(zhuǎn)速為10000轉(zhuǎn)/分 鐘，離心時(shí)間1分鐘。所述的緩沖溶液為：ph為6. 0的磷酸緩沖液。
[0028] 步驟2:將上清液加入到SLE柱后，靜置3分鐘；
[0029] 步驟3 :采用二元洗脫劑對(duì)SLE柱（奧秘山東科技有限公司生產(chǎn)的介質(zhì)液液萃取 SLE柱）洗脫2次，接收洗脫液，得到含有克侖特羅的洗脫液；每次消耗的洗脫劑為0. 5ml， 所述的二元洗脫劑為乙酸乙酯和乙酸甲酯的混合物，乙酸乙酯和乙酸甲酯的重量比1:0. 8。
[0030] 實(shí)施例2
[0031] 步驟1 :取飼料樣品lg，加入到5ml的緩沖溶液中，經(jīng)過漩渦混合器混合處理處理 1分鐘后再經(jīng)過離心處理，取離心處理后的上清液0. 5ml;離心處理的轉(zhuǎn)速為9000轉(zhuǎn)/分 鐘，離心時(shí)間1分鐘。所述的緩沖溶液為：ph為6. 5的磷酸緩沖液。
[0032] 步驟2:將上清液加入到SLE柱后，靜置2分鐘；
[0033] 步驟3 :采用二元洗脫劑對(duì)SLE柱洗脫2次，接收洗脫液，得到含有克侖特羅的洗 脫液；每次消耗的洗脫劑為〇. 5ml，所述的二元洗脫劑為乙酸乙酯和乙酸甲酯的混合物，乙 酸乙酯和乙酸甲酯的重量比1:0. 6。
[0034] 實(shí)施例3
[0035] 步驟1:取飼料樣品lg，加入到5ml的緩沖溶液中，經(jīng)過漩渦混合器混合處理處理 1分鐘后再經(jīng)過離心處理，取離心處理后的上清液0. 5ml;離心處理的轉(zhuǎn)速為9000轉(zhuǎn)/分 鐘，離心時(shí)間1分鐘。所述的緩沖溶液為：ph為6. 3的磷酸緩沖液。
[0036] 步驟2:將上清液加入到SLE柱后，靜置2分鐘；
[0037] 步驟3 :采用二元洗脫劑對(duì)SLE柱洗脫2次，接收洗脫液，得到含有克侖特羅的洗 脫液；每次消耗的洗脫劑為〇. 5ml，所述的二元洗脫劑為乙酸乙酯和乙酸甲酯的混合物，乙 酸乙酯和乙酸甲酯的重量比1:1。
[0038] 標(biāo)準(zhǔn)樣的制備
[0039] 稱取克侖特羅標(biāo)準(zhǔn)品（純度彡99% )0? 1000g，置于100ml容量瓶中，用重量比為 1:0. 8的乙酸乙酯和乙酸甲酯的混合物的溶劑溶解定容，其濃度為1000yg/ml;
[0040] 取上述濃度為1000yg/ml的克侖特羅溶液于100ml容量瓶中，配制成為 0? 100yg/ml、0. 200yg/ml、0. 500yg/ml、1. 000yg/ml、2. 000yg/ml的標(biāo)準(zhǔn)樣。
[0041] 對(duì)比例1
[0042] 與實(shí)施例1大體相同，不同的地方在于，步驟3中，洗脫劑為異丙醇與乙酸乙酯的 混合物，其體積比為40:60。
[0043] 分析：
[0044] 檢測方法具體為：
[0045] 儀器：LC-2010型高效液相色譜儀（日本島津）
[0046]色譜柱：C18柱，150mm*3. 9mmID
[0047] 柱溫：室溫
[0048] 流動(dòng)相：0. 05%磷酸水溶液：乙腈=100:12 ;
[0049] 檢測器：uv檢測器；
[0050]檢測波長：210nm;
[0051]進(jìn)樣量：50yL
[0052] 以 0? 100yg/ml、0. 200yg/ml、0. 500yg/ml、1. 000yg/ml、2. 000yg/ml的標(biāo)準(zhǔn) 樣進(jìn)行測試，回歸方程為Y= 982X+0. 01，R2= 0. 9998,X為待測物濃度，Y為峰面積。
[0053] 以實(shí)施例1所萃取的樣品為待測樣品，待測樣品的具體組分為70wt%玉米、 3〇wt%蛋白質(zhì)伺料，其中蛋白質(zhì)伺料由柏、棉柏和采柏組成，所述柏、棉柏和采柏的重 量比為4 :1.5:0.5。此外，每千克待測組分中還加入有含有10mg克侖特羅的克侖特羅 溶液。
[0054] 待測樣品分為10份，每份lg，采用實(shí)施例1的步驟1所述的方法進(jìn)行操作，每份樣 品平行取出2份0. 5ml的溶液，同一樣品的所取得的兩份0. 5ml的溶液為一組，共10組，每 組的溶液分別按照實(shí)施例1的步驟2-3進(jìn)行操作和按照對(duì)比例1的步驟2-3進(jìn)行操作。共 得到按實(shí)施例1所取得的10份洗脫液A，編號(hào)為A1-A10,和按照對(duì)比例1所取得的10份洗 脫液B，編號(hào)為B1-B10。
[0055] 按照上述檢測方法進(jìn)樣檢測，得到如下的檢測結(jié)果：
[0056]
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種高精度檢測飼料中的克侖特羅含量的方法，其特征在于，包括以下步驟： 步驟1:取飼料樣品，加入到緩沖溶液中，經(jīng)過漩渦混合器混合處理后再經(jīng)過離心處 理，取離心處理后的上清液少量； 步驟2 :將上清液加入到SLE柱后，靜置2~4分鐘； 步驟3 :采用二元洗脫劑對(duì)SLE柱洗脫至少兩次，接收洗脫液，得到含有克侖特羅的洗 脫液； 步驟4 :采用高效液相色譜法對(duì)步驟3得到的洗脫液進(jìn)行檢測，所述的高效液相色譜法 的具體參數(shù)為： 色譜柱：C18 柱，150mm*3. 9mmID 柱溫:室溫 流動(dòng)相：〇. 05%磷酸水溶液和乙腈的混合液，其中0. 05%磷酸水溶液和乙腈的體積比 為 100:12 ; 檢測器：uv檢測器； 檢測波長：210nm; 進(jìn)樣量：50yL; 其中，所述的緩沖溶液為：Ph范圍為6. 0~6. 5的磷酸緩沖液，所述的二元洗脫劑為乙 酸乙酯和乙酸甲酯的混合物，其中乙酸乙酯和乙酸甲酯的重量比為1:0. 5~1。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的高精度檢測飼料中的克侖特羅含量的方法，其特征在于，所 述的飼料樣品為lg，緩沖溶液為5ml，步驟2中所取的上清液為0. 5ml，所述的步驟3中，每 次洗脫時(shí)所用的洗脫劑為〇. 5ml。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的高精度檢測飼料中的克侖特羅含量的方法，其特征在于，所 述的步驟1中，漩渦混合器混合處理的時(shí)間為0. 5~1. 5分鐘。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的高精度檢測飼料中的克侖特羅含量的方法，其特征在于，所 述的步驟1中，所述的離心處理的具體操作為：將經(jīng)混合處理的溶液在離心機(jī)中以9000~ 11000轉(zhuǎn)/分鐘的速度離心0. 5~1. 5分鐘。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1至4任一所述的高精度檢測飼料中的克侖特羅含量的方法，其特征 在于，所述的SLE柱為奧秘山東科技有限公司生產(chǎn)的介質(zhì)液液萃取SLE柱，所述的高效液相 色譜法所采用的儀器型號(hào)為LC-2010型高效液相色譜儀。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種高精度檢測飼料中的克侖特羅含量的方法，包括以下步驟：步驟1：取飼料樣品，加入到緩沖溶液中，經(jīng)過漩渦混合器混合處理后再經(jīng)過離心處理，取離心處理后的上清液少量；步驟2：將上清液加入到SLE柱后，靜置2～4分鐘；步驟3：采用二元洗脫劑對(duì)SLE柱洗脫至少兩次，接收洗脫液，得到含有克侖特羅的洗脫液，步驟4：采用高效液相色譜法對(duì)步驟3得到的洗脫液進(jìn)行檢測。本發(fā)明的目的在于提供一種分離效率高、操作簡單的高精度檢測飼料中的克侖特羅含量的方法。
【IPC分類】G01N30-06, G01N30-02
【公開號(hào)】CN104820036
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510239846
【發(fā)明人】陳學(xué)松, 吳嵐, 鄧水德, 賴秀梅, 蔡姬靈
【申請(qǐng)人】廣西壯族自治區(qū)梧州食品藥品檢驗(yàn)所
【公開日】2015年8月5日
【申請(qǐng)日】2015年5月12日