高精度測量飼料中的萊克多巴胺、克侖特羅、沙丁胺醇含量的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001 ] 本發(fā)明涉及動物組織和排泄物的檢測領(lǐng)域，特別是一種高精度測量飼料中的萊克多巴胺、克侖特羅、沙丁胺醇含量的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]樣品前處理是分析檢測過程的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，是濃縮被測定的痕量組分，提高方法的靈敏度，及除去對分析系統(tǒng)有干擾的物質(zhì)的重要手段。萃取是從樣品集體中分離出目標(biāo)化合物的一項技術(shù)，是樣品預(yù)處理中最重要的方法之一。目前，液液萃取仍然是應(yīng)用最廣泛的樣品制備方法之一，但是，傳統(tǒng)的液液萃取的操作繁瑣費時、有機(jī)溶劑消耗量大，而且容易出現(xiàn)乳化現(xiàn)象的缺陷，使得在實際應(yīng)用中具有一定的局限性。
[0003]1998年，科學(xué)家提出了在傳統(tǒng)的液液萃取的基礎(chǔ)上，利用一種具有吸附性和較大的比表面積的惰性多空填料作為介質(zhì)，建立的一種新型高效樣品的制備方法-介質(zhì)液液萃取(supported liquid extract1n簡稱SLE)，SLE萃取技術(shù)就是選用一種多孔性惰性材料-煅燒硅藻土作為介質(zhì)，取代分液漏斗，增大了兩相接觸時的作用面積，實現(xiàn)高效、快速的萃取過程。
[0004]當(dāng)水溶液樣品加樣到固定的聚丙烯注射管中的煅燒硅藻土上后，經(jīng)過一定時間(一般分為幾分鐘)，水相溶液以一層薄薄的液膜形式分布在填料表面，之后，將有機(jī)溶劑從柱管上端加入，當(dāng)互不相溶的兩相在硅藻土表面接觸的同時萃取立即發(fā)生，最后萃取液在重力作用下流出，必要情況下，可以施加較小的壓力，而水相保留在介質(zhì)中。盛接的流出液直接將溶劑吹干，復(fù)溶后，即可用于下一步分析檢測。
[0005]農(nóng)業(yè)部1063號公告-6-2008《飼料中13種β —受體激動劑的檢測液相色譜——串聯(lián)質(zhì)譜法》采用陽離子型交換柱來提取飼料中的β —受體激動劑，如何降低上述檢測的用時，提高上述檢測的準(zhǔn)確度是本領(lǐng)域技術(shù)人員需要思考的問題。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明的目的在于提供一種分離效率高、操作簡單的高精度測量飼料中的萊克多巴胺、克侖特羅、沙丁胺醇含量的方法。
[0007]本發(fā)明的技術(shù)方案為:一種高精度測量飼料中的萊克多巴胺、克侖特羅、沙丁胺醇含量的方法，包括以下步驟:
[0008]步驟1:取飼料樣品，加入到緩沖溶液中，經(jīng)過漩渦混合器混合處理0.5?1.5分鐘后再經(jīng)過離心處理，將經(jīng)混合處理的溶液在離心機(jī)中以9000?11000轉(zhuǎn)/分鐘的速度離心0.5?1.5分鐘，取離心處理后的上清液少量；
[0009]步驟2:將上清液加入到SLE柱后，靜置2?4分鐘；
[0010]步驟3:采用三元洗脫劑對SLE柱洗脫至少兩次，接收洗脫液，得到含有萊克多巴胺、克侖特羅、沙丁胺醇的洗脫液；
[0011]步驟4:采用高效液相色譜法對步驟3得到的洗脫液進(jìn)行檢測，并分別繪制萊克多巴胺、克侖特羅、沙丁胺醇的不同濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液的標(biāo)準(zhǔn)回歸曲線，所述的高效液相色譜法的具體參數(shù)為:
[0012]色譜柱:C18柱，150mm*3.9mmID
[0013]柱溫:室溫
[0014]流動相:0.05%磷酸水溶液和乙腈的混合液，其中0.05%磷酸水溶液和乙腈的體積比為100:12 ；
[0015]檢測器:UV檢測器；
[0016]檢測波長:217nm;
[0017]其中，所述的三元洗脫劑為正丁醇、正己烷和乙酸甲酯的混合物，其中，所述的三元洗脫劑由以下重量份組成:
[0018]正丁醇2?4份；
[0019]正己烷2?4份；
[0020]乙酸甲酯2?8份；
[0021]所述的緩沖溶液為:Ph范圍為6.5?7.0的磷酸緩沖液。
[0022]在上述的高精度測量飼料中的萊克多巴胺、克侖特羅、沙丁胺醇含量的方法中，所述的飼料樣品為lg，緩沖溶液為5ml，步驟2中所取的上清液為0.5ml，所述的步驟3中，每次洗脫時所用的洗脫劑為0.5ml。
[0023]在上述的高精度測量飼料中的萊克多巴胺、克侖特羅、沙丁胺醇含量的方法中，所述的SLE柱為奧秘山東科技有限公司生產(chǎn)的介質(zhì)液液萃取SLE柱，液相色譜儀為LC-2010型高效液相色譜儀(日本島津)。
[0024]本發(fā)明的有益效果如下:
[0025]采用SLE法分離飼料中的萊克多巴胺、克侖特羅、沙丁胺醇，采用三元萃取劑可以有效的提高多組分萃取對象的萃取效率，結(jié)合HPLC法可以有效的提高檢測的準(zhǔn)確度和降低檢測用時。
【具體實施方式】
[0026]下面結(jié)合【具體實施方式】，對本發(fā)明的技術(shù)方案作進(jìn)一步的詳細(xì)說明，但不構(gòu)成對本發(fā)明的任何限制。
[0027]實施例1
[0028]步驟1:取飼料樣品lg，加入到5ml的緩沖溶液中，經(jīng)過漩渦混合器混合處理處理I分鐘后再經(jīng)過離心處理，取離心處理后的上清液0.5ml ;離心處理的轉(zhuǎn)速為10000轉(zhuǎn)/分鐘，離心時間I分鐘。所述的緩沖溶液為:ph為6.5的磷酸緩沖液。
[0029]步驟2:將上清液加入到SLE柱后，靜置3分鐘；
[0030]步驟3:采用三元洗脫劑對SLE柱(奧秘山東科技有限公司生產(chǎn)的介質(zhì)液液萃取SLE柱)洗脫兩次，接收洗脫液，得到含有萊克多巴胺、克侖特羅、沙丁胺醇的洗脫液；每次消耗的洗脫劑為0.5ml。
[0031]其中，所述的三元洗脫劑為正丁醇、正己烷和乙酸甲酯的混合物，其中，所述的三元洗脫劑由以下成分組成:
[0032]正丁醇30wt% ；
[0033]正己烷30wt% ；
[0034]乙酸甲酯40wt%。
[0035]實施例2
[0036]步驟1:取飼料樣品lg，加入到5ml的緩沖溶液中，經(jīng)過漩渦混合器混合處理處理I分鐘后再經(jīng)過離心處理，取離心處理后的上清液0.5ml ;離心處理的轉(zhuǎn)速為10000轉(zhuǎn)/分鐘，離心時間I分鐘。所述的緩沖溶液為:ph為7的磷酸緩沖液。
[0037]步驟2:將上清液加入到SLE柱后，靜置4分鐘；
[0038]步驟3:采用三元洗脫劑對SLE柱(奧秘山東科技有限公司生產(chǎn)的介質(zhì)液液萃取SLE柱)洗脫兩次，接收洗脫液，得到含有萊克多巴胺、克侖特羅、沙丁胺醇的洗脫液；每次消耗的洗脫劑為0.5ml。
[0039]其中，所述的三元洗脫劑為正丁醇、正己烷和乙酸甲酯的混合物，其中，所述的三元洗脫劑由以下成分組成:
[0040]正丁醇20wt% ；
[0041]正己烷30wt% ；
[0042]乙酸甲酯50wt%。
[0043]分析:
[0044]檢測方法具體為:
[0045]儀器:LC_2010型高效液相色譜儀(日本島津)
[0046]色譜柱:C18柱，150mm*3.9mmID
[0047]柱溫:室溫
[0048]流動相:0.05%磷酸水溶液:乙腈=100:12 ；
[0049]檢測器:UV檢測器；
[0050]檢測波長:217nm；
[0051]進(jìn)樣量:50μ L
[0052]采用上述的檢測方法分別測量萊克多巴胺、克侖特羅、沙丁胺醇的標(biāo)準(zhǔn)樣，并分別繪制萊克多巴胺、克侖特羅、沙丁胺醇的回歸方程，同時，采用實施例1的樣品按上述參數(shù)進(jìn)行檢測，根據(jù)217nm條件下的萊克多巴胺、克侖特羅、沙丁胺醇的回歸方程測定萊克多巴胺、克侖特羅、沙丁胺醇的含量，其中，沙丁胺醇出峰時間為7.2min，萊克多巴胺出峰時間為9.3min，克侖特羅的出峰時間為10.2min。
[0053]以上所述的僅為本發(fā)明的較佳實施例，凡在本發(fā)明的精神和原則范圍內(nèi)所作的任何修改、等同替換和改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
【主權(quán)項】
1.一種高精度測量飼料中的萊克多巴胺、克侖特羅、沙丁胺醇含量的方法，其特征在于，包括以下步驟: 步驟1:取飼料樣品，加入到緩沖溶液中，經(jīng)過漩渦混合器混合處理0.5?1.5分鐘后再經(jīng)過離心處理，將經(jīng)混合處理的溶液在離心機(jī)中以9000?11000轉(zhuǎn)/分鐘的速度離心.0.5?1.5分鐘，取離心處理后的上清液少量； 步驟2:將上清液加入到SLE柱后，靜置2?4分鐘； 步驟3:采用三元洗脫劑對SLE柱洗脫至少兩次，接收洗脫液，得到含有萊克多巴胺、克侖特羅、沙丁胺醇的洗脫液； 步驟4:采用高效液相色譜法對步驟3得到的洗脫液進(jìn)行檢測，并分別繪制萊克多巴胺、克侖特羅、沙丁胺醇的不同濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液的標(biāo)準(zhǔn)回歸曲線，所述的高效液相色譜法的具體參數(shù)為: 色譜柱:C18 柱，150mm*3.9mmID 柱溫:室溫 流動相:0.05%磷酸水溶液和乙腈的混合液，其中0.05%磷酸水溶液和乙腈的體積比為 100:12 ； 檢測器:uv檢測器； 檢測波長:217nm ； 其中，所述的三元洗脫劑為正丁醇、正己烷和乙酸甲酯的混合物，其中，所述的三元洗脫劑由以下重量份組成: 正丁醇2?4份； 正己燒2?4份； 乙酸甲酯2?8份； 所述的緩沖溶液為:Ph范圍為6.5?7.0的磷酸緩沖液。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高精度測量飼料中的萊克多巴胺、克侖特羅、沙丁胺醇含量的方法，其特征在于，所述的飼料樣品為lg，緩沖溶液為5ml，步驟2中所取的上清液為.0.5ml，所述的步驟3中，每次洗脫時所用的洗脫劑為0.5ml。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種高精度測量飼料中的萊克多巴胺、克侖特羅、沙丁胺醇含量的方法，包括以下步驟：步驟1：取飼料樣品，加入到緩沖溶液中，經(jīng)過漩渦混合器混合處理后再經(jīng)過離心處理，取離心處理后的上清液少量；步驟2：將上清液加入到SLE柱后，靜置2～4分鐘；步驟3：采用三元洗脫劑對SLE柱洗脫至少兩次，接收洗脫液，得到含有萊克多巴胺、克侖特羅、沙丁胺醇的洗脫液，步驟4：繪制含有萊克多巴胺、克侖特羅、沙丁胺醇的各個標(biāo)準(zhǔn)溶液的線性回歸曲線，并測量步驟3的洗脫液中萊克多巴胺、克侖特羅、沙丁胺醇的含量。本發(fā)明的目的在于提供一種分離效率高、操作簡單的高精度測量飼料中的萊克多巴胺、克侖特羅、沙丁胺醇含量的方法。
【IPC分類】G01N30-06, G01N30-02
【公開號】CN104820037
【申請?zhí)枴緾N201510239853
【發(fā)明人】陳學(xué)松, 陳啟釗, 葉小強(qiáng), 郭振旺, 吳嵐, 鄧水德
【申請人】廣西壯族自治區(qū)梧州食品藥品檢驗所
【公開日】2015年8月5日
【申請日】2015年5月12日