一種蟲草菌粉(Cs-4)及其制劑金水寶膠囊的檢測方法
【技術領域】：
[0001] 本發(fā)明屬于醫(yī)藥領域，涉及一種中藥制劑的檢測方法，特別涉及一種蟲草菌粉 (Cs-4)及其制劑金水寶膠囊的含量測定方法。
【背景技術】：
[0002] 金水寶制劑（如金水寶膠囊）為已經(jīng)上市的產(chǎn)品，由發(fā)酵蟲草菌粉（Cs-4)填充而 得，具有補益肺腎，秘精益氣功能。用于肺腎兩虛，精氣不足，久咳虛喘，神疲乏力，不寐健 忘，腰膝痠軟，月經(jīng)不調，陽瘺早泄；慢性支氣管炎、慢性腎功能不全、高脂血癥、肝硬化見上 述證候者。
[0003]甘露醇、核苷類、麥角留醇、蟲草多糖、氨基酸等被認為是發(fā)酵蟲草菌粉的活性成 分，因此，收載入中國藥典的金水寶片、膠囊和百令膠囊，以及收載入衛(wèi)生部藥品標準的至 靈膠囊、寧心寶膠囊和心肝寶膠囊，均以腺苷或腺苷和甘露醇為含量測定的指標，缺乏各產(chǎn) 品專屬的指標成分。
[0004] 最近，我們從Cs-4發(fā)酵菌絲體中發(fā)現(xiàn)了一種含量高、特征性強的化合物一馬索亞 內酯。有文獻報道，馬索亞內酯有良好的抗真菌、抗病毒、抑制腫瘤等藥理活性，因此可能是 金水寶膠囊中重要的活性成分，且該化合物在其他菌種的發(fā)酵蟲草產(chǎn)品中未被檢出或含量 極低，作為定量測定的指標成分具有很強的專屬性。
[0005] 本發(fā)明建立了蟲草菌粉（Cs-4)及其制劑金水寶膠囊中馬索亞內酯的高效液相色 譜測定法，該方法精確度高，操作簡單，精密度，穩(wěn)定性，重復性良好。

【發(fā)明內容】
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[0006] 本發(fā)明的目的在于提供一種新的蟲草菌粉（Cs-4)及其制劑金水寶膠囊的檢測方 法。為此，本發(fā)明提供一種測定蟲草菌粉（Cs-4)及其制劑金水寶膠囊中馬索亞內酯的方 法。
[0007]本發(fā)明是通過如下技術方案實現(xiàn)的：
[0008] 本發(fā)明為采用高效液相色譜法對蟲草菌粉（CS-4)及其制劑金水寶膠囊中含有的 馬索亞內酯進行含量測定。所述方法包括以下步驟：
[0009] 供試品溶液的制備：取裝量差異項下的本品內容物，置于離心管中，加入甲醇溶 液，密塞，超聲提取，離心，將上清液轉移至量瓶。殘渣重復上述提取過程，合并上清液，以甲 醇溶液定容。取適量，過0. 45um微孔濾膜，取濾液作為供試品溶液。
[0010] 對照品溶液的制備：精密稱取馬索亞內酯對照品，置于量瓶中，以甲醇溶解并定 容，得對照品溶液。
[0011] 測定法：分別精密吸取對照品溶液及供試品溶液，注入液相色譜儀，測定得到色 譜圖，根據(jù)色譜圖計算馬索亞內酯的含量。
[0012] 其中色譜條件如下：色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-磷酸水 溶液為流動相，等度洗脫。
[0013] 優(yōu)選的，本發(fā)明的含量測定方法。包括以下步驟：
[0014] 供試品溶液的制備：取裝量差異項下的本品內容物，混勻，取約0.l_2g，精密稱 定，置于l〇-5〇ml的離心管中，加入2-50ml20-100%的甲醇溶液，密塞，超聲提取5-60min， 4500rmp/min下離心2-30min，將上清液轉移至10-200ml量瓶。殘澄重復上述提取過程兩 次，合并上清液，以20-100%的甲醇定容。取適量，過0. 45um微孔濾膜，取濾液作為供試品 溶液。
[0015] 對照品溶液的制備：精密稱取0. 001-0.lg馬索亞內酯對照品，置于2-100ml量瓶 中，以80%甲醇溶解并定容，得對照品儲備液。分別吸取適量的對照品儲備液，以20-100% 甲醇稀釋得到不同濃度的系列對照溶液，備用。
[0016] 測定法：分別精密吸取對照品溶液及供試品溶液，注入液相色譜儀，測定得到色 譜圖，根據(jù)色譜圖計算馬索亞內酯的含量。
[0017] 其中色譜條件如下：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，其柱長為10-50cm，內徑 為2-8mm，粒徑為2-10ym;以乙腈：0. 01-0. 5 %磷酸水溶液（50:50)為流動相，等度洗脫； 檢測波長為200-260nm;流速為0. 5-1.Oml/min;進樣量為2-50ul;柱溫為10-30°C。理論 板數(shù)按馬索亞內酯峰計算應不低于2000-6000。
[0018] 最優(yōu)選的，本發(fā)明的含量測定方法。包括以下步驟：
[0019] 供試品溶液的制備：取裝量差異項下的本品內容物，混勻，取約0. 5g，精密稱定， 置于5〇1111的離心管中，加入1〇111180%的甲醇溶液，密塞，超聲提取1〇111；[11，45001'11^/111；[11下 離心5min，將上清液轉移至50ml量瓶。殘渣重復上述提取過程兩次，合并上清液，以80% 的甲醇定容。取適量，過0. 45um微孔濾膜，取濾液作為供試品溶液。
[0020] 對照品溶液的制備：精密稱取0.Olg馬索亞內酯對照品，置于10ml量瓶中，以 80%甲醇溶解并定容，得濃度為1000yg/mL的對照品儲備液。分別吸取適量的對照品儲備 液，以80%甲醇稀釋得到不同濃度的系列對照溶液，備用。
[0021] 測定法：分別精密吸取對照品溶液及供試品溶液10y1，注入液相色譜儀，測定得 到色譜圖，根據(jù)色譜圖計算馬索亞內酯的含量。
[0022] 其中色譜條件如下：照中華人民共和國藥典2010年版附錄VID高效液相色譜法 試驗，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，其柱長為25cm，內徑為4. 6mm，粒徑為5ym;以 乙腈-0. 1 %磷酸水溶液（50:50)為流動相，等度洗脫；檢測波長為206nm;流速為1. 0ml/ min;進樣量為10ul;柱溫為30°C。理論板數(shù)按馬索亞內酯峰計算應不低于2500。
[0023] 其中，本品內容物是指：金水寶膠囊殼內的物質。
[0024] 其中，馬索亞內酯屬于現(xiàn)有產(chǎn)品，可以在上市場購買到。
[0025] 其中，續(xù)濾液是指：先被過濾下來的濾液稱為初濾液，此時的濾液純凈度不夠，棄 去，把初濾液倒掉之后繼續(xù)采集到的濾液，就是續(xù)濾液。
[0026] 本發(fā)明的測定方法是經(jīng)過篩選獲得的，篩選過程如下：
[0027] 1提取條件的選擇
[0028] 1. 1提取方法的選擇
[0029] 由于馬索亞內酯的揮發(fā)性較強，本發(fā)明采用提取溫度較低的索氏提取和超聲輔助 法提取金水寶膠囊中的馬索亞內酯。通過比較發(fā)現(xiàn)，超聲輔助提取法的提取效率略高于索 氏提取法，且索氏提取法操作繁瑣，提取時間長，因此選用超聲輔助提取法。
[0030] 1.2提取溶劑的選擇
[0031] 考察了正己烷、二氯甲烷、甲醇作為提取溶劑時的提取效果，結果表明，甲醇對馬 索亞內酯的提取效率最高。又比較了不同濃度的甲醇的提取效率，發(fā)現(xiàn)80 %甲醇水溶液作 為提取溶劑時，提取效果最佳。
[0032] 1. 3提取次數(shù)的選擇
[0033] 超聲時間對馬索亞內酯的提取效率影響不大，從節(jié)省時間的角度考慮，選擇超聲 時間為lOmin。超聲提取次數(shù)增加，馬索亞內酯的提取效率提高，但達3次后，馬索亞內酯的 提取效率不再提高，因此選擇超聲提取次數(shù)為3次。
[0034] 2色譜條件的優(yōu)化
[0035] 2.1流動相的選擇
[0036] 選用甲醇-水、乙腈-水為流動相，并在流動相中添加磷酸，結果表明，乙腈_0. 1% 磷酸水溶液（50:50)為流動相時，馬索亞內酯峰型對稱，峰寬更窄。
[0037] 2. 2檢測波長的選擇
[0038] 馬索亞內酯僅有紫外末端吸收，因此選擇檢測波長為206nm。
[0039] 3線性關系考