一種稻米絕對直鏈淀粉含量的測定方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及食品檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種稻米絕對直鏈淀粉含量的測定方法。
【背景技術(shù)】
[0002]精米的90%的干物質(zhì)是淀粉。淀粉根據(jù)其化學(xué)結(jié)構(gòu)可分為直鏈淀粉和枝鏈淀粉兩種。直鏈淀粉能與碘在水溶液中生成穩(wěn)定的復(fù)合物，此復(fù)合物內(nèi)直鏈淀粉的6個葡萄糖基形成一個螺旋體，里面結(jié)合一個碘分子；其中的碘藍(lán)度與直鏈淀粉含量高度相關(guān)。正是基于這個原理，早在1943年McCready和Hassid就提出碘藍(lán)比色法測定水稻直鏈淀粉含量，用純直、支鏈混標(biāo)法做標(biāo)樣。隨后1958年，Williams報道在堿性條件下用590 nm碘比色法測定脫脂直鏈淀粉含量，并改為用馬鈴薯直鏈淀粉做標(biāo)樣，但該方法中碘在堿性溶液中不穩(wěn)定，結(jié)果重現(xiàn)性差。1971年，Sowbhagya和Bhattacharya建議調(diào)整溶液的pH至8.0，從而提高結(jié)果的重復(fù)性。同年，國際水稻研宄所的Juliano提出了“簡化法”，此法不同于“Williams”法，一是波長提高到620 nm，二是樣品不經(jīng)脫脂處理，三是用乙酸溶液調(diào)介質(zhì)至酸性，結(jié)果的重現(xiàn)性較好且測定步驟少，但由于枝鏈淀粉中的長鏈B也會結(jié)合碘而顯色，枝鏈淀粉對直鏈淀粉含量的影響很難消除，因此這方法測定的直鏈淀粉含量后被定義為表觀直鏈淀粉含量。
[0003]長期以來，稻米表觀直鏈淀粉含量曾被認(rèn)為是決定稻米蒸煮食味品質(zhì)的關(guān)鍵指標(biāo)之一，直鏈淀粉含量較高的稻米，其米飯硬而蓬松；反之則軟而粘。但隨育成品種遺傳組成的多樣化，表觀直鏈淀粉含量相似(尤其是中高直鏈淀粉含量)而米飯質(zhì)地相去甚遠(yuǎn)的現(xiàn)象日益普遍。因此，絕對直鏈淀粉含量指標(biāo)的重要性也日益凹顯。絕對直鏈淀粉的測定是由液相色譜或凝膠滲透色譜儀(GPC)測定，樣品前處理步驟復(fù)雜，要經(jīng)過樣品脫脂去蛋白，后要糊化，異淀粉酶去分枝化等處理，樣品上機(jī)測定時間也較長，這樣品前處理的成本和儀器的費(fèi)用均較高，因此作為實(shí)驗(yàn)室常規(guī)測定有較大的難度，很難推廣應(yīng)用。2008年公布了國家標(biāo)準(zhǔn)GB/T15683-2008/IS06647-1:2007)是同等采用國際標(biāo)準(zhǔn)IS06647-1的第二推薦方法，此方法采用了脫脂脫蛋白前處理，用馬鈴薯直鏈淀粉和糯米粉直鏈淀粉兩標(biāo)樣來配比系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。由于此方法，樣品需要脫脂脫蛋白，過程繁復(fù)，且易影響樣品原淀粉性狀，且直鏈淀粉和枝鏈淀粉不同批次均會出現(xiàn)純度不同，進(jìn)而影響直鏈淀粉含量測定的重復(fù)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的是為了解決目前對直鏈淀粉含量的測定存在的比較復(fù)雜且成本較高的問題，提供一種稻米絕對直鏈淀粉含量的測定方法。本發(fā)明采用81個不同水稻品種米粉，經(jīng)GPC測得絕對直鏈淀粉含量，并在經(jīng)典碘藍(lán)比色法中簡易樣品前處理，采用新的標(biāo)準(zhǔn)樣品等，并與已測得絕對直鏈淀粉含量結(jié)果進(jìn)行比較，提出了測定絕對直鏈淀粉含量的簡易方法，使之能用于實(shí)驗(yàn)室快速低成本準(zhǔn)確測定此指標(biāo)。
[0005]為了達(dá)到上述發(fā)明目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案: 一種稻米絕對直鏈淀粉含量的測定方法，具體包括以下步驟:
(1)標(biāo)樣準(zhǔn)備:標(biāo)定四個水稻米粉標(biāo)樣在720nm處的直鏈淀粉含量；
(2)樣品準(zhǔn)備:采用碾精率為90%的精米磨成粒徑為0.42-0.59mm的米粉；(此處的碾精率為糙米得到精米的比率)
(3)試劑配制:配制濃度為0.8-1.0mol/L氫氧化鈉溶液，1.0mol/L的乙酸溶液和標(biāo)準(zhǔn)碘試劑溶液；
(4)樣品和標(biāo)樣的糊化:將樣品和標(biāo)樣進(jìn)行糊化并干燥后加蒸餾水定容；
(5)空白溶液準(zhǔn)備:用2.5mL 0.09mol/L氫氧化鈉替代樣品；
(6)標(biāo)樣和樣品的顯色:準(zhǔn)確移取2.5 mL四個標(biāo)樣和樣品溶液到50 mL容量瓶，加入0.5 mL lmol/L乙酸和1.0 mL標(biāo)準(zhǔn)碘試劑溶液，加水至刻度，搖勻，靜置10分鐘；
(7)比色:用步驟(5)的空白溶液調(diào)零，用分光光度計(jì)在720nm處測定標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣品的吸光度；
(8)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線:以吸光度為縱坐標(biāo)，已標(biāo)定得到的直鏈淀粉含量為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到相關(guān)系數(shù)和線性計(jì)算公式；
(9)樣品絕對直鏈淀粉含量計(jì)算:樣品吸光值代入步驟(8)得到的線性公式而計(jì)算得到測定的絕對直鏈淀粉含量。
[0006]作為優(yōu)選，所述步驟(I)的具體步驟為:
1)選定糯稻、低、中、高梯度的絕對直鏈淀粉含量的四個米粉標(biāo)樣；
2)標(biāo)樣經(jīng)甲醇脫脂和經(jīng)蛋白酶脫蛋白成淀粉；
3)用純馬鈴薯直鏈淀粉和糯稻純枝鏈淀粉配比成0%、10%、20%、25%、30%和35%含量的直鏈淀粉作為標(biāo)準(zhǔn)曲線；
4)稱取50mg±0.2 mg標(biāo)樣淀粉，用0.5 mL濃度的95%乙醇分散試樣，加入4.5mL的
1.0mol/L的氫氧化鈉，放入40°C ± 1°C烘箱12小時，進(jìn)行糊化，糊化后定容至50mL，搖勻；
5)空白溶液制備:用2.5 mL濃度0.09mol/L的氫氧化鈉替代樣品；
6)準(zhǔn)確吸取2.5 mL標(biāo)準(zhǔn)溶液到50 mL容量瓶，加入0.5 mL的濃度為1.0 mol/L的乙酸和1.0mL標(biāo)準(zhǔn)碘試劑溶液，加水至刻度，搖勻，靜置10分鐘；
7)以0%、10%、20%、25%、30%和35%系列標(biāo)準(zhǔn)的直鏈淀粉含量為橫坐標(biāo)，以吸光值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到線性方程，四個標(biāo)樣以測得的在720nm吸光度值，由線性方程而算得絕對直鏈淀粉含量值。
[0007]作為優(yōu)選，所述步驟(4)具體為:稱樣量為50±0.2 mg，加入0.5ml的95%乙醇潤濕樣品后，加入4.5mL的1.0mol/L氫氧化鈉溶液，放入烘箱在40°C ±2°C烘干10-12小時，取出冷卻后加蒸餾水定容至50mL并搖勻。
[0008]作為優(yōu)選，所述步驟(3)標(biāo)準(zhǔn)碘試劑溶液的配制為:用稱量瓶稱取2.000 g 士0.005 g腆化餌，加適量的水以形成飽和溶液，加入0.200±0.0Olg碘，碘全部溶解后將溶液定量移至100 mL容量瓶中，加蒸餾水至刻度，搖勻。
[0009]為了能簡易準(zhǔn)確測定水稻米粉絕對直鏈淀粉含量，克服現(xiàn)有GPC測定方法的高成本和前處理的繁復(fù)，并簡化國家標(biāo)準(zhǔn)GB/T15683-2008/IS06647-1:2007方法中樣品和標(biāo)樣的脫脂脫蛋白的繁瑣。本發(fā)明提供了快速低成本易操作的方法。本研宄采用已標(biāo)定好絕對直鏈淀粉含量的四個水稻米粉標(biāo)樣，簡易樣品前處理步驟，并與經(jīng)GPC測得的81個不同水稻品種的絕對直鏈淀粉含量比較驗(yàn)證，使之能準(zhǔn)確測定米粉的絕對直鏈淀粉含量，所提出的方法具有低成本快速、高效，在水稻品質(zhì)改良種材料的快速篩選有良好的應(yīng)用前景。
[0010]本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，有益效果是:
本發(fā)明通過已標(biāo)定得到的確定絕對直鏈淀粉含量的四個水稻米粉為標(biāo)樣，樣品不經(jīng)脫脂和脫蛋白處理，在經(jīng)堿糊化后碘藍(lán)顯色后，在720nm處比色，并參照標(biāo)樣線性方程計(jì)算而得絕對直鏈淀粉含量值。本發(fā)明的檢測過程具有操作簡單，綠色環(huán)保，成本低，重復(fù)性好。
【具體實(shí)施方式】
[0011]下面通過具體實(shí)施例對本發(fā)明的技術(shù)方案作進(jìn)一步描述說明。
[0012]如果無特殊說明，本發(fā)明的實(shí)施例中所采用的原料均為本領(lǐng)域常用的原料，實(shí)施例中所采用的方法，均為本領(lǐng)域的常規(guī)方法。
[0013]實(shí)施例1:
一種稻米絕對直鏈淀粉含量的測定方法，具體包括以下步驟:
(1)標(biāo)樣準(zhǔn)備:標(biāo)定四個水稻米粉標(biāo)樣在720nm處的直鏈淀粉含量；
標(biāo)樣準(zhǔn)備的具體步驟為:
1)選定糯稻、低、中、高梯度的絕對直鏈淀粉含量的四個米粉標(biāo)樣；
2)標(biāo)樣經(jīng)甲醇脫脂和經(jīng)蛋白酶脫蛋白成淀粉；
3)用純馬鈴薯直鏈淀粉和糯稻純枝鏈淀粉配比成0%、10%、20%、25%、30%和35%含量的直鏈淀粉作為標(biāo)準(zhǔn)曲線；
4)稱取50mg±0.2 mg標(biāo)樣淀粉，用0.5 mL濃度的95%乙醇分散試樣，加入4.5mL的
1.0mol/L的氫氧化鈉，放入40°C ± 1°C烘箱12小時，進(jìn)行糊化，糊化后定容至50mL，搖勻；
5)空白溶液制備:用2.5 mL濃度0.09mol/L的氫氧化鈉替代樣品；
6)準(zhǔn)確吸取2.5 mL標(biāo)準(zhǔn)溶液到50 mL容量瓶，加入0.5 mL的濃度為1.0 mol/L的乙酸和標(biāo)準(zhǔn)碘試劑溶液，加水至刻度，搖勻，靜置10分鐘；(用稱量瓶稱取2.000 g 士 0.005 g腆化餌，加適量的水以形成飽和溶液，加入0.200±0.0Olg碘，碘全部溶解后將溶液定量移至100 mL容量瓶中，加蒸餾水至刻度，搖勻。)
7)以0%、10%、20%、25%、30%和35%系列標(biāo)準(zhǔn)的直鏈淀粉含量為橫坐標(biāo)，以吸光值