染或前期感染，治療或者未治療，對(duì)梅毒患者 的檢測(cè)和篩查具有重要的臨床價(jià)值和社會(huì)效益。
【附圖說明】
[0058]圖1:為金箔芯片點(diǎn)樣布陣圖；其中陰性對(duì)照是指PBST空白對(duì)照；陰性血清是指 臨床確診未感染梅毒螺旋體的健康人的血清；陽性血清是指臨床確診為感染梅毒螺旋體的 梅毒患者的血清。
[0059] 圖2 :為原子力顯微鏡掃描清洗后未進(jìn)行化學(xué)修飾前金箔芯片平面表征；
[0060] 圖3 :原子力顯微鏡掃描進(jìn)行化學(xué)修飾后金箔芯片平面表征；
[0061] 圖4:梅毒螺旋體重組抗原rTpN15-17-47在芯片上包被時(shí)間和溫度對(duì)熒光強(qiáng)度的 影響；其中，圖4A為相同濃度的rTpN15-17-47在芯片上包被不同時(shí)間和不同溫度所得熒光 掃描圖；圖4B為rTpN15-17-47在芯片上包被不同時(shí)間和不同溫度所得熒光強(qiáng)度曲線圖。
[0062] 圖5 :梅毒螺旋體重組抗原rTpN15-17_47濃度梯度對(duì)熒光強(qiáng)度的影響；其中，圖 5A為不同濃度rTpN15-17-47在芯片上包被相同時(shí)間和相同溫度所得熒光掃描圖；圖5B為 不同濃度rTpN15-17-47在芯片上包被相同時(shí)間和相同溫度所得熒光強(qiáng)度曲線圖。
[0063]圖6:抗梅毒抗體濃度梯度對(duì)熒光強(qiáng)度的影響；其中，圖6A為采用不同濃度抗梅毒 抗體包被進(jìn)行檢測(cè)時(shí)所得熒光掃描圖；圖6B為采用不同濃度抗梅毒抗體包被進(jìn)行檢測(cè)時(shí) 所得熒光強(qiáng)度曲線圖。
[0064] 圖7 :Cy3標(biāo)記的熒光二抗?jié)舛忍荻葘?duì)熒光強(qiáng)度的影響；其中，圖7A為采用不同濃 度Cy3標(biāo)記的熒光二抗進(jìn)行檢測(cè)時(shí)所得熒光掃描圖；圖7B為采用不同濃度Cy3標(biāo)記的熒光 二抗進(jìn)行檢測(cè)時(shí)所得熒光強(qiáng)度曲線圖。
[0065] 圖8 :可重復(fù)性實(shí)驗(yàn)檢測(cè)圖。
[0066] 圖9 :梅毒患者與對(duì)照組血清稀釋度對(duì)熒光強(qiáng)度的影響；其中，圖9A:上面3排是 病例組（任取3例病例組），下面3排是對(duì)照組（任取3例對(duì)照組）；圖9B:計(jì)算病例組熒 光平均值與對(duì)應(yīng)稀釋度對(duì)照組熒光平均值的比值。
[0067]圖10:梅毒患者樣本IgG和IgM檢測(cè)圖；其中，圖10A為梅毒患者樣本IgM檢測(cè)圖； 圖10B為梅毒患者樣本IgG檢測(cè)圖。
【具體實(shí)施方式】
[0068] 以下通過特定的具體實(shí)例說明本發(fā)明的實(shí)施方式，本領(lǐng)域技術(shù)人員可由本說明書 所揭露的內(nèi)容輕易地了解本發(fā)明的其他優(yōu)點(diǎn)與功效。本發(fā)明還可以通過另外不同的具體實(shí) 施方式加以實(shí)施或應(yīng)用，本說明書中的各項(xiàng)細(xì)節(jié)也可以基于不同觀點(diǎn)與應(yīng)用，在沒有背離 本發(fā)明的精神下進(jìn)行各種修飾或改變。
[0069] 須知，下列實(shí)施例中未具體注明的工藝設(shè)備或裝置均采用本領(lǐng)域內(nèi)的常規(guī)設(shè)備或 裝置；所有壓力值和范圍都是指絕對(duì)壓力。
[0070] 此外應(yīng)理解，本發(fā)明中提到的一個(gè)或多個(gè)方法步驟并不排斥在所述組合步驟前后 還可以存在其他方法步驟或在這些明確提到的步驟之間還可以插入其他方法步驟，除非另 有說明；還應(yīng)理解，本發(fā)明中提到的一個(gè)或多個(gè)設(shè)備/裝置之間的組合連接關(guān)系并不排斥 在所述組合設(shè)備/裝置前后還可以存在其他設(shè)備/裝置或在這些明確提到的兩個(gè)設(shè)備/裝 置之間還可以插入其他設(shè)備/裝置，除非另有說明。而且，除非另有說明，各方法步驟的編 號(hào)僅為鑒別各方法步驟的便利工具，而非為限制各方法步驟的排列次序或限定本發(fā)明可實(shí) 施的范圍，其相對(duì)關(guān)系的改變或調(diào)整，在無實(shí)質(zhì)變更技術(shù)內(nèi)容的情況下，當(dāng)亦視為本發(fā)明可 實(shí)施的范疇。
[0071] 本發(fā)明各實(shí)施例原材料的來源與準(zhǔn)備如下：
[0072] 1.金箔芯片來源：
[0073]本發(fā)明所用金箔芯片來自Interactiva公司（德國(guó)，烏爾姆），其基底為玻璃片，其 上覆蓋一層l〇nm厚度的純金（純度99. 9% )，金箔之上為一區(qū)域化的50ym的TEFLON膜 的陣列（96孔*2,8行*12列），陣列孔徑為1. 25mm，如圖1所示。
[0074] 2.金箔芯片表面化學(xué)修飾試劑：
[0075] 修飾液：濃度為4.OmM的二硫雙（琥珀酰亞氨基^^一酸酯）（DSU)的二甲基亞砜 (DMS0溶液。[二硫雙（琥珀酰亞氨基^^一酸酯）購(gòu)自日本D0JIND0公司，二甲基亞砜購(gòu) 自美國(guó)SIGMA-ALDRICH公司）。
[0076] 3?抗原、抗體、焚光素類
[0077] 梅毒螺旋體重組抗原rTpN15-17_47、多克隆兔抗梅毒螺旋體重組抗原IgG抗體購(gòu) 自MYBI0S0URCE公司；Cy3標(biāo)記山羊抗兔IgG抗體、Cy3標(biāo)記驢抗人IgG抗體購(gòu)自Sangon 公司；Cy5標(biāo)記山羊抗人IgM抗體購(gòu)自KPL公司；磷酸緩沖液（PBS)、Tween20及胎牛血清 (BSA)均購(gòu)自SIGMA-ALDRICH公司。
[0078] 4.PBST溶液：
[0079] 是由磷酸緩沖液PBS與0? 01MTween20混合構(gòu)成。
[0080] .PBS-T配制：PBS-包溶解在1000ml去離子水中，然后加入1mlTween-20,混勻， 平放在搖床上過夜。PBS:0? 01M，PH7. 2-7. 4 ;Tween-20 :0? 1% (v/v) 〇
[0081] 5.PBST-BSA溶液：
[0082] 是由磷酸緩沖液PBS、0. 01MTween20及0? 1%胎牛血清BSA混合構(gòu)成。
[0083]PBS-T-BSA溶液配制：取 50y1BSA(200mg/ml)于 10mlPBST溶液中，震蕩，靜置。 得PBST-BSA溶液（需BSA質(zhì)量濃度是0? 1 % (w/v))。
[0084] 實(shí)施例1、金箔芯片表面化學(xué)修飾
[0085] 步驟1 :金箔芯片的清洗
[0086] 配制TL1溶液（H20 :H202:NH3 ?H20 = 5:1:1，體積比）倒入不銹鋼盒中，將金箔芯 片放入盒中，82°C水浴6min，去離子水沖洗4-5次，乙醇2次，每次3min;氮?dú)怙L(fēng)干，干燥保 存。
[0087]步驟2:對(duì)清洗后金箔芯片進(jìn)行表面化學(xué)修飾，獲得固相載體
[0088]將修飾液DSU點(diǎn)在清洗后的金箔芯片上（每點(diǎn)0. 85y1)，黑暗條件下室溫，濕盒中 孵育2h。用丙酮清洗5次，每次4分鐘；然后再用PBS(PH7. 4)溶液清洗3次，每次2分鐘。 氮?dú)飧稍?，得固相載體，待用。
[0089] 圖2和圖3分別為利用原子力顯微鏡（AFM)觀察金箔芯片在DSU修飾前后表征情 況?？梢钥闯?，DSU修飾后的平面表面較修飾前的平面表面更為粗糙，表示經(jīng)修飾后，化學(xué) 基團(tuán)共價(jià)連接到金箔芯片表面上。
[0090] 實(shí)施例2、質(zhì)控實(shí)驗(yàn)
[0091] 制備孵育液1:將梅毒螺旋體重組抗原rTpN15-17-47溶于PBST-BSA溶液，配 置成濃度梯度為 200yg/mL，100yg/mL，50yg/mL，25yg/mL，12. 5yg/mL，6. 25yg/mL， 3. 13yg/mL，1. 56yg/mL，0? 78yg/mL，0? 39yg/mL，0? 19yg/mL的溶液。
[0092] 制備孵育液2 :將多克隆兔抗梅毒抗原（rTpN15-17-47)IgG抗體溶于PBST-BSA 溶液，配置成抗體濃度梯度為 200yg/mL，100yg/mL，50yg/mL，25yg/mL，12. 5yg/mL， 6. 25yg/mL，3. 13yg/mL，1. 56yg/mL，0? 78yg/mL，0? 39yg/mL，0? 19yg/mL的溶液。
[0093] 制備孵育液3 :將Cy3標(biāo)記山羊抗兔IgG抗體溶于PBST-BSA溶液，配置成熒光二 抗?jié)舛忍荻葹?5yg/mL，2. 5yg/mL，1. 25yg/mL，0? 625yg/mL，0? 313yg/mL，0? 156yg/mL， 0? 078.yg/mL，0? 039yg/mL，0? 019yg/mL的溶液。
[0094] 制備孵育液4 :將Cy3標(biāo)記驢抗人IgG抗體溶于PBST-BSA溶液，配置成熒光二抗 濃度梯度為5yg/mL，2. 5yg/mL的溶液。
[0095] 制備孵育液5 :將Cy3標(biāo)記驢抗人IgG抗體和Cy5標(biāo)記山羊抗人IgM抗體等量溶 于PBST-BSA溶液，配置成熒光二抗?jié)舛忍荻葹?yg/mL，2. 5yg/mL的Cy3標(biāo)記驢抗人IgG 抗體和Cy5標(biāo)記山羊抗人IgM抗體混合溶液。
[0096] 1、抗原孵育溫度_時(shí)間質(zhì)控實(shí)驗(yàn)
[0097]將50yg/mL的梅毒螺旋體重組抗原rTpN15-17-47溶液點(diǎn)到實(shí)施例1完成表面 DSU化學(xué)修飾的金箔芯片固相載體上，分別在37°C，室溫（25°C)和4°C條件下孵育16小 時(shí)、8小時(shí)、4小時(shí)、2小時(shí)、1小時(shí)和0小時(shí)，取出用PBST清洗3次，每次2分鐘，氮?dú)獯蹈桑?再將濃度為50yg/mL的多克隆兔抗梅毒抗原IgG抗體溶液點(diǎn)樣于孵育有梅毒螺旋體重組 抗原rTpN15-17-47探針的固相載體之上，室溫（25°C)條件下孵育1小時(shí)，取出用PBST清 洗3次，每次2分鐘，氮?dú)獯蹈?。再將稀釋濃度?. 5yg/mL的Cy3標(biāo)記山羊抗兔抗IgG抗 體溶于PBST-BSA溶液點(diǎn)樣于孵育有抗體的固相載體之上，黑暗室溫孵育0. 5小時(shí)，取出用 PBST-BSA清洗3次，每次2分鐘，氮?dú)獯蹈伞?br>[0098] 采用芯片掃描儀對(duì)固相載體進(jìn)行掃描，即為抗原孵育溫度-時(shí)間的質(zhì)控實(shí)驗(yàn)，結(jié) 果顯示如圖4所示。其中，圖4A為相同濃度的rTpN15-17-47在芯片上包被不同時(shí)間和不 同溫度所得熒光掃描圖；圖4B為rTpN15-17-47在芯片上包被不同時(shí)間和不同溫度所得熒 光強(qiáng)度曲線圖。
[0099] 從圖中可以看出：
[0100] (1)熒光強(qiáng)度隨著孵育時(shí)間的延長(zhǎng)而延長(zhǎng)，當(dāng)孵育時(shí)間大于1小時(shí)，熒光強(qiáng)度隨