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一種α-巖藻糖苷酶測定液體單一試劑的制作方法

文檔序號:8542452閱讀:605來源:國知局
一種α-巖藻糖苷酶測定液體單一試劑的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及醫(yī)學檢驗技術(shù)領(lǐng)域,具體設(shè)及一種a-巖藻糖巧酶測定液體單一試 劑。
【背景技術(shù)】
[0002] a-巖藻糖巧酶(a-化cosidase,AFU)是一種溶酶體酸性水解酶,廣泛分布于人 體內(nèi)的各種組織、細胞及體液中,尤其W肝、腎等組織活性較高。近年來,隨著對A即檢測方 法及其他腫瘤或非腫瘤性疾病的血A即水平變化的深入研究,A即活力測定已經(jīng)成為一個 基本診斷指標,并與其他實驗室指標相結(jié)合,成為肝癌、胃癌、膜腺癌、結(jié)腸癌、口腔癌、白血 病、卵巢腫瘤等疾病診斷的重要指標。
[0003] 目前,測定A即活力的方法主要有巧光法、終點比色法、速率法。巧光法是利用巖 藻糖巧化合物在AFU水解后釋放出可發(fā)射巧光的4-甲基傘型酬,通過檢查巧光強度來分析 酶活力,該法的靈敏度高,既能用于血清,也適用于活檢組織、細胞、腦脊液等量小的樣本, 但該法對儀器要求高,不僅需要凝膠過濾除去干擾物質(zhì),而且需要巧光分光光度計,因而不 能實現(xiàn)自動化分析,難W進行普及推廣;終點比色法是WPNP-A即為底物,底物被酶分解 后產(chǎn)生的色團在堿性條件下呈黃色,利用分光光度法進行定量分析,本法簡便、設(shè)備要求不 高,但是酶底物本身的抗干擾性差,不能解決血清黃痘和溶血、脂血等因素對測定結(jié)果的影 響,且操作繁瑣,所需反應時間長,而且A即需在酸性環(huán)境下進行酶促反應,而色團需在堿 性條件下呈色,所W也不適合自動化檢測,推廣難度大。速率法WA即在適宜反應條件下催 化含呈色基團的特定底物水解,在一定波長下可使吸光度增加,連續(xù)監(jiān)測吸光度值的變化, 可計算出樣本中A即的活性,該法操作簡單,測定時間短,靈敏度及抗干擾性都較好,并且 適用于各種半/全自動分析儀器,由于速率法具有便于臨床推廣應用的特點,近年來,速率 法AFU活力測定逐步在臨床醫(yī)學方面得到普遍應用。
[0004] 在日常檢驗工作中,由于肝癌、肝硬化患者分離血清需要時間長,為了能快速回報 結(jié)果,縮短樣本周轉(zhuǎn)時間和防止儀器樣品針被堵,不少醫(yī)院使用肝素裡或肝素鋼抗凝管采 集血樣進行測定,由于肝素為陰離子黏多糖,帶有大量負電荷,呈強酸性,易與速率法檢測 AFU所用試劑反應形成沉濁使吸光度升高,從而影響檢測準確度,因此,AFU測定試劑開發(fā) 時需充分考慮樣品中肝素干擾的問題,同時,若能制備成單一試劑則可有效節(jié)省全自動生 化分析儀試劑盤空間,提高全自動生化分析儀的利用率,更有利于該試劑在臨床上的推廣 應用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種具有良好的抗肝素干擾性能,良好的穩(wěn)定 性,且成本較低的A即測定液體單一試劑。
[0006] 為了解決上述問題,本發(fā)明采用的技術(shù)方案為:一種A即測定液體單一試劑,試劑 中的各組分及組分濃度范圍為:
[0007] 緩沖液(pH4. 5 ~5. 5) 50-200mmol/L,
[0008] 抗干擾劑 20-80g/l,
[0009] 2-氯-4-硝基苯-aA-巖藻糖巧(CNP-Afu) 0. 1-lg/L。
[0010] 本發(fā)明上述所述的抗干擾劑為可溶性巧鹽或儀鹽中的一種,進一步優(yōu)選為氯化巧 或氯化儀或硫酸巧或硫酸儀。
[0011] 其中所述緩沖液可W是磯酸緩沖液、甘氨酸-NaOH緩沖液、巧樣酸-巧樣酸S鋼緩 沖液、棚酸緩沖液、咪挫緩沖液、醋酸-醋酸鋼緩沖液,2-嗎咐己橫酸緩沖液中的一種。
[0012] 本發(fā)明試劑的配制方法為常規(guī)方法,即試劑所述組分配方用量加入蒸饋水后各自 混合攬勻即可。
[0013] 本發(fā)明試劑盒測定樣本中的A!^U的測試條件如下;溫度;30-37°C;比色杯光徑為 1. 0畑1。檢測主波長405皿。
[0014] 應用本發(fā)明AFU測定試劑盒測定樣本中AFU的方法如下;樣品(校準管W校準品 做樣品)加試劑R混勻后,30-37°C解育2min,連續(xù)檢測2min吸光度變化,計算AA/min。其 中樣本用量25y1,試劑用量225y1。
[0015] 本發(fā)明試劑盒測定樣本中AFU含量按W下公式進行計算:
[0016]
【主權(quán)項】
L 一種a -巖藻糖苷酶測定液體單一試劑,其特征在于:該試劑中的各組分及組分濃 度為: 緩沖液(pH 4. 5 ~5. 5) 50-200mmol/L, 抗干擾劑 20-80g/L, 2-氣-4_硝基苯-a -L-巖澡糖昔 0. 1-lg/L。 其中,所述的抗干擾劑為可溶性鈣鹽或鎂鹽中的一種。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的a -巖藻糖苷酶測定液體單一試劑,其特征在于:所述的鈣 鹽為氯化鈣或硫酸鈣,所述的鎂鹽為氯化鎂或硫酸鎂。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的a -巖藻糖苷酶測定液體單一試劑,其特征在于:所述緩沖 液為磷酸緩沖液、甘氨酸-NaOH緩沖液、檸檬酸-檸檬酸三鈉緩沖液、硼酸緩沖液、咪唑緩沖 液、醋酸-醋酸鈉緩沖液,2-嗎啉乙磺酸緩沖液中的一種。
【專利摘要】本發(fā)明公開一種α-巖藻糖苷酶測定液體單一試劑,該試劑中的各組分及組分濃度為:pH4.5~5.5的緩沖液50-200mmol/L,抗干擾劑20-80g/L,2-氯-4-硝基苯-α-L-巖藻糖苷0.1-1g/L。本發(fā)明可有效節(jié)省全自動生化分析儀試劑盤空間,提高全自動生化分析儀的利用率,更有利于該試劑在臨床上的推廣應用。而且,本發(fā)明特定的緩沖液可以有效的實現(xiàn)對底物的穩(wěn)定;此外,本發(fā)明抗干擾劑的加入可瞬間將樣本中的肝素干擾效應去除,實現(xiàn)降解或屏蔽肝素的作用,從而使本發(fā)明液體單一試劑同時具有良好的抗肝素干擾性能,且因加入的抗干擾劑市場價格較為便宜,使得本發(fā)明試劑的成本較為低廉。
【IPC分類】G01N21-31
【公開號】CN104865210
【申請?zhí)枴緾N201510267236
【發(fā)明人】沃燕波, 鄒炳德, 鄒繼華
【申請人】寧波美康生物科技股份有限公司
【公開日】2015年8月26日
【申請日】2015年5月22日
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