一種ldl-c定量檢測方法
【技術領域】：
[0001] 本發(fā)明公開了一種通過聯(lián)合遮蔽法定量測定LDL-C的檢測方法，屬于生物技術領 域。
【背景技術】：
[0002] 低密度脂蛋白（LDL)是人的血液中含量最多的脂蛋白，它所攜帶的膽固醇 (LDkC)被認為是動脈粥樣硬化和冠屯、病的主要致病因素，臨床檢測已日益重要。
[0003] 目前尚沒有真正意義的測定LDkC的參考方法。CDC測定LDkC暫定的參考方法 為超速離屯、法炬etaquantification，0 -定量法/BQ法），也為NCEP所推薦。此法測定的 LDkC，實際上包括脂蛋白（a) [Lp(a)]和中間密度脂蛋白（IDL)的膽固醇含量，也是評價其 他檢測方法正確性的基礎。此法需昂貴的設備、操縱復雜、費時且技術要求高，不易在普通 實驗室開展?；痠edewald公式計算法是目前應用較廣的估測LDkC的方法，被NCEP推薦為 常規(guī)測定方法。其WVLDL組成恒定（VLDkC/TG= 0. 2,均Wmg/dl計）的假設為條件，具 有簡便、直接、快速等優(yōu)點。應用此公式計算山LDkC常受TC、TG和皿kC變異的影響，總 變異可達9. 5%。但在血清中存在CM、血清TG> 4. 52mmol/L(400mg/dl)、血清中存在異常 0脂蛋白時[III型高脂血癥（HLP)]時不宜采用化iedewald公式法計算。色譜法和電泳 法因儀器、操縱要求高等種種原因臨床常規(guī)實驗室也較少應用，多用于脂蛋白的研究。
[0004] 勻相法因其樣本用量少、不需作離屯、沉淀分離處理、具精密度高、與F公式法相關 性好、可實現(xiàn)自動化而為臨床實驗所矚目。勻相法推廣應用的技術關鍵是其檢測試劑的研 發(fā)，方法很多，但其原理相似，在反應體系中有選擇地使LDL-C在顯色反應中被測定，但勻 相法由于技術操作難度原因可能導致屏蔽LDL-C不完全，直接影響測定結果的準確性。勻 相法測定LDkC國外（如日本、美國）起步較早，技術也較成熟，其中W表面活性劑法組成 的商品試劑盒W日本第一化學株式會社、英國朗道德產品為代表。目前國內臨床實驗室采 用勻相法測定LDkC的試劑多從日本進口，如日本一化、和光出品的試劑，或國內采用國外 技術生產的試劑，如利得曼、申索公司的產品，其價格較高。

【發(fā)明內容】
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[0005] 本發(fā)明的目的在于，克服上述技術背景的不足，提供一種準確度高、重復性好、抗 干擾能力強、基質穩(wěn)定、可用于全自動生化分析儀等特點的達到國際水平的用于檢測LDkC 的定量檢測法。采用液體雙試劑，由分別放置的試劑1和試劑2組成，其中，所述試劑1主 要含有金屬氯化物、LDL-C單克隆抗體、表面活性劑1、膽固醇脂酶；所述試劑2主要含有表 面活性劑2、4-氨基安替比林、過氧化物酶、膽固醇氧化酶。
[0006] 本發(fā)明的技術方案；試劑1中聚陰離子氯化巧和LDL-C單克隆抗體共同作用下，使 血清中游離LDL-C產生凝集效應并發(fā)生抗原抗體反應形成抗原抗體復合物，達到聯(lián)合遮蔽 LDkC的效果。血清中皿UVLDL及CM則在表面活性劑辛基苯基聚氧己締離作用下被解離 并釋出來的微?；?分子與膽固醇脂酶試劑產生不完整的TRINDm?反應。當加入試劑2 時，含有對LDL有特異作用的表面活性劑聚己二醇8000能水解LDL釋放出微?；痮l分 子，參與完整的TRIND邸反應，在全自動生化分析儀即可得出血清中LDkC的濃度。
[0007]本發(fā)明的具體實施基本操作如下：
[000引 1.試劑1的制備：
[0009] 在燒杯中加入500na-700ml純化水，加入M0PS08-10g，常溫下攬拌3-5分鐘，加入 M0PS0鋼鹽9-llg，常溫下攬拌3-5分鐘，加入膽酸鋼15-25g，常溫下攬拌3-5分鐘，加入氯 化巧0. 4-0. 5g，常溫下攬拌2-3分鐘，加入己二胺四己酸二鋼鹽0. 1-0. 2g，常溫下攬拌2-3 分鐘，加入辛基苯基聚氧己締離2-4ml，常溫下攬拌2-3分鐘，加入膽固醇醋酶10-14KU， 常溫下攬拌2-3分鐘，加入硫酸葡聚糖8-12g，常溫下攬拌3-5分鐘，加入載脂蛋白B單克 隆抗體50-150ml，常溫下攬拌3-5分鐘，最后加入N-己基間甲基苯胺-己哲丙基橫酸鋼 0. 1-0. 3g，常溫下攬拌2-3分鐘，其余用純化水補足到1000ml。
[0010] 2.試劑2的制備：
[0011] 在燒杯中加入500na-700ml純化水，加入M0PS08-10g，常溫下攬拌3-5分鐘，加入 M0PS0鋼鹽9-llg，常溫下攬拌3-5分鐘，加入聚己二醇800040-60g，常溫下攬拌3-5分鐘， 加入4-氨基安替比林0. 05-0. 2g，常溫下攬拌2-3分鐘，加入過氧化物酶1-2KU，常溫下攬 拌2-3分鐘，加入膽固醇氧化酶0. 4-0. 8KU，常溫下攬拌2-3分鐘，加入疊氮鋼0. 01-0. 02g， 常溫下攬拌2-3分鐘，其余用純化水補足到1000ml。
[001引 3.利用本發(fā)明方法配制的定量檢測試劑盒的使用
[001引 （1)檢測儀器；適用于各類全自動生化分析儀。
[0014] (2)待測血清；不溶血血清，2-8°C可穩(wěn)定一周，避免脂濁。
[0015] (3)具體檢測程序如下表1 ;
[0016] 表1樣本檢測操作程序
[0017]
【主權項】
1. 一種通過聯(lián)合遮蔽法定量測定LDL-C的檢測方法，其特征在于：采用液體雙試劑，由 分別放置的試劑1和試劑2組成，其中，所述試劑1含有金屬氯化物、LDL-C單克隆抗體、表 面活性劑1、膽固醇脂酶；所述試劑2含有表面活性劑2、4_氨基安替比林、過氧化物酶、膽 固醇氧化酶。
2. 根據(jù)權利要求1所述，其特征在于，所述試劑1中金屬氯化物可使游離LDL-C發(fā)生凝 集，并與LDL-C單克隆抗體發(fā)生抗原抗體反應形成抗原抗體復合物，達到聯(lián)合遮蔽的效果。
3. 根據(jù)權利要求1所述，其特征在于，所述試劑1中金屬氯化物為二價金屬氯化物氯化 鈣，其濃度范圍在〇. 4g/L-0. 5g/L。
4. 根據(jù)權利要求1所述，其特征在于，所述試劑1中LDL-C單克隆抗體為載脂蛋白B單 克隆抗體，其濃度范圍在50ml/L-150ml/L。
5. 根據(jù)權利要求1所述，其特征在于，所述試劑1中表面活性劑1為辛基苯基聚氧乙烯 醚，其濃度范圍在2ml/L-4ml/L。
6. 根據(jù)權利要求1所述，其特征在于，所述試劑1中膽固醇脂酶含量為10KU/L-14KU/ L0
7. 根據(jù)權利要求1所述，其特征在于，所述試劑2中表面活性劑2為聚乙二醇8000,其 濃度范圍在40g/L-60g/L。
8. 根據(jù)權利要求1所述，其特征在于，所述試劑2中4-氨基安替比林含量為 0. 05-0. 2g/L、膽固醇氧化酶含量為0. 4KU/L-0. 8K U/L、過氧化物酶含量為1KU/L-2KU/L。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種通過聯(lián)合遮蔽法定量測定LDL-C的檢測方法。本方法采用液體雙試劑，由分別放置的試劑1和試劑2組成，其中，所述試劑1含有金屬氯化物、LDL-C單克隆抗體及定量酶試劑；所述試劑2含有表面活性劑、顯色劑、防腐劑、抗干擾物質及反應促進劑。本發(fā)明具有顯色特性好、準確度高、試劑成分穩(wěn)定、操作簡單適用于臨床各種全自動生化分析儀的特點。用于檢測人體血清中LDL-C的含量。
【IPC分類】G01N33-92, G01N33-531
【公開號】CN104865392
【申請?zhí)枴緾N201510227852
【發(fā)明人】王賢俊, 郭二豪, 鄭蓓蕾, 江新濤
【申請人】王賢俊
【公開日】2015年8月26日
【申請日】2015年5月2日