Tsh免疫層析試劑盒及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于生物領(lǐng)域，具體設(shè)及T甜免疫層析試劑盒及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] T甜是先天性甲狀腺機能低下癥檢查的首選指標。大約每4千位新生兒中會有 一位新生兒的甲狀腺機能有嚴重的缺陷，其他有更多的新生兒有輕微或程度不一的缺陷。 幾乎所有的發(fā)達國家包括我國都實施新生兒篩檢，W便發(fā)現(xiàn)并治療先天性甲狀腺機能低下 癥。新生兒甲狀腺機能低下TSH的參考值一般為小于10ylU/mL。
[0003] 促甲狀腺激素（TSH)是垂體分泌的促進甲狀腺的生長和機能的激素。人類的TSH 為一種糖蛋白，含211個氨基酸，糖類約占整個分子的15%。整個分子由a亞單位和P亞 單位2條件膚鏈組成。TSH全面促進甲狀腺的機能；包括加強艦累活性，增強過氧化物酶活 性，促進甲狀腺球蛋白合成及酪氨酸艦化等各個環(huán)節(jié)。垂體分泌TSH，一方面受下丘腦分泌 的促甲狀腺激素釋放激素（TRH)的促進性影響，另方面又受到T3、T4反饋性的抑制性影 響，二者互相括抗，它們組成下丘腦-腺垂體-甲狀腺軸。正常情況下，下丘腦分泌的TRH 量，決定腺垂體甲狀腺軸反饋調(diào)節(jié)的水平。TRH分泌多，則血中T3、T4水平的調(diào)定點高， 當血中T3、T4超過此調(diào)定水平時，則反饋性抑制腺垂體分泌TSH，并降低腺垂體對TRH的 敏感性，從而使血中T3,T4水平保持相對恒定。T甜參考值；2~lOylU/mL。在病理情 況下，TSH含量發(fā)生變化。增高：原發(fā)性甲狀腺功能減退、伴有甲狀腺功能低下的橋本病、外 源性促甲狀腺激素分泌腫瘤（肺、乳腺）、亞急性甲狀腺炎恢復(fù)期。攝人金屬裡、艦化鐘、促 甲狀腺激素釋放激素可使促甲狀腺激素增高；減低；垂體性甲狀腺功能低下、非促甲狀腺 激素瘤所致的甲狀腺功能亢進，W及攝入阿司匹林、皮質(zhì)激素等。
[0004] 免疫層析膠體金技術(shù)是新型的診斷技術(shù)，基本原理如下：利用膠體金標記一種抗 原或抗體，在試劑的NC膜上包被相應(yīng)的配對抗原或抗體，檢測時當樣品中含相應(yīng)的特異性 抗體或抗原時，膠體金標記顆粒和樣品中配體相結(jié)合形成復(fù)合物，然后在NC膜上層析，再 被包被抗原或抗體捕獲，形成肉眼可見的檢測T線，在一定的條件下，T線的強弱和樣品中 的濃度呈正相關(guān)或負相關(guān)，從而實現(xiàn)檢測。
[0005] 專利CN201220399454公開了一種T甜的快速定量免疫層析試劑盒，其具有操作簡 便、反應(yīng)快速、適合現(xiàn)場檢測和經(jīng)濟實用等優(yōu)點。但是然而由于膠體金具有強烈的電荷性， 通過靜電吸附抗體或蛋白，在抑的變化下，很容易造成抗體或蛋白的脫離并且吸附抗體或 蛋白后的膠體金不穩(wěn)定，從而導(dǎo)致該試劑盒的穩(wěn)定性、靈敏度無法保障。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的之一是提供一種TSH的半定量免疫層析檢測試劑盒，其由試劑盒由 試紙卡、比色卡和免疫層析結(jié)果判讀記錄儀構(gòu)成。
[0007] 在本發(fā)明的一個實施方案中，所述試紙卡結(jié)構(gòu)為；在塑料底板一端粘貼上樣墊，上 樣墊的一端緊密壓接含有標記T甜0亞單位特異性抗體的膠體金墊，膠體金墊一端緊密壓 接硝酸纖維素NC膜，NC膜上包被有相互分離的檢測線T和質(zhì)控線C，T線為T甜a亞單位 抗體，C線為抗鼠IgG抗體，NC膜的另一端連接吸樣墊形成試紙，試紙裝入塑料卡內(nèi)形成試 紙卡。
[000引所述試紙卡的NC膜為孔徑9-15微米的多孔樣結(jié)構(gòu)膜，上樣墊為玻璃纖維膜或無 紡布，吸樣墊由吸水濾紙構(gòu)成。所述比色卡是白色背景上印有系列不同深淺紅色線條的 紙板，用于對檢測結(jié)果的對比判定。不同深淺的紅色線條共5條，分別對應(yīng)3,10,15, 25， 55yIU/mL的T甜濃度。
[0009] 所述免疫層析結(jié)果判讀記錄儀是一種光學(xué)檢測系統(tǒng)，用于對檢測結(jié)果的定量判 定，T甜的檢測范圍0-5000ylU/mL。
[0010] 在本發(fā)明中，NC膜抗體的包被過程為；W0.IMp服.0磯酸鹽緩沖液（PB巧將 T甜a亞單位抗體配制成l-3mg/ml的溶液，將抗鼠IgG配制成l-2mg/ml的溶液，用噴膜 儀在NC膜上部和下部W1-1. 5y1/cm的參數(shù)進行分別劃線，包被C、T線，劃線后將NC膜在 干燥間，溫度20-25°C，濕度小于30 %，干燥2-5小時。
[0011] 所述試紙卡，膠體金墊制備過程為；W氯金酸-巧樣酸S鋼還原法（化ens法）制 備直徑為20nm的膠體金溶液，制備完成后取100ml膠體金液放在燒杯內(nèi)，用0. 2MK2CO3調(diào)至 抑7. 5,按100ml膠體金溶液加入2.OmgT甜0亞單位抗體，再緩慢添加0. 2MK2CO3將膠體 金溶液調(diào)至pH9. 0,添加K2CO3的時間為5分鐘，然后室溫攬拌30分鐘，加入終濃度為lOmg/ ml牛血清白蛋白炬SA)，Img/mlPVP封閉20min，12000r/m離屯、30分鐘，棄上清，用PBS緩 沖液（抑值8.0)復(fù)溶至50ml，按1ml溶液鋪20cm2的比例均勻地鋪在玻璃纖維膜或無紡布 上，再置干燥間，溫度20-25°C，濕度小于30%，干燥2-5小時，制成膠體金墊。
[0012] 在本發(fā)明進一步地實施方案中，所述玻璃纖維膜在涂布前需經(jīng)過處理液浸泡處理 5分鐘，所述處理液為含有Img/ml庶糖的PBS緩沖液，抑值為9. 5。
[0013] 所述試紙卡的裝配過程為；在干燥室內(nèi)，溫度20-25°C，濕度小于40%，取塑料底 板，將已包被的NC膜放置在塑料底板的中部粘貼，將膠體金墊裁切成合適的寬度，在NC膜T 線一側(cè)搭接膠體金墊，搭膠體金墊的1/5粘貼，在膠體金墊另一側(cè)搭接粘貼上樣墊，搭膠體 金墊的1/3粘貼；在NC膜C線一側(cè)搭接吸樣墊，搭吸樣墊的1/10粘貼；最后用裁剪機將貼 好的塑料板切成3-5mm寬的試紙條，再裝入塑料卡內(nèi)，形成試劑試紙卡。
[0014] 所述試劑盒，檢測方法為；1)將檢測試劑及樣本平衡至室溫，取出試紙卡，平放； 2) 10yI血清、血漿樣本，樣本為全血時吸取20ul樣本，加入到樣本孔中，再立即在下部的 緩沖液孔中加入100yL樣本稀釋液（生理鹽水或PB巧，15-20分鐘內(nèi)用免疫層析結(jié)果判讀 記錄儀或比色卡半定量判定結(jié)果；4)儀器判定時，設(shè)置好儀器相關(guān)參數(shù)后將試紙卡放入倉 內(nèi)進行檢測，儀器將顯示出樣品濃度的定量測定結(jié)果；5)用比色卡判定結(jié)果時，將試紙卡T 線的顏色和比色卡上標準線的顏色深淺進行對比，半定量判定樣品的濃度區(qū)間。
[0015] 本發(fā)明有益效果是；提供一種利用免疫層析膠體金技術(shù)制備的TSH快速定量免疫 層析檢測試劑盒，能半定量的檢測樣本中的T甜含量，同時適合血清、血漿和全血樣本，并 適合臨床上單人份檢測。具有操作簡便、反應(yīng)快速、敏感性高、穩(wěn)定性強、適合現(xiàn)場檢測和經(jīng) 濟實用等優(yōu)點。
【具體實施方式】
[0016] 下面將進一步的詳細說明本發(fā)明。需要指出的是，W下說明僅僅是對本發(fā)明要求 保護的技術(shù)方案的舉例說明，并非對該些技術(shù)方案的任何限制。本發(fā)明的保護范圍W所附 權(quán)利要求書記載的內(nèi)容為準。
[0017] 實施例1
[001引T甜a、P亞單位特異性配對抗體購自美國油cam公司；其他試劑均購自sigma公 司。
[0019]NC膜抗體的包被過程為；W0.1MP服.0磯酸鹽緩沖液（PB巧將T甜a亞單位抗體 配制成2mg/ml的溶液，將抗