高效液相色譜測定頭孢呋辛酯片中雜質(zhì)含量的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及高效液相色譜技術(shù)領(lǐng)域，具體設(shè)及一種高效液相色譜測定頭抱快辛醋 片中雜質(zhì)含量的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 頭抱快辛醋片生產(chǎn)，儲藏過程中由于會受到不同條件的影響，可能降解產(chǎn)生不同 的雜質(zhì)，需對其進行限度控制。因此我們建立了頭抱快辛醋片中雜質(zhì)含量的HPLC-UV測定 法，更好的對頭抱快辛醋片中可能存在的雜質(zhì)進行檢測，W更好的控制頭抱快辛醋片的質(zhì) 量。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明的目的是建立一種測定頭抱快辛醋片中雜質(zhì)含量的方法，更好的對頭抱快 辛醋片中可能存在的雜質(zhì)進行檢測，W更好的控制頭抱快辛醋片的質(zhì)量。
[0004] 本發(fā)明的技術(shù)方案是：高效液相色譜測定頭抱快辛醋片中雜質(zhì)含量的方法，它包 括如下步驟： 雜質(zhì)儲備液的制備；取頭抱快辛醋、雜質(zhì)A、雜質(zhì)B、雜質(zhì)C、雜質(zhì)D、雜質(zhì)E用甲醇分別 溶解并稀釋成每1血分別約含頭抱快辛醋0. 250mg、雜質(zhì)A0. 50mg、雜質(zhì)B0. 37mg、雜質(zhì)C 0. 12mg、雜質(zhì)D0. 12mg、雜質(zhì)E0. 12mg的溶液。
[0005] 雜質(zhì)測試溶液的制備：分別取上述各雜質(zhì)儲備液1ml至100ml量瓶中用流動相定 容至刻度搖勻，即得。
[0006] 供試品溶液的制備；精密稱取頭抱快辛醋片適量，用甲醇溶解后加流動相定容至 刻度，制成每ImL約含頭抱快辛醋0. 250mg的溶液。
[0007] 對照品溶液的制備；精密量取供試品溶液1ml，置100ml量瓶中，加流動相稀釋至 刻度，搖勻。
[000引空白溶液的制備；取輔料適量，用甲醇溶解后加流動相定容至刻度。
[0009] 所述高效液相色譜儀的檢測器為紫外吸收檢測器，檢測波長為278nm。
[0010] 所述流動相為〇.2mol/L磯酸二氨錠溶液：甲醇=62 : 38。
[0011] 本發(fā)明的有益效果是：本發(fā)明應(yīng)用高效液相色譜測頭抱快辛醋片中雜質(zhì)含量，分 離效率高、分析速度快、檢測靈敏度高。通過檢測頭抱快辛醋片中雜質(zhì)含量，控制每克頭抱 快辛醋中雜質(zhì)A不得大于2. 0%、雜質(zhì)B不得大于1. 5%、其他單個雜質(zhì)不得大于1. 0%，有利 于更好控制頭抱快辛醋片的質(zhì)量。
[001引【附圖說明】：圖1為雜質(zhì)測試溶液色譜圖； 圖2為空白輔料測試色譜圖； 圖3為頭抱快辛醋的線性回歸圖。
[0013] W下通過實施例形式再對本發(fā)明的內(nèi)容作進一步詳細說明，但不應(yīng)就此理解為本 發(fā)明上述主題范圍內(nèi)僅限于W下實施例。在不脫離本發(fā)明上述技術(shù)前提下，根據(jù)本領(lǐng)域普 通技術(shù)知識和慣用手段做出的相應(yīng)替換或變更的修改，均包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
[0014] 實施例1 ;色譜柱的確定。
[0015] 儀器；高效液相色譜儀Waters 62695-2998,二極管陣列檢測器； 色譜柱：十八烷基鍵合硅膠為填料（4. 6X150mm5|^0， 流速；1. 0ml/min; 進樣量；20rt; 柱溫；30C; 波長；278nm; 流動相；〇. 2mol/L磯酸二氨錠溶液：甲醇=62:38。
[0016] 雜質(zhì)測試溶液的制備；取頭抱快辛醋、雜質(zhì)A、雜質(zhì)B、雜質(zhì)C、雜質(zhì)D、雜質(zhì)E用 甲醇分別溶解并稀釋成每ImL分別約含頭抱快辛醋0. 00250mg、雜質(zhì)A0. 0050mg、雜質(zhì)B 0. 0037mg、雜質(zhì)C0. 0012mg、雜質(zhì)D0. 0012mg、雜質(zhì)E0. 0012mg的溶液。
[0017] 取雜質(zhì)測試溶液進樣記錄色譜圖。
[0018] 雜質(zhì)A在22. 177分鐘出峰、雜質(zhì)B在33. 070、40. 637分鐘出峰、雜質(zhì)C在3. 686 分鐘出峰、雜質(zhì)D在8. 128分鐘出峰、雜質(zhì)E在9. 658分鐘出峰、主峰在16. 185、18. 614分 鐘出峰，見圖1。
[0019] 結(jié)論；在該方法條件下雜質(zhì)A、B、C、D、E和主峰能完全分離。
[0020] 實施例2 ;檢測波長的確定。
[0021] 儀器；高效液相色譜儀Waters 62695-2998,二極管陣列檢測器； 色譜柱：十八烷基鍵合硅膠為填料（4. 6X150mm5|^0 ; 流速：1.Oml/min; 進樣量；20rt; 柱溫；30C; 波長；190~400nm; 流動相；〇. 2mol/L磯酸二氨錠溶液：甲醇=62:38。
[0022] 雜質(zhì)測試溶液的制備；取頭抱快辛醋、雜質(zhì)A、雜質(zhì)B、雜質(zhì)C、雜質(zhì)D、雜質(zhì)E用 甲醇分別溶解并稀釋成每ImL分別約含頭抱快辛醋0. 00250mg、雜質(zhì)A0. 0050mg、雜質(zhì)B 0. 0037mg、雜質(zhì)C0. 0012mg、雜質(zhì)D0. 0012mg、雜質(zhì)E0. 0012mg的溶液。
[0023] 取雜質(zhì)測試溶液進樣記錄色譜圖。
[0024] 雜質(zhì)A的最大吸收為283. 5皿、雜質(zhì)B的最大吸收為277. 5皿和275. 1皿、雜質(zhì)C 的最大吸收為264. 5nm、雜質(zhì)D的最大吸收為272. 8nm、雜質(zhì)E的最大吸收為277. 5nm、主峰 的最大吸收為279. 9nm。
[0025] 結(jié)論；在該方法條件下，由主峰于279. 9皿處出峰，故采用在278~280皿附近的波 長檢測。
[0026] 實施例3 ;空白輔料干擾試驗。
[0027] 取空白輔料溶液進樣記錄色譜圖，見圖2。
[002引色譜中無影響測定的峰出現(xiàn)。
[0029] 結(jié)論；表明輔料對雜質(zhì)檢查無干擾。
[0030] 實施例4 ;系統(tǒng)適用性實驗。
[003U 儀器；LC-lOATvp/SPD-lOAvp N2000工作站； 色譜柱；4. 6 X 150mm 十八烷基鍵合硅膠色譜柱； 流速：1.Oml/min; 進樣量；20rt; 柱溫；35°C; 波長；278nm。
[0032] 取同一份樣品溶液，連續(xù)進樣5次，記錄色譜圖求得相對標準偏差應(yīng)不大于 2.0%，結(jié)果見表1。
[003引結(jié)論；試驗表明本色譜系統(tǒng)精密度良好。
[0034] 實施例5;線性和范圍。
[0035] 取濃度為分別為 60. 795嗦/ml、121. 590嗦/ml、182. 385嗦/ml、243. 180嗦/ml、 303. 975嗦/ml、340. 452嗦/ml的頭抱快辛醋溶液，各20W，分別注入液相色譜儀，記錄色譜 圖，W峰面積為縱坐標，濃度為橫坐標進行線性回歸，結(jié)果見表2、圖3。
[0036] 頭抱快辛醋的回歸方程得回歸方程為C=2E-05S+10. 506 r=0. 9994。
[0037] 結(jié)果表明，頭抱快辛醋濃度分別在60. 795~34. 452嗦/ml范圍內(nèi)進樣濃度與峰面 積值有良好的線性關(guān)系。
[00測 實施例6 ;檢測限。
[0039] 取一定濃度的頭抱快辛醋溶液，逐級稀釋得系列濃度的溶液，分別取系列濃度 溶液各20ul注入液相色譜儀，記錄色譜圖，觀察信噪比，當(dāng)信噪比為3 ;1時，檢測濃度為 62.5ng/ml。
[0040] 結(jié)論；結(jié)果表明，最小檢出量為62. 5ng/ml。
[0041] 實施例7;重復(fù)性試驗。
[0042] 取同一批號的樣品6份，分別精密稱定，測定雜質(zhì)，結(jié)果見表3。
[00創(chuàng)實施例8 ;回收率試驗。
[0044] 準確度是通過在供試品中加入指標的80%、100%、120%S個不同濃度各雜質(zhì)測得 的回收率所得。已知雜質(zhì)的準確度是加入已知量的雜質(zhì)，再測定加樣樣品中已知雜質(zhì)的測 定結(jié)果和理論值之間的比值（回收率)，W百分率％表示，要求回收率在70. 〇%-130. 0%之間。
[0045] 回收率計算公式
試驗表明該法的準確度良好，結(jié)果見表4。
[0046] 結(jié)論；由表可見回收率較好。
[0047] 實施例9 ;溶液穩(wěn)定性。
[0048] 取同一份供試品溶液，在0、2、4、6、8、12、18、24小時各取20W，注入液相色譜儀， 記錄色譜圖，結(jié)果見表5。
[0049] 結(jié)論；由表可見，隨著溶液放置的時間延長其峰面積逐漸減少，有關(guān)物質(zhì)則逐漸增 加，表明溶液在24小時內(nèi)雜質(zhì)面積有較明顯變化，證明樣品不穩(wěn)定，故測定時應(yīng)加W注意， 供試品溶液應(yīng)即配即測。
[0050] 實施例10 ;耐用性實驗。
[0051] 為了研究液相色譜條件的微小變化對試驗結(jié)果的影響程度，進行耐用性實驗。主 要影響因素有緩沖鹽濃度、檢測波長、流動相比例、柱溫、流速、色譜柱。取系統(tǒng)測試液分別 進樣，考察分離度，結(jié)果見表6。
[0052] 實驗結(jié)果表明，該方法測定可靠，耐用性較好。
【主權(quán)項】
1. 高效液相色譜測定頭孢呋辛酯片中有關(guān)物質(zhì)含量的方法，其特征在于，它包括如下 步驟： (1) 雜質(zhì)儲備液的制備：取頭孢呋辛酯、雜質(zhì)A、雜質(zhì)B、雜質(zhì)C、雜質(zhì)D、雜質(zhì)E用甲醇分 別溶解并稀釋成每ImL分別約含頭孢呋辛醋0. 250mg、雜質(zhì)A 0. 50mg、雜質(zhì)B 0. 37mg、雜質(zhì) C 0? 12mg、雜質(zhì) D 0? 12mg、雜質(zhì) E 0? 12mg 的溶液； (2) 雜質(zhì)測試溶液的制備：分別取上述各雜質(zhì)儲備液Iml至100mL量瓶中用流動相定 容至刻度搖勻，即得； (3) 供試品溶液的制備：精密稱取頭孢呋辛酯片細粉適量，用甲醇溶解后加流動相定 容至刻度，制成每ImL約含頭孢呋辛酯0. 250mg的溶液； (4) 對照品溶液的制備：精密量取供試品溶液lml，置100mL量瓶中，加流動相稀釋至刻 度，搖勻； (5) 空白溶液的制備：甲醇； (6) 測定：高效液相色譜儀以固定相為十八烷基鍵合硅膠色譜柱，流動相為0. 1~ 0. 2mol/L磷酸二氫銨溶液：甲醇=60:40~64:36 ; 柱溫為25°C~35°C，檢測波長為278~280nm分別吸取對照品溶液與供試品溶液各 15~25耵，注入高效液相色譜儀，讀取數(shù)據(jù)； (7) 計算各雜質(zhì)溶液濃度的值與相應(yīng)峰面積值的線性回歸方程，相關(guān)系數(shù)而應(yīng)不小于 0.99,對照品溶液峰形對稱，理論塔板數(shù)2000以上，雜質(zhì)測試溶液色譜圖中各雜質(zhì)分離度 應(yīng)不小于1.5,空白溶液色譜圖，無與雜質(zhì)測試溶液色譜圖相同的峰出現(xiàn)，即空白溶液無干 擾； (8) 每克頭孢呋辛酯片中雜質(zhì)A不得大于2. 0%、雜質(zhì)B不得大于1. 5%、其他單個雜質(zhì) 不得大于1. 0%。2. 權(quán)利要求1所述的方法，高效液相色譜儀以固定相為十八烷基鍵合硅膠色譜柱，流 動相為〇. 2mol/L磷酸二氫銨溶液：甲醇=62:38,柱溫為30°C，檢測波長為278nm分別吸取 對照品溶液與供試品溶液各20沿，注入高效液相色譜儀，讀取數(shù)據(jù)。3. 權(quán)利要求1所述的方法，高效液相色譜儀以固定相為十八烷基鍵合硅膠色譜柱，流 動相為0.1111〇1/1磷酸二氫按溶液：甲醇=60:40，柱溫為25 <€，檢測波長為278111]1分別吸取 對照品溶液與供試品溶液各15沿，注入高效液相色譜儀，讀取數(shù)據(jù)。4. 權(quán)利要求1所述的方法，高效液相色譜儀以固定相為十八烷基鍵合硅膠色譜柱，流 動相0. 2mol/L磷酸二氫銨溶液：甲醇=64:36,柱溫為35°C，檢測波長為280nm分別吸取對 照品溶液與供試品溶液各25沿，注入高效液相色譜儀，讀取數(shù)據(jù)。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種高效液相色譜測定頭孢呋辛酯片中雜質(zhì)含量的方法，它包括如下步驟：高效液相色譜儀以固定相為十八烷基鍵合硅膠色譜柱，流動相為0.1～0.2mol/L磷酸二氫銨溶液:甲醇=60:40～64:36。柱溫為25℃～35℃，檢測波長為278～280nm。分別吸取空白溶液、各雜質(zhì)溶液、供試品溶液各20μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖。計算雜質(zhì)對照品溶液濃度的值為X與相應(yīng)峰面積值為Y，進行線性擬合，得出線性回歸方程，線性范圍為雜質(zhì)A在2.0136～7.5510μg/ml、雜質(zhì)B在1.4826～5.5599μg/ml、雜質(zhì)C在 0.5050～1.8936μg/ml、質(zhì)D在0.5155～1.9330μg/ml、雜質(zhì)E在0.4993～1.8723μg/ml范圍內(nèi)與其峰響應(yīng)值成顯著線性關(guān)系。本發(fā)明測定頭孢呋辛酯原料藥中雜質(zhì)A、B、C、D、E，分離效率高、分析速度快、檢測靈敏度高。
【IPC分類】G01N30/02
【公開號】CN104950053
【申請?zhí)枴緾N201510414906
【發(fā)明人】王靜, 王沛沛, 王玲, 王崇益
【申請人】江蘇正大清江制藥有限公司
【公開日】2015年9月30日
【申請日】2015年7月15日