一種測定藍藻偽空胞和群體細胞間空隙浮力貢獻的方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及一種測定藍藻偽空胞和群體細胞間空隙分別在藻細胞上浮過程中浮力貢獻的方法，具體是一種測定藍藻偽空胞和群體細胞間空隙浮力貢獻的方法。
【背景技術】
[0002]藍藻水華已經成為湖庫面臨的嚴重環(huán)境問題之一，藍藻水華的形成機制分為越冬、復蘇、生物量增加，聚集等過程。在復蘇過程中，偽空胞被認為是藻細胞復蘇的浮力提供因子，但是申請人的最近研宄結果發(fā)現(xiàn)，藍藻群體細胞間空隙也可以為藻群體提供浮力，而且藻群體細胞間空隙極有可能是藻群體上浮的關鍵性因子，這一研宄成果尚屬首次報道。如何區(qū)分偽空胞和群體細胞間空隙分別對藻細胞上浮的貢獻更是未見報道？因此急需探索能夠測量群體細胞間空隙的大小的方法，并在此基礎上分析偽空胞和全體細胞間空隙分別為藻細胞提供浮力的貢獻。

【發(fā)明內容】

[0003]本發(fā)明的目的在于提供一種測定藍藻偽空胞和群體細胞間空隙分別在藻細胞上浮過程中浮力貢獻的方法，以解決上述【背景技術】中提出的問題。
[0004]為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術方案:
[0005]一種測定藍藻偽空胞和群體細胞間空隙浮力貢獻的方法，其具體的方法為:
[0006](I)在野外湖庫取100ml湖庫水體，經過0.45um玻璃纖維膜過濾，將藍藻細胞去除，所得不含藍藻細胞的水體，待用；
[0007](2)在野外選取1ml藍藻水華樣品A ；
[0008](3)取Iml藍藻水華樣品A加入到99ml不含藍藻細胞的水體，得混合液B ；
[0009](4)將混合液B置于頻率為45hz超聲波中處理5min，得混合液C ；
[0010](5)利用電子顯微鏡對混合液C進行觀測，藍藻呈單細胞形態(tài)存在，對混合液C中的藻細胞密度進行計數(shù)，計算混合液C中藻細胞密度S ;
[0011 ] (6)取Iml混合液C，利用氣體監(jiān)測裝置，監(jiān)測樣品中偽空胞氣體含量，所得偽空胞氣體含量，記為Vtll;
[0012](7)計算平均每個藻細胞中偽空胞的氣體含量W1= VQ1/S ;
[0013](8)根據(jù)平均每個藻細胞的偽空胞氣體含量，計算平均每個藻細胞中的偽空胞產生的浮力！F1= PgV1;
[0014](9)取Iml未經任何處理的藍藻水華樣品A，利用氣體監(jiān)測裝置，測定群體中偽空胞和群體細胞間空隙中氣體總含量Vci2;
[0015](10)計算平均每個藻細胞中偽空胞和群體細胞間空隙的氣體含量..N2= V 02/S ;
[0016](11)群體細胞間空隙氣體V3= V2-V1;
[0017](12)每個藻細胞的群體細胞間空隙氣體含量份額產生的浮力F3= P gV 3；
[0018](13)對比匕和F 3即可計算出偽空胞和群體細胞間空隙分別在藻華復蘇過程產生浮力的貢獻。
[0019]作為本發(fā)明進一步的方案:所述混合液C中藻細胞按照“偽空胞提純方法”進行提取偽空胞，檢驗偽空胞的完整性。
[0020]作為本發(fā)明進一步的方案:所述“偽空胞提純方法”為:選取1ml混合液C，加入Mg2+和青霉素G，使之最終濃度分別為ImM和250u L-1，靜置培養(yǎng)6小時，用300 Xg離心辦法收集微囊藻細胞至裝有IM甘油的試管中，輕搖試管lOmin，使藍藻細胞和甘油充分混合；用三倍體積0.02M、pH7.7Tris-Cl進行滲透沖擊，使細胞裂解并在4°C冰箱內放置4小時，然后將裂解液以300Xg離心過夜后收集液面的淡藍綠色層，收集液通過GF/C濾膜進行過濾，所得濾液在2 X 30cm的Sepharose 4B柱上進行凝膠過濾，隨后用0.01M、pH7.5Tris_Cl溶液洗脫，得乳白色洗脫液，以300 X g離心6小時，收集液面白色漂浮狀的偽空胞提取液于Eppendorf管4°C冰箱保存，用于電鏡觀察。
[0021]作為本發(fā)明進一步的方案:所述氣體監(jiān)測裝置由壓力套管、毛細壓力管、磨口塞、壓力套管塞和刻度管，所述壓力套管的內部設有毛細壓力管，且毛細壓力管的尾部設有磨口塞，而壓力套管的尾部設有壓力套管塞，其中毛細壓力管的前段設有刻度管。
[0022]作為本發(fā)明進一步的方案:所述壓力套管置于水浴箱內，所述壓力套管的前端通過進氣排氣裝置、氣壓計連接氮氣罐。
[0023]與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明的有益效果是:本發(fā)明能夠準確的測定處藍藻偽空胞和群體細胞間空隙分別在藻細胞上浮過程中浮力貢獻，且本發(fā)明方法簡單，檢測精度高。
【附圖說明】
[0024]圖1為氣體監(jiān)測裝置的結構示意圖。
[0025]圖2為壓力套管中起始狀態(tài)的結構示意圖。
[0026]圖3為壓力套管中最終狀態(tài)的結構示意圖。
【具體實施方式】
[0027]下面將結合本發(fā)明實施例中的附圖，對本發(fā)明實施例中的技術方案進行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實施例僅僅是本發(fā)明一部分實施例，而不是全部的實施例?；诒景l(fā)明中的實施例，本領域普通技術人員在沒有做出創(chuàng)造性勞動前提下所獲得的所有其他實施例，都屬于本發(fā)明保護的范圍。
[0028]本發(fā)明實施例中，一種測定藍藻偽空胞和群體細胞間空隙浮力貢獻的方法，其具體的方法為:
[0029](I)在野外湖庫取100ml湖庫水體，經過0.45um玻璃纖維膜過濾，將藍藻細胞去除，所得不含藍藻細胞的水體，待用；
[0030](2)在野外選取1ml藍藻水華樣品A ；
[0031](3)取Iml藍藻水華樣品A加入到99ml不含藍藻細胞的水體，得混合液B ;
[0032](4)將混合液B置于頻率為45hz超聲波中處理5min，得混合液C ；
[0033](5)利用電子顯微鏡對混合液C進行觀測，藍藻呈單細胞形態(tài)存在，對混合液C中的藻細胞密度進行計數(shù)，計算混合液C中藻細胞密度S，并對混合液C中藻細胞按照“偽空胞提純方法”進行提取偽空胞，檢驗偽空胞的完整性；
[0034](6)取Iml混合液C，利用氣體監(jiān)測裝置，監(jiān)測樣品中偽空胞氣體含量，所得偽空胞氣體含量，記為Vtll;
[0035](7)計算平均每個藻細胞中偽空胞的氣體含量W1= V 01/S ；
[0036](8)根據(jù)平均每個藻細胞的偽空胞氣體含量，計算平均每個藻細胞中的偽空胞產生的浮力！F1= PgV1;
[0037](9)取Iml未經任何處理的藍藻水華樣品A，利用氣體監(jiān)測裝置，測定群體中偽空胞和群體細胞間空隙中氣體總含量Vci2;
[0038](10)計算平均每個藻細胞中偽空胞和群體細胞間空隙的氣體含量..N2= V 02/S ;
[0039](11)群體細胞間空隙氣體V3= V 2-V1；
[0040](12)每個藻細胞的群體細胞間空隙氣體含量份額產生的浮力F3= P gV 3；
[0041](13)對比匕和F 3即可計算出偽空胞和群體細胞間空隙分別在藻華復蘇過程產生浮力的貢獻。
[0042]所述“偽空