基于膜結(jié)構(gòu)的人abo血型反定型檢測方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種血型判定檢測技術(shù)，特別是一種基于膜結(jié)構(gòu)的人ABO血型反定型檢測方法。
【背景技術(shù)】
[0002]血型檢驗已廣泛應(yīng)用于各級醫(yī)療機構(gòu)，其中ABO血型系統(tǒng)和抗Rh(D)的檢測已經(jīng)作為常規(guī)檢測。而血型檢測的原理是基于抗原-抗體之間的特異性反應(yīng)，進而產(chǎn)生細胞凝集效應(yīng)。為了確保臨床輸血的安全，避免因為血型不相容導(dǎo)致的繼發(fā)性溶血性輸血反應(yīng)，有必要對紅細胞表面抗原以及血清或血漿中的抗體進行檢測。而使用血型定型試劑檢測紅細胞表面抗原稱為正定型檢測；反之，使用紅細胞表面抗原檢測血清中相應(yīng)的抗體稱之為反定型檢測。《中華人民共和國藥典2010版》公布的健康獻血員血型檢測標(biāo)準(zhǔn)中明確指出，須使用國家藥品監(jiān)督管理當(dāng)局批準(zhǔn)的抗A、抗B血型定型試劑進行檢測。而且，ABO血型檢測結(jié)果，應(yīng)以正、反定型法鑒定均合格為準(zhǔn)。
[0003]而目前血型反定型臨床檢測中用試管法、平板法和柱凝集技術(shù)等。而試管法、平板法缺乏客觀判斷的依據(jù)，有時容易造成錯誤判斷。柱凝集法的結(jié)果客觀，易于標(biāo)準(zhǔn)化，目前在逐漸替代前者。但是，柱凝集法需輔助設(shè)備，耗時長，限制了在緊急狀況下的應(yīng)用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的是為了解決上述問題，設(shè)計了一種基于膜結(jié)構(gòu)的人ABO血型反定型檢測方法。
[0005]實現(xiàn)上述目的本發(fā)明的技術(shù)方案為，一種基于膜結(jié)構(gòu)的人ABO血型反定型檢測方法，該方法選用能夠允許單個紅細胞通過的濾膜作為核心材料，將血型抗原結(jié)合到濾膜上，濾膜的周邊包圍有吸水材料，檢測時將待檢血清或血漿滴加在濾膜表面，再用沖洗液沖洗后，再將特定的反定型指示劑細胞滴加到與之對應(yīng)濾膜表面，最后使用沖洗液沖洗。如果血清或者血漿中含有與濾膜上抗原發(fā)生特異性反應(yīng)的抗體，則血清或血漿中抗體將被結(jié)合到濾膜上，進而與對應(yīng)的反定型指示劑細胞發(fā)生抗原抗體結(jié)合，指示紅細胞則會留在膜表面形成肉眼可見的紅色團塊；如果血清或者血漿中不含與濾膜上抗原發(fā)生特異性反應(yīng)的抗體，則對應(yīng)的反定型指示劑細胞則不會發(fā)生抗原抗體結(jié)合，指示劑紅細胞將會隨沖洗液液體滲出。操作人員可依據(jù)紅細胞是否在濾膜形成肉眼可見的紅色團塊來判斷結(jié)果，確定待測血清或者血漿的抗體，從而確定血型。
[0006]所述該方法選用能夠允許單個紅細胞通過的濾膜作為核心材料，而濾膜材質(zhì)可以是玻璃纖維膜或硝酸纖維膜或硅酸鹽顆粒等能夠形成特定連續(xù)液流通道的固體，且濾膜的內(nèi)徑在2 — 20微米之間。
[0007]所述濾膜的周邊包圍有吸水材料，濾膜的形狀為方形或者圓形，吸水材料包圍濾膜的方式為全部包圍或者部分包圍。
[0008]所述血型抗體結(jié)合到濾膜上，血型抗原結(jié)合到濾膜上的方法為物理吸附法或者化學(xué)交聯(lián)法。
[0009]所述檢測時將待檢血清或血漿滴加在濾膜表面，其中待檢血清或血漿為體積約10—200 μ L的新鮮的人血清或者血漿。
[0010]所述檢測時將特定的反定型指示劑紅細胞滴加在與之對應(yīng)的濾膜表面，其中特定的反定型指示劑紅細胞可以是一組A紅細胞懸液、B紅細胞懸液、O紅細胞懸液，也可以是一組AB型紅細胞懸液、O紅細胞懸液；指示劑細胞的濃度可以在0.5% -20%范圍內(nèi)；注意在滴加時，具有相同抗原的反定指示劑細胞和濾膜相對應(yīng)。
[0011]該檢測方法還包括檢測試劑盒，檢測試劑盒是由檢測卡以及反定型指示劑細胞組成。其中檢測卡內(nèi)設(shè)有能夠允許單個紅細胞通過的濾膜，將人ABO血型抗原結(jié)合到濾膜上，濾膜周邊墊有吸水墊，吸水墊的面積要大于濾膜，且濾膜和吸水墊都通過檢測試劑盒內(nèi)的塑料固體結(jié)構(gòu)來做固定和支撐。而反定型指示劑細胞則是具有ABO血型抗原的一組紅細胞。
[0012]檢測時，將待檢血清或血漿滴加到檢測卡的濾膜表面，微量沖洗液沖洗后,再將特定的反定型指示劑細胞滴加到與之對應(yīng)的濾膜表面，最后使用沖洗液沖洗。如果血清或者血漿中含有與濾膜上抗原發(fā)生特異性反應(yīng)的抗體，血清或血漿中抗體將被結(jié)合到濾膜上，進而與對應(yīng)的反定型指示劑細胞發(fā)生抗原抗體結(jié)合，指示紅細胞則會留在膜表面形成肉眼可見的紅色團塊；反之，如果血清或者血漿中不含與濾膜上抗原發(fā)生特異性反應(yīng)的抗體，對應(yīng)的反定型指示劑細胞不會發(fā)生抗原抗體結(jié)合，指示劑紅細胞將會隨沖洗液液體滲出，則濾膜上不會形成肉眼可見的紅色團塊。
[0013]所述沖洗液為生理鹽水。
[0014]利用本發(fā)明的技術(shù)方案制作的基于膜結(jié)構(gòu)的人ABO血型反定型檢測方法，具有無需特殊設(shè)備，檢測時間短，結(jié)果客觀等優(yōu)勢，具有較好的臨床推廣價值。
【附圖說明】
[0015]圖1是本發(fā)明所述基于膜結(jié)構(gòu)的人ABO血型反定型檢測試劑盒的單孔結(jié)構(gòu)示意圖；
[0016]圖中，1、試劑盒底板；2、濾膜；3、吸水墊；4、帶有抗原的濾膜區(qū)域。
[0017]圖2是本發(fā)明所述基于膜結(jié)構(gòu)的人ABO血型反定型檢測試劑盒的結(jié)構(gòu)示意圖；
[0018]圖中，1、試劑盒底板；2、濾膜。
[0019]圖3是本發(fā)明所述基于膜結(jié)構(gòu)的人ABO血型反定型檢測試劑盒的結(jié)構(gòu)示意圖的內(nèi)部結(jié)構(gòu)示意圖；
[0020]圖中，1、試劑盒底板；2、帶有抗原的濾膜；3、吸水墊。
【具體實施方式】
[0021]下面結(jié)合附圖對本發(fā)明的進行具體描述，
[0022]實施例1
[0023]一種基于膜結(jié)構(gòu)的人ABO血型反定型檢測方法，該方法選用能夠允許單個紅細胞通過的濾膜作為核心材料，將血型抗原結(jié)合到濾膜上，濾膜的周邊包圍有吸水材料制。檢測時，將待檢血清或血漿滴加到濾膜表面，沖洗液沖洗后，再將特定的反定型指示劑細胞滴加到與之對應(yīng)濾膜表面，最后使用沖洗液沖洗。如果血清或者血漿中含有與濾膜上抗原發(fā)生特異性反應(yīng)的抗體，血清或血漿中抗體將被結(jié)合到濾膜上，進而與對應(yīng)的反定型指示劑細胞發(fā)生抗原抗體結(jié)合，指示紅細胞則會留在膜表面形成肉眼可見的紅色團塊；如果血清或者血漿中不含與濾膜上抗原發(fā)生特異性反應(yīng)的抗體，對應(yīng)的反定型指示劑細胞則不會發(fā)生抗原抗體結(jié)合，指示劑紅細胞將會隨沖洗液液體滲出。操作人員可依據(jù)紅細胞是否在濾膜形成肉眼可見的紅色團塊來判斷結(jié)果，確定待測血清或者血漿的抗體，從而確定血型。根據(jù)所述的檢測方法設(shè)計的檢測試劑盒，主要包括檢測卡和反定型指示劑細胞兩部分。其中，檢測卡內(nèi)設(shè)有內(nèi)徑在2-20微米之間，能夠允許單個紅細胞通過的濾膜，將人ABO血型抗原結(jié)合到濾膜上，濾膜周邊墊有吸水墊，吸水墊的面積要大于濾膜，且濾膜和吸水墊都通過檢測試劑盒內(nèi)的塑料固體結(jié)構(gòu)來做固定和支撐，單孔結(jié)構(gòu)如圖1所示；而反定型指示劑細胞則是具有ABO血型抗原的一組紅細胞，可以是一組A紅細胞懸液、B紅細胞懸液、O紅細胞懸液，也可以是一組AB型紅細胞懸液、O紅細胞懸液，其濃度范圍在0.5% -20%。而制備紅細胞懸液的液體可以是生理鹽水或其它等滲溶液，也可以是紅細胞保存液。
[0024]實施例2
[0025]ABO血型的反定型檢測試劑盒制備以及檢測步驟(三種反定型指示劑細胞)
[0026]1、人ABO血型抗原的制備
[0027]分別取得I袋新鮮的人A型、B型、O型血液，經(jīng)過處理得到三種血型的紅細胞，使用低滲壓溶液分別破碎三種(A型、B型、O型)紅細胞，離心去上清，再使用相同的低滲壓溶液洗滌沉淀，直至上清無色透明，收集沉淀即為紅細胞膜，作為血型抗原提取物。加入抗原保護劑稀釋抗原提取物。
[0028]2、人ABO血型抗原的固定
[0029]使用化學(xué)方法處理活化濾膜，將稀釋后的抗原提取物滴加到1.5cmXl.5cm濾膜的中心，然后37°C烘干處理并密封保存。
[0030]3、人ABO血型反定型檢測卡的組裝
[0031]在一帶有3個孔(孔徑為0.5cm)的長方形的塑料板背部貼上3片帶有不同抗原的1.5cmX 1.5cm濾膜,使聚酯版上的孔與濾膜上的中心對應(yīng)。然后將2.5cm寬的吸水紙貼在濾膜的兩側(cè)或周邊。濾膜和吸水紙都是使用防水膠黏貼在聚酯版上，防止加樣和沖洗過程濾膜和吸水紙脫落或串位置，最后