一種不孕不育聯(lián)合檢測試劑盒及其檢測方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及一種檢測試劑盒，更為具體地說是指一種不孕不育聯(lián)合檢測試劑盒及 其檢測方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 目前市場上常見的用于不孕不育檢測的產(chǎn)品主要有膠體金檢測、ELISA檢測等檢 測形式的產(chǎn)品。膠體金檢測是將抗原或抗體結(jié)合在硝酸纖維素膜上，并將標(biāo)記有抗體或抗 原膠體金干燥在結(jié)合墊上，若樣品含有特異性抗體或抗原可先于膠體金上的抗原或抗體結(jié) 合，并一同向吸水紙的方向?qū)游觯?dāng)層析至檢測線時，在與檢測線上的抗原或抗體結(jié)合，最 后通過顏色判斷陰陽性。膠體金主要是進(jìn)行單人份單項目檢測（即相關(guān)走個檢測項目單次 只能進(jìn)行一個項目檢測)，無法做到單人份多項目檢測即檢測單通道，同時膠體金檢測相關(guān) 項目的靈敏度較低，W上原因都限制了該類產(chǎn)品在臨床中的使用。
[0003] 而化ISA檢測則是將抗原或抗體結(jié)合于聚苯己締板孔內(nèi)，此時抗原或抗體仍可具 有免疫活性，可進(jìn)行抗原抗體反應(yīng)，配合酶催化底物呈色反應(yīng)(靈敏度高)，即可顯示特定抗 原或抗體是否存在，并可利用呈色之深淺進(jìn)行定性或定量分析。ELISA的檢測形式雖然可W 做到多人份檢測，但是該類產(chǎn)品同樣是單通道單項目檢測（即相關(guān)走個檢測項目單次只能 進(jìn)行一個項目檢測)，并且需要專業(yè)的操作人員進(jìn)行臨床檢測W及相關(guān)配套的儀器如酶標(biāo) 儀、洗板機(jī)、水浴箱等進(jìn)行協(xié)作；同時，該類產(chǎn)品檢測的底物由A/B液組成，操作麻煩，混合 后易失效，陰性對照非特異性顯色較強(qiáng)、信噪比較低；最后限制該類產(chǎn)品使用的是化ISA檢 測需要耗時將近3個小時，試劑反應(yīng)慢，在實(shí)際的臨床使用中導(dǎo)致諸多不便。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明提供一種不孕不育聯(lián)合檢測試劑盒及其檢測方法，W解決現(xiàn)有不孕不育檢 測產(chǎn)品存在無法做到單人份多項目檢測、靈敏度較低、操作麻煩、陰性對照非特異性顯色較 強(qiáng)、試劑反應(yīng)慢等缺點(diǎn)。
[0005] 本發(fā)明采用如下技術(shù)方案： 一種不孕不育聯(lián)合檢測試劑盒，包括W下四種體積份數(shù)含量的試劑：樣本稀釋液10 份、酶結(jié)合物5~6份、沖洗液10份W及底物5~6份；其中，所述樣本稀釋液包括0. 46%磯 酸二氨鋼、0. 58%十二水合磯酸氨二鋼、2%氯化鋼、5%的新生小牛血清、0. 2%氯化裡、0. 2%酪 蛋白、0. 1%駿甲基纖維素鋼鹽、0. 04%己二胺四己酸、0.l%Proclin-300,其余為去離子水或 蒸饋水；所述酶結(jié)合物包括0. 46%S哲甲基氨基甲燒、1%牛血清白蛋白、0. 2%氯化裡、0. 8% 氯化鋼、0. 1%吐溫80、0. 2%聚己二醇、0. 04%己二胺四己酸、0. 5%對哲基苯甲酸鋼、0. 05%HRP 標(biāo)記的羊抗人IgG、0.l%Proclin-300,其余為去離子水或蒸饋水；所述沖洗液包括0. 46%磯 酸二氨鋼、0. 58%十二水合磯酸氨二鋼、0. 01%十二烷基硫酸鋼、0. 1%吐溫80、0. 1%吐溫20、 0. 04%己二胺四己酸、0.l%Proclin-300,其余為去離子水或蒸饋水；所述底物包括0. 12% - 水合巧樣酸鋼、0. 05%咪挫、0. 05%聚己締化咯燒酬、0. 04%己二胺四己酸、0. 05%核糖、0. 4〇/〇 葡萄糖、0. 01%聚己締醇、0. 08%硫代硫酸鋼、0. 02%TMB、0. 03%過氧化氨、0.l%Proclin-300， 其余為去離子水或蒸饋水。
[0006] 上述一種不孕不育聯(lián)合檢測試劑盒的檢測方法，包括W下步驟： 一、 檢測準(zhǔn)備 (1) 平衡室溫；取出檢測試劑盒平衡至室溫18~26°C; (2) 樣本處理：將3000巧m的待測血清離屯、lOmin，取200yL樣本稀釋液，混入5yL已 離屯、處理的血清，即為已處理樣本； 二、 樣本檢測 (3) 潤洗；在卡片窗口內(nèi)膜面上加200yL樣本稀釋液，均勻潤洗卡片窗口內(nèi)膜面，待其 滲入； (4) 加入樣本；將已處理樣本全部加于步驟（3)中潤洗過的卡片窗口內(nèi)膜面，待其滲 入； (5) 沖洗；待樣本完全滲入后，加入200yL沖洗液，待其滲入； (6) 加入酶結(jié)合物；往步驟（5)沖洗過的卡片窗口內(nèi)膜面上加入200yL酶結(jié)合物，完全 滲入后加入200yL沖洗液，W除去未結(jié)合的酶結(jié)合物； (7) 顯色及終止；繼續(xù)往卡片窗口內(nèi)膜面上加入200yL底物并開始計時，10~15min 后加入100yL去離子水或蒸饋水W終止顯色。
[0007] 由上述對本發(fā)明的描述可知，和現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下優(yōu)點(diǎn)： 1、本發(fā)明的檢測試劑盒通過蛋白生物巧片的形式，可W做到多通道多人份檢測同時進(jìn) 行（即不孕不育走個檢測項目可W同時進(jìn)行檢測），并且靈敏度可W達(dá)到ELISA產(chǎn)品的檢測 水平，并遠(yuǎn)高于膠體金產(chǎn)品；同時本發(fā)明的檢測試劑盒的檢測時間可W接近于膠體金的并 遠(yuǎn)遠(yuǎn)優(yōu)于化ISA的檢測時間，且不需要專業(yè)人員進(jìn)行操作，方便且高效，能很好的滿足臨床 使用。
[0008] 2、本發(fā)明檢測試劑盒的樣本稀釋液，加入駿甲基纖維素鋼鹽和氯化裡，其中，駿甲 基纖維素鋼鹽起到很好的封閉作用，氯化裡可W促進(jìn)特異性反應(yīng)，故該樣本稀釋液具有封 閉效果好，可很好地降低非特異性、增強(qiáng)特異性的特點(diǎn)。
[0009] 3、本發(fā)明檢測試劑盒的酶結(jié)合物，加入對哲基苯甲酸鋼和聚己二醇，其中，對哲基 苯甲酸鋼可增強(qiáng)酶的穩(wěn)定性，聚己二醇則可增強(qiáng)酶反應(yīng)過程的靈敏度，故該酶結(jié)合物具有 增強(qiáng)酶穩(wěn)定性、封閉效果良好W及靈敏度高等特點(diǎn)。
[0010] 4、本發(fā)明檢測試劑盒的沖洗液，加入十二烷基硫酸鋼、吐溫20W及吐溫80,其中， 吐溫20與吐溫80的組合使用可增強(qiáng)使用效果，可很好的完成清洗過程，故該沖洗液可很好 地沖洗未完全反映的殘留實(shí)際，提高信噪比。
[0011] 5、本發(fā)明檢測試劑盒的底物，加入核糖、葡萄糖、聚己締醇W及硫代硫酸鋼，核糖、 葡萄糖、聚己締醇等可W很好的保護(hù)并穩(wěn)定TMB及過氧化氨的化學(xué)性質(zhì)，增強(qiáng)試劑穩(wěn)定性， 而硫代硫酸鋼則可W很好的增強(qiáng)特異性反應(yīng)。故該底物具有示蹤反應(yīng)結(jié)果，單組份成分，操 作簡便，穩(wěn)定性良好等特點(diǎn)。
【具體實(shí)施方式】
[0012] 下面說明本發(fā)明的【具體實(shí)施方式】。
[001引 實(shí)施例一 一種不孕不育聯(lián)合檢測試劑盒，內(nèi)含20片檢測卡，具體包括W下四種試劑；樣本稀釋 液lOmL、酶結(jié)合物5mL、沖洗液lOmLW及底物5mL。其中，樣本稀釋液包括0. 46%磯酸二氨 鋼、0. 58%十二水合磯酸氨二鋼、2%氯化鋼、5%的新生小牛血清、0. 2%氯化裡、0. 2%酪蛋白、 0. 1%駿甲基纖維素鋼鹽、0. 04%己二胺四己酸、0.l%Proclin-300,其余為去離子水或蒸饋 水；酶結(jié)合物包括0. 46%S哲甲基氨基甲燒、1%牛血清白蛋白、0. 2%氯化裡、0. 8%氯化鋼、 0. 1%吐溫80、0. 2%聚己二醇、0. 04%己二胺四己酸、0. 5%對哲基苯甲酸鋼、0. 05%HRP標(biāo)記的 羊抗人IgG、0.l%Proclin