一種油脂氧化程度快速檢測方法及測試盒的制作方法
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明涉及油脂氧化程度的快速檢測技術，具體涉及油脂氧化程度的快速檢測方 法及測試盒。
【背景技術】
[0002] 油脂氧化是危及油脂安全的重要方面。受來源、存放等因素影響，油脂往往會發(fā)生 氧化、酸敗反應，其產(chǎn)生的過氧化物會漸進地影響身體組織、破壞細胞膜結(jié)構，引起貧血、肝 腎異常、昏睡等問題；產(chǎn)生的衍生物（醛）會降低食欲引起下痢；另外蛋白質(zhì)與次級氧化產(chǎn) 物發(fā)生交聯(lián)反應，降低蛋白質(zhì)的消化吸收。
[0003] 能夠?qū)崿F(xiàn)快速檢測油脂氧化程度對于油脂的實際采購和品控有非常重要的意義。
[0004] 目前快速檢測油脂氧化程度的方法主要有酸價、過氧化價，Kreis試驗（克雷斯試 驗）。
[0005] 酸價雖測定容易，但通常不能單純評價油脂品質(zhì)，須配合其他方法鑒定。油脂酸價 的提高，部分由于油脂水解而生成游離脂肪酸，部分由于過氧化物的分解所產(chǎn)生羥基化合 物再氧化而生游離脂肪酸，因此游離脂肪酸生成結(jié)構隨條件而異，不易做為油脂氧化程度 的判斷指標。
[0006] 羰氧化物系在油脂氧化過程中生成，過氧化價可做氧化程度判斷，但過氧化物在 水中的存在或高濕下易分解，因此油脂氧化至某一程度后，過氧化價反而會降低。因此，過 氧化價應為所存在過氧化物量與分解量之差，故需配合其他氧化測定方法，以利于品質(zhì)的 正確判斷。
[0007]Kreis試驗，此為醛類及酮類化合物的呈色反應，用作油脂是否氧化變質(zhì)的定性反 應，方便簡單，使用成本低，結(jié)果快速，在國內(nèi)外一度曾成為商業(yè)、衛(wèi)生監(jiān)督部門最初用于評 價脂肪氧化的一種重要的檢驗方法。但Kreis試驗的最大缺點是無法定量，造成該原因的 一個重要因素是，各個實驗室之間很難得到一致的檢驗結(jié)果，不同的人員操作，或同一人員 兩次操作所的顏色可能會有差異，故而迄今只作為定性方法使用，故而迄今多用于定性。
[0008] 發(fā)明專利《快速檢測油脂氧化程度的方法及測試盒》（公開號104048960A)中通過 加入1，1，3, 3-四乙氧基丙烷來實現(xiàn)油脂氧化程度（以丙二醛含量計）的定量檢測，但在該 方法中沿用了Kreis試驗的傳統(tǒng)操作方法，存在穩(wěn)定性及重復性差，顯色時間長，油層顯色 層分離較慢等缺陷。
[0009] 為了克服上述現(xiàn)有技術的不足，本發(fā)明提供一種基于Kreis試驗，穩(wěn)定、快速、可 定量的油脂氧化程度快速檢測方法，及配合該檢測方法制備的油脂氧化程度快速檢測測試 盒。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0010] 為了實現(xiàn)快速、便捷、低成本，且可穩(wěn)定定量地檢測油脂氧化程度，本發(fā)明提供一 種油脂氧化程度的快速檢測方法及測試盒。
[0011] 本發(fā)明基于Kreis試驗方法，原理為油脂氧化二次分解產(chǎn)物與間苯三酚發(fā)生顯色 反應。通用方法為：取試樣5mL于試管中，加入濃鹽酸5mL，用橡皮塞塞好管口，劇烈振蕩10s 左右，再加0. 1 %間苯三酚乙醇溶液5mL，加塞劇烈振蕩10s左右，使酸層分離，觀察下層溶 液顏色，以判斷油脂氧化程度。
[0012] 經(jīng)實際操作發(fā)現(xiàn)該方法：
[0013] 1、試管所顯顏色的深淺，不穩(wěn)定：不但隨操作人員的不同而變化，同一操作人員， 多次操作所顯顏色也有明顯差異；
[0014] 2、顯色時間有出入：從數(shù)秒鐘到數(shù)小時，很多油樣所顯顏色會隨放置時間的延長， 顏色加深；
[0015] 3、不易分層，影響觀察：很多油樣，在震蕩后，需要很長時間的靜置分層，否則不利 于顏色的觀察和比對，特別是油樣顏色較深的樣品，嚴重影響比色效果。
[0016] 針對上述問題，發(fā)明人做了大量的實驗研究，發(fā)現(xiàn)通過調(diào)整酸溶液及間苯三酚溶 液的加入比例，可大大提高該反應的速度和顯色穩(wěn)定性，針對市場所購油樣的測試發(fā)現(xiàn)，溶 液分層速度大大提高，大約10分鐘即可徹底完成顯色，不同技術人員進行試驗操作，顯色 結(jié)果無明顯差異，通過調(diào)整間苯三酚溶液溶劑的種類，如采用甲醇，分層速度再次提高，很 快得到澄清透明的比色層，便于觀察；調(diào)整后，可大大降低所用酸溶液的濃度，操作更為安 全。
[0017] 本發(fā)明采用兩種比色方案：一種是比色層在上層，即通過在原有標準操作方法的 基礎上，減少強酸溶液的用量，使油相在比色層的下方；另一種是在上述基礎上再加入適量 的水或水溶液，混合后，使油相再度返回上層，對下層進行比色。兩種方案各有特色，可根據(jù) 待測油樣的試劑情況選擇，以達到最佳顯色效果（不同氧化程度所顯顏色的色階明顯，所 得溶液更為澄清透明，減少油樣本身顏色影響等）。
[0018] (一）油脂氧化程度快速檢測方法具體方案如下：
[0019] 1.比色相在上層的檢測方法：
[0020] 取待測油樣，依次加入強酸溶液，間苯三酚的醇溶液，振搖，顯色穩(wěn)定后比色，其 中，加入的強酸溶液與間苯三酚的醇溶液的體積比為1: (1. 5-50)，比色時觀察上層相顏色。
[0021] 所述強酸溶液為至少含有鹽酸、硫酸、硝酸任一一種水溶液，其中氫離子濃度為 3-30mol/L，所述間苯三酚的醇溶液為0. 01-1 %間苯三酚的甲醇或乙醇或甲醇乙醇二者的 混合溶液。
[0022] 2.比色相在下層的檢測方法：
[0023] -種油脂氧化程度快速檢測方法，為取待測油樣，依次加入強酸溶液，間苯三酚的 醇溶液，振搖，顯色穩(wěn)定后，不用馬上比色，而是再加入一定量的水或水溶液，振搖后靜置， 觀察下層相溶液比色。
[0024] 所述水或水溶液與所加強酸溶液體積之和，與所加間苯三酚的醇溶液體積比為 (0. 8-20) : 1，所述水溶液為上述強酸溶液或氫氧化鈉/氫氧化鉀的水溶液或堿金屬鹽的水 溶液。
[0025] 3?比色方式
[0026] 上述兩種檢測方法所述比色，可直接觀察顏色深淺，判斷油脂的氧化程度，顏色越 深氧化程度越高，也可與比色卡比較確定油脂氧化程度。
[0027] 所述比色卡的數(shù)值可以用丙二醛值來表示，所述比色卡的制備方法，可通過向 未氧化或新鮮油樣中加入一定量的1，1，3, 3-四乙氧基丙烷配制成一系列含有丙二醛 0-50ppm的丙二醛標準溶液，采用與待測油樣相同的檢測方法，顯色后，根據(jù)相應的上層或 下層顏色印制相應比色卡。
[0028] (二）所述油脂氧化程度快速檢測測試盒具體方案如下：
[0029] 該油脂氧化程度快速檢測測試盒包含測試液、比色杯和比色卡，檢測結(jié)果以丙二 醛計；所述測試液包括強酸溶液、間苯三酚醇溶液。
[0030] 所述快速檢測測試盒的使用方法為，取一定量待測油樣依次與1份（體積）強酸 溶液、1.5-50份（體積）間苯三酚醇溶液混合，顯色穩(wěn)定后，將待測比色液上層溶液的顏色 與比色卡比較，得到待測油樣的氧化程度具體結(jié)果，以丙二醛計。
[0031] 或，所述測試液包括強酸溶液、間苯三酚醇溶液、水或水溶液，所述快速檢測測試 盒的使用方法為，取一定量待測油樣依次與1份（體積）強酸溶液、1. 5-50份（體積）間苯 三酚醇溶液混合，顯色穩(wěn)定后，加入一定量的水或上述強酸溶液，振搖并靜置后，將待測比 色液下層溶液的顏色與比色卡比較，得到待測油樣的氧化程度具體結(jié)果，以丙二醛計；所述 水與強酸溶液的加入量之和或強酸溶液的加入量總和，與所加間苯三酚的醇溶液體積比為 (0? 8-20) :1〇
[0032] 所述比色卡的制備：可通過向未被氧化或新鮮油樣中加入一定量的1，1，3, 3-四 乙氧基丙烷配制成一系列含有丙二醛0-50ppm的丙二醛標準溶液，采用與待測油樣相同的 檢測方法，顯色后，根據(jù)相應的上層或下層顏色印制相應比色卡。
[0033] 本發(fā)明的優(yōu)點：
[0034] 1)簡單方便，使用和操作成本低廉，利于現(xiàn)場操作，快速給出檢測結(jié)果；
[0035] 2)克服Kreis試驗顯色不穩(wěn)定、難定量的缺陷，不受人員、操作等的影響，可以根 據(jù)氧化程度的不同，得到穩(wěn)定的顯色結(jié)果，實現(xiàn)定量；
[0036] 3)大大減少強酸的使用量，減少對操作人員的危害，同時減少廢棄物對環(huán)境的污 染。
【具體實施方式】
[0037] 下面結(jié)合實施例對本發(fā)明做進一步的詳細描述。但不以此限制本發(fā)明。
[0038] 如無特殊說明本發(fā)明各試劑濃度均為質(zhì)量百分比濃度。
[0039] 實施例中強酸溶液以A試液代替；間苯三酚醇溶液以B試液代替；水或水溶液以C 試液代替。
[0040] 實施例1
[0041] 1)油樣
[0042] 1#油樣：新鮮大豆油
[0043] 2#油樣：待測食用大豆油
[0044] 3#油樣：待測食用大豆油
[0045] 4#油樣：待測食用大豆油
[0046] 2)試劑
[0047]A試液：濃鹽酸（37 %，約 12mol/L)
[0048] B試液：間苯三酚乙醇溶液（0? 1 % )
[0049] C試液：為A試液
[0050] 3)比色卡/比色參比液制備
[0051] 向1#油樣中加入一定量的1，1，3, 3-四乙氧基丙烷，配制成含有丙二醛0、2. 5ppm、 5ppm的丙二醛標準油樣，分別取上述油樣5