蜈蚣藥材的質(zhì)量控制方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種蜈蚣藥材的質(zhì)量控制方法，屬于中藥領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 娛蟻為娛蟻科動物少棘巨娛蟻Scolopendra subspinipes mutilans L. Koch的干 燥體。春、夏二季捕捉，用竹片插入頭尾，繃直，干燥。具有熄風(fēng)鎮(zhèn)痙，通絡(luò)止痛，攻毒散結(jié)之 功效，用于肝風(fēng)內(nèi)動，痙攣抽搐，小兒驚風(fēng)，中風(fēng)口喁，半身不遂，破傷風(fēng)，風(fēng)濕頑痹，偏正頭 痛，瘡瘍，瘰疬，蛇蟲咬傷。
[0003] 蜈蚣主要含組織胺樣物質(zhì)及溶血性蛋白質(zhì)，此外尚含氨基酸、脂肪酸、膽固醇及微 量元素（苗明三.現(xiàn)代實(shí)用中藥質(zhì)量控制技術(shù)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2000:1055)。 《中國藥典》2010年版一部中蜈蚣的質(zhì)量控制項(xiàng)目僅有性狀、水分、總灰分、浸出物（國家藥 典委員會.中華人民共和國藥典[S]. 2010年版一部.化學(xué)工業(yè)出版社，2010:335-336)，缺 乏專屬性強(qiáng)的薄層色譜鑒別或含量測定等質(zhì)量控制項(xiàng)目，使得蜈蚣藥材的質(zhì)量難以得到有 效地保證。
[0004] 國內(nèi)有報(bào)道對蜈蚣中氨基酸類成分（吳剛.少棘蜈蚣研究[J].生物化學(xué)雜志， 1992,24(11) :650)和組織胺（鄧芳，方紅.蜈蚣藥材中毒性成分組織胺的含量測定[J].中 草藥，1997, 28(8) :472)進(jìn)行測定，氨基酸類成分及組織胺在多數(shù)動植物組織中廣泛存在， 此類成分專屬性不強(qiáng)，難以有效控制蜈蚣的質(zhì)量。韓國學(xué)者從蜈蚣中分離得到喹啉類化合 物 3,8_ 二羥基喹啉，具有抗腫瘤活性（Surk-Sik Moon 等.Jineol，a Cytotoxic Alkaloid from the Centipede Scolopendra subspinipes[J]. Nat. Prod. 1996, 59:777-779)，但未見 以對蜈蚣中的3,8-二羥基喹啉為指標(biāo)成分建立測定方法的報(bào)道。本發(fā)明人從蜈蚣中分離 得到了 3,8_二羥基喹啉，其為黃綠色粉末，以此成分作為蜈蚣的指標(biāo)成分，首次建立了蜈 蚣藥材的質(zhì)量控制方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的是提供一種蜈蚣藥材的質(zhì)量控制方法。該方法是以蜈蚣中的3， 8-二羥基喹啉為指標(biāo)成分，采用高效液相色譜法控制蜈蚣中指標(biāo)性成分3,8-二羥基喹啉 的重量百分比或用薄層色譜法鑒別蜈蚣中3,8-二羥基喹啉。
[0006] 本發(fā)明技術(shù)方案以高效液相色譜法測定蜈蚣中的3,8_二羥基喹啉，包括下列步 驟：
[0007] 1)對照品溶液制備：精密稱取3,8_二羥基喹啉對照品，用甲醇溶解，配制成對照 品溶液；
[0008] 2)供試品溶液的制備：取蜈蚣藥材粉末，精密稱定，加25倍量甲醇，稱重，超聲處 理30分鐘，取出，放冷，補(bǔ)重，搖勻，濾過，作為供試品溶液；
[0009] 3)樣品的測定：分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液，注入液相色譜儀，測定， 色譜條件：進(jìn)樣體積5y1 ;流速：0. 6 - 1. 0ml/min;檢測波長252nm;柱溫：35- 50°C;流動 相：甲醇一 lOmmol/L磷酸二氫鉀溶液=28- 36 :72- 64。
[0010] 優(yōu)選地，步驟1)所述3,8-二羥基喹啉對照品濃度為0. 00362mg/ml。
[0011] 優(yōu)選地，步驟3)所述色譜條件為：進(jìn)樣體積5 y 1 ;流速：0. 6ml/min ;檢測波長： 252nm ;柱溫：40°C ;流動相：甲醇一 10mmol/L磷酸二氫鉀溶液=28 :64。
[0012] 本發(fā)明技術(shù)方案已薄層色譜法鑒別蜈蚣中3,8-二羥基喹啉，包括以下步驟：
[0013] 1)對照品溶液的制備：取3,8_二羥基喹啉對照品適量，加甲醇溶解，配制成濃度 為0? lmg/ml -1. Omg/ml的3,8_二羥基喹啉對照品溶液；
[0014] 2)供試品溶液的制備：取蜈蚣藥材粉末，精密稱定，加10倍量甲醇，超聲處理30 分鐘，取出，濾過，水浴蒸干，殘?jiān)铀苌?，用乙酸乙酯提?次，分取乙酸乙酯層，水浴蒸 干，殘?jiān)蛹状既芙?，作為供試品溶液?br>[0015] 3)點(diǎn)樣、展開：分別吸取對照品溶液、供試品溶液點(diǎn)于同一薄層板上，以氯仿：甲 醇：甲酸=10 :〇. 8-1. 5 :1為展開劑，展開，取出，瞭干，254nm紫外光燈下檢視。
[0016] 優(yōu)選地，步驟1)所述3,8_二羥基喹啉對照品溶液的濃度為為0. 8mg/ml。
[0017] 優(yōu)選地，步驟3)所述展開劑最佳為三氯甲烷：甲醇：甲酸=10:1.2:1。
[0018] 與現(xiàn)有技術(shù)比較，本發(fā)明蜈蚣藥材的質(zhì)量控制方法首次將3,8-二羥基喹啉作為 蜈蚣藥材質(zhì)量控制的指標(biāo)成分，采用高效液相色譜法和薄層色譜法對蜈蚣藥材進(jìn)行質(zhì)量控 制，操作簡便，條件可控，專屬性強(qiáng)，穩(wěn)定性和重現(xiàn)性好，可有效彌補(bǔ)中國藥典中蜈蚣藥材質(zhì) 量控制方法的不足，具有很強(qiáng)的實(shí)用性。本發(fā)明技術(shù)方案也可為中藥制劑中蜈蚣的質(zhì)量控 制提供參考。
【附圖說明】
[0019] 圖1是3，8-二羥基喹啉對照品的HPLC圖；
[0020] 圖2是蜈蚣藥材的HPLC圖，其中峰1是3,8-二羥基喹啉；
[0021] 圖3是不同批次的蜈蚣的薄層色譜圖。
【具體實(shí)施方式】
[0022] 以下通過【具體實(shí)施方式】對本發(fā)明作進(jìn)一步說明，但這并非是對本發(fā)明的限制，本 領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)本發(fā)明的基本思想，可以做出各種修改或改進(jìn)，但只要不脫離本發(fā)明的 基本思想，均在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。
[0023] 實(shí)施例1蜈蚣藥材質(zhì)量控制方法
[0024] 1)對照品溶液的制備：精密稱取3，8-二羥基喹啉，用甲醇溶解，配制成 0? 00362mg/ml的3,8-二羥基喹啉對照品溶液；
[0025] 2)供試品溶液的制備：取蜈蚣藥材粉末lg，精密稱定，加甲醇25ml，稱重，超聲處 理30min，取出，放冷，補(bǔ)重，搖勻，濾過，作為供試品溶液；
[0026] 3)樣品的測定：分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液，注入液相色譜儀，測定， 色譜條件：色譜柱：Kromasil C18 (4. 6mmX 250mm，5 y m)流速：0? 6ml/min ;檢測波長252nm ; 柱溫：35°C ;進(jìn)樣體積5 y 1 ;流動相：甲醇-10mm〇l/L磷酸二氫鉀=28 :64。
[0027]4)標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：精密吸取濃度為0. 00362mg/ml的3，8-二羥基喹啉對照 品溶液1 y 1、2 y 1、4 y 1、8 y 1、10 y 1、12 y 1，按上述色譜條件測定的峰面積，以進(jìn)樣量 為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，得回歸方程Y = 7774. 301X-44. 053, r = 9994,線性范圍 0. 00362 yg- 0.04344 yg。
[0028] 5)精密度試驗(yàn)：按照《中國藥典》2010年版一部附錄記載的方法，分別精密吸取同 一對照品溶液5 y 1，連續(xù)進(jìn)樣6次，按上述條件測定3,8-二羥基喹啉的峰面積，其RSD為 0? 657%〇
[0029] 6)穩(wěn)定性試驗(yàn)：按照《中國藥典》2010年版一部附錄記載的方法，精密吸取同一供 試品溶液5 y 1，分別在0, 2,4,6,8h進(jìn)樣，按上述色譜條件測定3,8-二羥基喹啉的峰面積， 其 RSD 為 0? 785%。
[0030] 7)重復(fù)性試驗(yàn)：按照《中國藥典》2010年版一部附錄記載的方法，取蜈蚣6份，精 密稱定，按照供試品溶液的制備方法制備供試品溶液，按上述色譜條件測定3,8-二羥基喹 啉的含量，其RSD為0. 536%。
[0031] 8)回收率試驗(yàn)：按照《中國藥典》2010年版一部附錄記載的方法，取6份已知含量 的藥材粉末約〇. 5g，精密稱定，分別精密加入0. 34mg的3,8-二羥基喹啉，按照供試品溶液 的制備方法制成加樣供試品溶液，按上述色譜條件測定含量，計(jì)算回收率，結(jié)果平均回收率 為 99. 22%，RSD 為 0? 373%。
[0032] 實(shí)施例2蜈蚣藥材質(zhì)量控制方法
[0033]1)對照品溶液的制備：精密稱取3，8-二羥基喹啉，用甲醇溶解，配制成 0? 00362mg/ml的3,8-二羥基喹啉對照品溶液；
[0034] 2)供試品溶液的制備：取蜈蚣藥材粉末lg，精密稱定，加甲醇25ml，稱重，超聲處 理30min，取出，放冷，補(bǔ)重，搖勻，濾過，作為供試品溶液；
[0035] 3)樣品的測定：分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液，注入液相色譜儀，測定， 色譜條件：色譜柱：Kromasil C18 (4. 6mmX 250mm，5 y m)流速：0? 8ml/min ;檢測波長252nm ; 柱溫：40°C ;進(jìn)樣體積5 y 1 ;流動相：甲醇-10mm〇l/L磷酸二氫鉀=32 :68。
[0036] 其他步驟同實(shí)施例1。
[0037] 實(shí)施例3蜈蚣藥材質(zhì)量控制方法
[0038]1)對照品溶液的制備：精密稱取3，8-二羥基喹啉，用甲醇溶解，配制成 0? 00362mg/ml的3,8-二羥基喹啉對照品溶液；
[0039] 2)供試品溶液的制備：取蜈蚣藥材粉末lg，精密稱定，加甲醇25ml，稱重，超聲處 理30min，取出，放冷，補(bǔ)重，搖勻，濾過，作為供試品溶液；
[0040] 3)樣品的測定：分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液，注入液相色譜儀，測定， 色譜條件：色譜柱：Kromasil C18 (4. 6mmX 250mm，5 y m)流速：0? 9ml/min ;檢測波長252nm ; 柱溫：45°C ;進(jìn)樣體積5 y 1 ;流動相：甲醇-10mm〇l/L磷酸二氫鉀=34 :67。
[0041] 其他