同時(shí)高效提取桃果肉中可溶性糖和有機(jī)酸的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及到一種同時(shí)提取桃果肉中可溶性糖和有機(jī)酸的方法，屬于化學(xué)工業(yè)中 的化學(xué)分析及儀器分析技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 在實(shí)踐中，對果實(shí)的可溶性糖和有機(jī)酸進(jìn)行分離測定時(shí)，可溶性糖和有機(jī)酸基本 都是分別提取的，且基本都是通過純水或一定濃度的乙醇或甲醇水溶液來提取，同時(shí)大多 數(shù)提取條件都是附加了加熱的條件，即水浴75-KKTC不等。也有少數(shù)文獻(xiàn)報(bào)道了利用純水 或一定濃度的乙醇水溶液（多為80%乙醇）同時(shí)提取可溶性糖和有機(jī)酸（如文獻(xiàn)《1-MCP 對凱特杏果實(shí)采后糖酸組分與含量的影響》；《不同品種蘋果果實(shí)中糖酸組成與含量分析》 等），選擇了直接提取或者冰浴或熱浴的方式提取，操作繁雜，條件苛刻，而且都是在中性條 件下進(jìn)行的，還未有文獻(xiàn)對同時(shí)提取時(shí)的提取劑添加酸性物質(zhì)進(jìn)行pH的調(diào)整。
[0003] 考慮到在實(shí)踐中，對大量的試驗(yàn)樣品進(jìn)行分離測定時(shí)，分別提取可溶性糖和有機(jī) 酸不僅浪費(fèi)材料，而且耗時(shí)耗力；進(jìn)行冰浴或者熱浴提取條件也比較苛刻，所以如果能實(shí)現(xiàn) 在常溫下能同時(shí)高效提取是最佳策略；但是目前為止，還未有文獻(xiàn)提出可以實(shí)現(xiàn)同時(shí)高效 提取果實(shí)中的可溶性糖和有機(jī)酸的方法。
[0004] 另外，在實(shí)踐中，用常規(guī)的純水或者乙醇水溶液作提取劑時(shí)，特別是純水作為提取 劑時(shí)，加入提取劑后，在常溫下不到一周就會發(fā)生蔗糖的降解或者發(fā)酵等，樣品破壞，嚴(yán)重 影響后續(xù)試驗(yàn)的進(jìn)行，拖慢研究進(jìn)度。目前該問題只能利用-20°c冷凍儲藏或者加快測定的 方式來避免，可是當(dāng)樣品量太多時(shí)，這些處理方式已經(jīng)無法滿足現(xiàn)實(shí)需求。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的是提供一種同時(shí)高效提取桃果肉中可溶性糖和有機(jī)酸的方法。
[0006] 為達(dá)到上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為：一種同時(shí)高效提取桃果肉中可溶性 糖和有機(jī)酸的方法，其步驟包括：
[0007] a、配制提取劑，提取劑為：乙醇：0. 4%偏磷酸水溶液=80:20V/V;
[0008] b、稱取桃果肉，按料液比1:16加入提取劑，超聲波輔助提取lh后，離心，取上清液 用濃縮儀濃縮至干燥，加超純水溶解制得可溶性糖和有機(jī)酸溶液。
[0009] 作為本發(fā)明優(yōu)選的技術(shù)方案，步驟a中配制提取劑的步驟為：準(zhǔn)確稱取4g偏磷酸， 用1L超純水溶解定容，制得濃度為0. 4%偏磷酸水溶液；分別移取800ml無水乙醇和200ml 0. 4%偏磷酸水溶液，混合得到提取劑乙醇：0. 4%偏磷酸水溶液=80:20V/V。
[0010] 作為本發(fā)明優(yōu)選的技術(shù)方案，其步驟b中離心條件為：4°C下lOOOOrpm離心 lOmin;制得的可溶性糖和有機(jī)酸溶液經(jīng)0. 22_水系濾頭過濾。
[0011] 作為本發(fā)明優(yōu)選的技術(shù)方案，測定的可溶性糖包括蔗糖、葡萄糖、果糖和山梨醇； 測定的有機(jī)酸包括奎尼酸、蘋果酸和檸檬酸。
[0012] 作為本發(fā)明優(yōu)選的技術(shù)方案，還包括步驟c、在色譜條件下分別對樣品溶液進(jìn)行可 溶性糖和有機(jī)酸的高效液相色譜分析；
[0013] 測定可溶性糖的色譜條件為：
[0014] 色譜柱：CH0620糖柱；
[0015] 流動相：超純水；
[0016] 流速：0? 5mL/min；
[0017] 柱溫：8(TC;
[0018] 進(jìn)樣量：5yL;
[0019] 時(shí)間：20min;
[0020] 檢測器：RID;
[0021] 測定有機(jī)酸的色譜條件為：
[0022] 色譜柱：C18柱；
[0023] 流動相：0? 4 %偏磷酸水溶液；
[0024] 流速：0? 5mL/min；
[0025] 柱溫：25°C;
[0026] 進(jìn)樣量：5yL;
[0027] 時(shí)間：20min;
[0028] 檢測器：VWD。
[0029] 本發(fā)明首次公開了一種同時(shí)高效提取桃果肉中可溶性糖和有機(jī)酸的方法，利用乙 醇：0. 4%偏磷酸水溶液=80:20V/V作為提取劑，提取劑的pH值為4. 1，無需冰浴或者熱浴 等外加條件，即可實(shí)現(xiàn)常溫下的同時(shí)高效和全面地提取桃果肉中的可溶性糖和有機(jī)酸，對 可溶性糖的提取效率高達(dá)98 %，對有機(jī)酸的提取效率高達(dá)96 %，而且該提取劑可減緩提取 液中蔗糖的降解，可放置4周也不明顯降解轉(zhuǎn)化，不影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性，大大節(jié)約 了材料，時(shí)間和成本。確定的提取思路可用于同時(shí)提取其它水果和蔬菜中的可溶性糖和有 機(jī)酸。
【附圖說明】
[0030] 圖1為實(shí)施例1中'霞暉8號'品種果肉樣品中可溶性糖的HPLC圖，其中1.蔗糖； 2.葡萄糖；3.果糖；4.山梨醇。
[0031] 圖2為實(shí)施例1中'霞暉8號'品種果肉樣品中有機(jī)酸的HPLC圖，其中1.奎尼酸 2.蘋果酸；3.檸檬酸。
[0032] 圖3為實(shí)施例2中'霞暉8號'品種果肉加入提取劑乙醇：0. 4%偏磷酸水溶液= 80:20V/V后放置4周后的樣品中可溶性糖的HPLC圖，其中1.蔗糖；2.葡萄糖；3.果糖； 4.山梨醇。
[0033] 圖4為對比例1中'霞暉8號'品種果肉樣品中可溶性糖的HPLC圖，其中1.蔗糖； 2.葡萄糖；3.果糖；4.山梨醇。
[0034] 圖5為對比例1中'霞暉8號'品種果肉樣品中有機(jī)酸的HPLC圖，其中1.奎尼酸； 2.蘋果酸；3.檸檬酸。
[0035] 圖6為對比例2中'霞暉8號'品種果肉加入提取劑乙醇：水=80:20V/V后放置 1周后的樣品中可溶性糖的HPLC圖，其中1.蔗糖；2.葡萄糖；3.果糖；4.山梨醇。
[0036] 圖7為對比例3中'霞暉8號'品種果肉樣品中有機(jī)酸的HPLC圖，其中1.奎尼酸； 2.蘋果酸；3.檸檬酸。
【具體實(shí)施方式】
[0037] 試劑與設(shè)備：
[0038] 乙醇、偏磷酸均為分析純。
[0039] 超聲波清洗器，離心機(jī)，Agilent高效液相色譜系統(tǒng)：1100系列，RID和VWD檢測 器，C18和CH0650色譜分析柱。
[0040] 實(shí)施例1
[0041] a、準(zhǔn)確稱取4g偏磷酸，用1L超純水溶解定容，制得濃度為0. 4%偏磷酸水溶液； 分別移取800ml無水乙醇和200ml0. 4%偏磷酸水溶液，混合得到提取劑乙醇：0. 4%偏磷 酸水溶液=80:20V/V;
[0042] b、準(zhǔn)確稱取0. 5g'霞暉8號'品種成熟果實(shí)果肉，加入8mL提取劑，超聲波提取lh， 4°C下lOOOOrpm離心lOmin，取上清液經(jīng)0. 22mm水系濾頭過濾后得到樣品溶液；
[0043] c、在色譜條件下分別對樣品溶液進(jìn)行可溶性糖和有機(jī)酸的高效液相色譜分析，得 到如圖1所示的可溶性糖的HPLC圖，和如圖2所示的有機(jī)酸的HPLC圖。并計(jì)算出各種有 機(jī)酸的含量見表1，可溶性糖的含量見表2。3次重復(fù)取均值。
[0044] 測定可溶性糖的色譜條件為：
[0045] 色譜柱：CH0620糖柱；
[0046] 流動相：超純水。
[0047] 流速：0? 5mL/min；
[0048] 柱溫：8(TC;
[0049] 進(jìn)樣量：5liL;
[0050] 時(shí)間：20min;
[0051]檢測器：RID;
[0052] 測定有機(jī)酸的色譜條件為：
[0053] 色譜柱：C18柱；
[0054] 流動相：0. 4 %偏磷酸水溶液；
[0055] 流速：0? 5mL/min；
[0056] 柱溫：25°C;
[0057] 進(jìn)樣量：5yL;
[0058] 時(shí)間：20min;
[0059] 檢測器：VWD。
[0060] 實(shí)施例2
[0061] a、準(zhǔn)確稱取4g偏磷酸，用1L超純水溶解定容，制得質(zhì)量濃度為0. 4%偏磷酸水溶 液；分別移取800ml無水乙醇和200ml0. 4%偏磷酸水溶液，混合得到提取劑乙醇：0. 4%偏 磷酸水溶液=80:20。
[0062] b、準(zhǔn)確稱取0. 5g'霞暉8號'品種成熟果實(shí)果肉4份，分別加入8mL提取劑乙醇： 0.4%偏磷酸水溶液=80:20V/V，在常溫下靜置。分別放置1周、2周、3周和4周后，4°C下 lOOOOrpm離心lOmin，取上清液經(jīng)0. 22mm水系濾頭過濾后得到