一種羥基多溴聯(lián)苯醚的液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于食品有機(jī)污染物的檢測(cè)領(lǐng)域，是利用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜快速、準(zhǔn)確地 檢測(cè)羥基多溴聯(lián)苯醚的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 羥基多溴聯(lián)苯醚（OH-PBDEs)是一類持久性有機(jī)污染物，來源主要包括兩個(gè)方面， 一是海洋藻類的自然釋放，一是PBDEs的生物轉(zhuǎn)化。OH-PBDEs除與PBDEs具有類似的毒性作 用外，還具有影響雌二醇合成，干擾氧化磷酸化（0XPH0S)作用等毒理特征，如2-0H-BDE-47 和2-0H-BDE-85能夠抑制人類腎上腺皮質(zhì)癌細(xì)胞系（H295R)的細(xì)胞增殖，擾亂細(xì)胞周期， 干擾H295R基因的表達(dá)，引起內(nèi)質(zhì)網(wǎng)（ER)應(yīng)激和未折疊蛋白反應(yīng)（UPR)轉(zhuǎn)錄的改變。 OH-PBDEs也被證明能在有機(jī)體的血液中積累。
[0003] OH-PBDEs是新型高毒性有機(jī)污染物，目前國內(nèi)外的研究工作及人們對(duì)它的認(rèn)識(shí)尚 處于起步階段，檢測(cè)〇H-PBDEs也沒有明確的標(biāo)準(zhǔn)方法。目前，文獻(xiàn)報(bào)道中檢測(cè)OH-PBDEs有 采用氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法的，但用氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法需繁瑣的衍生化處理過程，多數(shù)人 則采用高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法。在液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法中，碰撞電壓是MS/MS分析的關(guān) 鍵，碰撞電壓能量不足，難以出現(xiàn)二次電離，無子離子生成，能量過高，產(chǎn)生碎片離子成分復(fù) 雜，且母離子消失。選擇合適的碰撞電壓是建立一個(gè)好的檢測(cè)方法的基礎(chǔ)；另外，合適的色 譜分離條件是有效分離7種OH-PBDEs的又一個(gè)關(guān)鍵。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明目的在于提供一種操作簡便、分析迅速的OH-PBDEs的液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜 (LC-ESI-MS/MS)檢測(cè)方法。本發(fā)明的技術(shù)方案如下：
[0005] (1)LC-MS/MS條件
[0006] 液相色譜選用C18反相色譜柱（150_X2. 00mm，3iim);柱溫：35°C;進(jìn)樣量： 10UL;流動(dòng)相：乙腈和0. 1%甲酸，梯度洗脫：0~10min，乙腈由65 %增至75%，10~ 12min，乙腈保持 75%，12 ~17min，乙腈由 75%降至 65% ;流速：0? 25mL/min。
[0007] 質(zhì)譜采用電噴霧，電噴霧負(fù)離子掃描模式（ESI)，多重反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM);離子噴霧 電壓：4500V;離子源溫度T:500°C;霧化氣Gasl:25 ;霧化氣Gas2 :20。
[0008] ⑵OH-PBDEs液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制
[0009] 準(zhǔn)確量取100UL10iig/mL0H-PBDEs標(biāo)準(zhǔn)溶液于10mL棕色容量瓶中，用乙腈定容 至10mL，配制成100ng/mL的OH-PBDEs儲(chǔ)備液。將100ng/mL的儲(chǔ)備液逐級(jí)稀釋成50ng/ mL，25ng/mL，5ng/mL，2ng/mL，0? 5ng/mL，0? 25ng/mL，用建立好的LC-MS/MS方法分析系列標(biāo) 準(zhǔn)溶液，以O(shè)H-PBDEs標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為橫坐標(biāo)（X)，峰面積為縱坐標(biāo)（Y)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，用于 分析樣品中OH-PBDEs的含量。
[0010] ⑶最低檢出限的確定
[0011] 通過不斷降低標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度，按"方案（1)LC-MS/MS條件"中檢測(cè)條件進(jìn)行檢測(cè)， 取信噪比為3時(shí)的濃度為最低檢出限。
[0012] 本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)與有益效果是：采用本發(fā)明的LC-MS/MS法檢測(cè)OH-PBDEs，方便快 捷，靈敏度高，有利于OH-PBDEs的快速檢測(cè)，可用于大規(guī)模樣品檢測(cè)，適于標(biāo)準(zhǔn)化。
【附圖說明】
[0013] 圖1為7種OH-PBDEs的標(biāo)準(zhǔn)曲線，橫坐標(biāo)為OH-PBDEs濃度，縱坐標(biāo)為色譜峰峰面 積。
[0014] 圖2為7種OH-PBDEs混標(biāo)溶液的HPLC-ESI-MS/MS色譜圖。
【具體實(shí)施方式】
[0015] 下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步詳細(xì)說明，但本發(fā)明并不僅僅局限于下述實(shí)施 例。
[0016] 實(shí)施例1
[0017] 準(zhǔn)確量取100yL10iig/mLOH-PBDEs標(biāo)準(zhǔn)溶液于10mL棕色容量瓶中，用乙腈定容 至lOmL，配制成100ng/mL的OH-PBDEs儲(chǔ)備液。取100ng/mL的儲(chǔ)備液lmL，針泵進(jìn)樣，得到 7種OH-PBDEs的最佳質(zhì)譜參數(shù)（見表1)。
[0018] 表1 7種OH-PBDEs的保留時(shí)間、離子對(duì)和MRM參數(shù)
[0019]
[0020] 注：a定量離子對(duì)，b定性離子對(duì)
[0021] 實(shí)施例2
[0022] 準(zhǔn)確量取100yL10iig/mL0H-PBDEs標(biāo)準(zhǔn)溶液于10mL棕色容量瓶中，用乙腈定容 至10mL，配制成100ng/mL的OH-PBDEs儲(chǔ)備液。將100ng/mL的儲(chǔ)備液逐級(jí)稀釋成50ng/ mL，25ng/mL，5ng/mL，2ng/mL，0? 5ng/mL，0? 25ng/mL，按"方案（1)LC-MS/MS條件"的進(jìn)行測(cè) 定，以峰面積（Y)對(duì)濃度X(mg/L)進(jìn)行線性回歸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（附圖1)。通過不斷降低標(biāo) 準(zhǔn)溶液濃度，取信噪比為3時(shí)的濃度為最低檢出限。7種羥基多溴聯(lián)苯醚的回歸方程、線性 區(qū)間和最低檢出限見表1。
[0023] 表1 7種羥基多溴聯(lián)苯醚的線性方程、線性范圍和檢出限
[0024]
[0025] 實(shí)施例3
[0026] 準(zhǔn)確量取100yL10iig/mLOH-PBDEs標(biāo)準(zhǔn)溶液于10mL棕色容量瓶中，用乙腈定容 至lOmL，配制成100ng/mL的OH-PBDEs儲(chǔ)備液。將100ng/mL的儲(chǔ)備液稀釋成10ng/mL，裝 入小瓶中按"方案（1)LC-MS/MS條件"對(duì)7種OH-PBDEs混合標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行分離，分離色譜 圖見附圖2。
[0027] 由附圖2可知，7種羥基多溴聯(lián)苯醚的同系物分離度均大于1.5,實(shí)現(xiàn)了完全分離。
[0028] 以上實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明的內(nèi)容，除此之外，本發(fā)明還有其他實(shí)施方式，但凡 本領(lǐng)域技術(shù)人員因本發(fā)明所涉及之技術(shù)啟示，而采用等同替換或等效變形方式形成的技術(shù) 方案均落在本發(fā)明的保護(hù)范圍內(nèi)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種羥基多溴聯(lián)苯醚的液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)方法，其特征在于：包括如下步驟： (1) 測(cè)定羥基多溴聯(lián)苯醚（OH-PBDEs)液相條件：選用反相色譜柱，乙腈和0. 1 %甲酸作 為流動(dòng)相，柱溫35°C，進(jìn)樣量10 y L，流速：0. 25mL/min ; (2) 測(cè)定OH-PBDEs質(zhì)譜條件：采用電噴霧，負(fù)離子模式，多反應(yīng)監(jiān)測(cè)的掃描方式； (3) 將含有OH-PBDEs的溶液用有機(jī)濾膜過濾后按步驟（1)(2)設(shè)定的參數(shù)進(jìn)行 HPLC-MS/MS 檢測(cè)。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的羥基多溴聯(lián)苯醚的液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)方法，其特征在 于：所述步驟（1)中所用反相色譜柱為C18色譜柱（150mmX2. 00mm，3iim)。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的羥基多溴聯(lián)苯醚的液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)方法，其特征在 于：所述步驟（1)中流動(dòng)相的梯度為：〇~1〇111；[11，乙腈由65%增至75%，10~12111；[11，乙腈 保持75%，12~17min，乙腈由75%降至65%。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的羥基多溴聯(lián)苯醚的液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)方法，其特征在 于：所述步驟（2)中離子噴霧電壓為4500V。5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的羥基多溴聯(lián)苯醚的液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)方法，其特征在 于：所述步驟（2)中離子源溫度T為500°C。6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的羥基多溴聯(lián)苯醚的液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)方法，其特征在 于：所述步驟（2)中其它質(zhì)譜參數(shù)：霧化氣Gasl :25 ;霧化氣Gas2 :20。7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的羥基多溴聯(lián)苯醚的液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)方法，其特征在 于：在線性范圍0. 13~lOOng/mL內(nèi)7種OH-PBDEs的最低檢出限均達(dá)到0. 063ng/mL。
【專利摘要】本發(fā)明屬于食品有機(jī)污染物羥基多溴聯(lián)苯醚(OH-PBDEs)的檢測(cè)領(lǐng)域。包括如下步驟：液相色譜選用C18反相色譜柱，流動(dòng)相乙腈和0.1％甲酸，梯度洗脫，柱溫35℃，進(jìn)樣量10μL，流速：0.25mL/min；質(zhì)譜采用電噴霧負(fù)離子模式，多反應(yīng)監(jiān)測(cè)的掃描方式。本方法檢測(cè)速度快，靈敏度高，在線性范圍0.13～100ng/mL內(nèi)7種OH-PBDEs的最低檢出限均達(dá)到0.063ng/mL。
【IPC分類】G01N30/88
【公開號(hào)】CN105021746
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201410155741
【發(fā)明人】陳英, 劉欣, 姚永青, 丁洪流, 紀(jì)麗君, 姚衛(wèi)蓉
【申請(qǐng)人】蘇州市產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)所, 江南大學(xué)
【公開日】2015年11月4日
【申請(qǐng)日】2014年4月17日