一種亞硝胺標(biāo)志物檢測(cè)的前處理裝置及應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于分析化學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種專用于尿液中亞硝胺標(biāo)志物檢測(cè)的前處理裝置及應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]亞硝胺是亞硝基-NO的氮原子與氨基中的氮原子連接的化合物，是四大食品污染物之一。食物、化妝品、啤酒中都含有亞硝胺。在熏臘食品中，含有大量的亞硝胺類物質(zhì)，某些消化系統(tǒng)腫瘤，如食管癌的發(fā)病率與膳食中攝入的亞硝胺數(shù)量相關(guān)。當(dāng)熏臘食品與酒共同攝入時(shí)，亞硝胺對(duì)人體健康的危害就會(huì)成倍增加。
[0003]對(duì)于生物標(biāo)志物的研究有利于說(shuō)明人類暴露于此類物質(zhì)時(shí)健康風(fēng)險(xiǎn)的性質(zhì)及程度。由于亞硝胺生物標(biāo)志物含量較低，檢測(cè)時(shí)干擾較大，對(duì)樣品前處理的要求較高，因此，開(kāi)發(fā)一種專用于尿液中亞硝胺標(biāo)志物檢測(cè)的前處理裝置及使用方法尤為重要。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明提供了一種尿液中亞硝胺標(biāo)志物檢測(cè)的前處理裝置及應(yīng)用，用于尿液中亞硝胺的檢測(cè)，具有快速、準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn)。
[0005]本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是:一種尿液中亞硝胺標(biāo)志物檢測(cè)的前處理裝置由儲(chǔ)液管、調(diào)節(jié)閥、凈化柱、固定架、接液瓶和底座構(gòu)成；儲(chǔ)液管連接凈化柱，在儲(chǔ)液管和凈化柱間設(shè)置調(diào)節(jié)閥，凈化柱連接固定架，凈化柱下部設(shè)置接液瓶，接液瓶由底座固定，儲(chǔ)液管上有一細(xì)支管，在細(xì)支管上有橡皮塞。
[0006]所述的儲(chǔ)液管主管上部有玻璃活塞，尺寸與儲(chǔ)液管管徑相匹配。
[0007]所述的調(diào)節(jié)閥上有小孔，可調(diào)節(jié)洗脫液流速。
[0008]所述的凈化柱填料為亞硝胺分子印跡材料。
[0009]所述的接液瓶瓶身為圓形，瓶底為尖底，瓶口為磨口，可與旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀連接。
[0010]所述的底座為泡沫，用于固定接液瓶，座內(nèi)形狀與接液瓶相匹配。
[0011]尿液中亞硝胺標(biāo)志物檢測(cè)的前處理裝置的應(yīng)用如下:
取3mL酶解后的尿液至儲(chǔ)液管中，加入50μ?的內(nèi)標(biāo)溶液，內(nèi)標(biāo)溶液為NNN_d4 (氘代N’ -亞硝基降煙堿)、NAB-d4 (氘代N-亞硝基假木賊堿)、NAT-d4 (氘代N-亞硝基新煙堿)和NNAL-d3[氘代4-(N-甲基-N-亞硝氨基)-4-(3-吡啶基)-丁醇]混合，配制濃度為
0.1-0.2ng/mL，溶劑為乙腈，4種內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的質(zhì)量比為1: 1: 1: 2，轉(zhuǎn)動(dòng)調(diào)節(jié)閥4，樣品上到凈化柱后，控制流速約為0.5-0.8mL/min ;靜置5_8分鐘，加ImL 1mM乙酸銨溶液經(jīng)儲(chǔ)液管流入凈化柱；隨后完全打開(kāi)調(diào)節(jié)閥，蓋緊橡皮塞，蓋上玻璃活塞并緩慢向下推，將凈化柱上的水分推干；打開(kāi)橡皮塞，打開(kāi)玻璃活塞，取l_2mL正庚烷至儲(chǔ)液管中，轉(zhuǎn)動(dòng)調(diào)節(jié)閥，淋洗凈化柱；然后完全打開(kāi)調(diào)節(jié)閥，蓋緊橡皮塞，蓋上玻璃活塞并緩慢向下推，將凈化柱上的正庚烷完全推干；最后打開(kāi)橡皮塞，打開(kāi)玻璃活塞，取l_2mL甲醇:二氯甲烷1:9?1:8 (體積比)的溶液經(jīng)儲(chǔ)液管流入凈化柱進(jìn)行洗脫，重復(fù)2次，用接液瓶收集洗脫液，取下接液瓶蒸干后，用10KL乙腈復(fù)溶，進(jìn)LC-MS/MS (液相色譜一串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀)分析。
[0012]本發(fā)明提供了一種尿液中亞硝胺標(biāo)志物檢測(cè)的前處理裝置及應(yīng)用，優(yōu)勢(shì)在于:
(I)步驟簡(jiǎn)單，該方法只需洗脫、濃縮后即可進(jìn)樣分析，處理步驟簡(jiǎn)單；同時(shí)該發(fā)明提供了一站式的前處理裝置，無(wú)需復(fù)雜的凈化柱抽干設(shè)備，易于推廣；(2)凈化效果好，該方法選用的凈化柱和洗脫方式能夠很好的出去雜質(zhì)，大大降低了儀器分析時(shí)雜質(zhì)對(duì)目標(biāo)物色譜峰的干擾；(3)準(zhǔn)確性高，該方法選用4種同位素內(nèi)標(biāo)，內(nèi)標(biāo)物貫穿樣品洗脫、濃縮和進(jìn)樣分析過(guò)程的始終，增加了分析過(guò)程的準(zhǔn)確性；(4)成本較低，該裝置涉及的儲(chǔ)液瓶、調(diào)節(jié)閥、固定架、凈化柱、接液瓶和底座等，為實(shí)驗(yàn)室易得的材料制備而成，成本較低；(5)靈敏度高，該方法處理的樣品經(jīng)濃縮步驟后，目標(biāo)物在待測(cè)溶液中的濃度得到了增加，樣品分析靈敏度得到了提高；(6)環(huán)境友好，該裝置設(shè)有玻璃塞和調(diào)節(jié)閥等，試劑不容易揮發(fā)，裝置密封性好，該發(fā)明在提高分析準(zhǔn)確性的同時(shí)，減少了前處理過(guò)程對(duì)環(huán)境的污染。
【附圖說(shuō)明】
[0013]圖1為本發(fā)明尿液中亞硝胺標(biāo)志物檢測(cè)的前處理裝置結(jié)構(gòu)示意圖。
[0014]圖中:1-玻璃活塞，2-儲(chǔ)液管，3-橡皮塞，4-調(diào)節(jié)閥，5-凈化柱，6-固定架，7-接液瓶，8-底座。
【具體實(shí)施方式】
[0015]下面結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明。
[0016]實(shí)施例1:
如圖1所示，本發(fā)明的尿液中亞硝胺標(biāo)志物檢測(cè)的前處理裝置由玻璃活塞1、儲(chǔ)液管2、橡皮塞3，調(diào)節(jié)閥4、凈化柱5、固定架6、接液瓶7和底座8構(gòu)成；儲(chǔ)液管連接凈化柱，在儲(chǔ)液管和凈化柱間設(shè)置調(diào)節(jié)閥，凈化柱連接固定架，凈化柱下部設(shè)置接液瓶，接液瓶由底座固定，儲(chǔ)液管上有一細(xì)支管，在細(xì)支管上有橡皮塞。
[0017]玻璃活塞I可取下，尺寸與儲(chǔ)液管管徑2相匹配，儲(chǔ)液管2材質(zhì)為玻璃，可儲(chǔ)洗脫液1mL ;橡皮塞3，材質(zhì)為橡膠，與儲(chǔ)液管2下部向上的細(xì)管配合，用于推干凈化柱5中的溶液后，打開(kāi)玻璃活塞I時(shí)防止凈化柱5中的材料由于負(fù)壓受到損壞；調(diào)節(jié)閥4材質(zhì)為玻璃，閥上有小孔，可調(diào)節(jié)洗脫液流速，尺寸與儲(chǔ)液管2相匹配，密封性好；凈化柱5，填料為亞硝胺分子印跡材料，規(guī)格為50mg ;固定架6，主要作用為固定凈化柱5 ;接液瓶7，材質(zhì)為玻璃，瓶身為圓形，瓶底為尖底，瓶口為磨口，可與旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀連接，規(guī)格為1mL ;底座8，材質(zhì)為泡沫，主要作用為固定接液瓶7，尺寸與接液瓶7相匹配。
[0018]應(yīng)用實(shí)施例1:
尿液中亞硝胺標(biāo)志物檢測(cè)的前處理裝置的應(yīng)用如下:
打開(kāi)玻璃活塞，取3mL酶解后的尿液至儲(chǔ)液管中，加入50μ?的內(nèi)標(biāo)溶液，內(nèi)標(biāo)溶液為NNN-d4、NAB-d4、NAT-d4和NNAL_d3混合，配制濃度為0.1-0.2ng/mL，溶劑為乙腈，4種內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的質(zhì)量比為1:1:1:2，轉(zhuǎn)動(dòng)調(diào)節(jié)閥，樣品上到凈化柱后控制流速約為0.5 mL/min ;靜置5分鐘，加ImL 1mM乙酸銨溶液經(jīng)儲(chǔ)液管流入凈化柱；隨后完全打開(kāi)調(diào)節(jié)閥，蓋緊橡皮塞，蓋上玻璃活塞并緩慢向下推，將凈化柱上的水分推干；打開(kāi)橡皮塞，打開(kāi)玻璃活塞，取ImL正庚烷至儲(chǔ)液管中，轉(zhuǎn)動(dòng)調(diào)節(jié)閥，淋洗凈化柱；然后完全打開(kāi)調(diào)節(jié)閥，蓋緊橡皮塞，蓋上玻璃活塞并緩慢向下推，將凈化柱上的正庚烷完全推干；最后打開(kāi)橡皮塞，打開(kāi)玻璃活塞，取ImL甲醇:二氯甲烷1:9 (體積比)的溶液經(jīng)儲(chǔ)液管流入凈化柱進(jìn)行洗脫，重復(fù)2次，用底座上的接液瓶收集洗脫液，取下接液瓶，蒸干后用150μ?乙腈復(fù)溶，進(jìn)LC-MS/MS分析。本發(fā)明用于尿液中亞硝胺標(biāo)志物的檢測(cè)，具有快速、準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn)。
[0019] 應(yīng)用實(shí)施例2:
打開(kāi)玻璃活塞，取3mL酶解后的尿液至儲(chǔ)液管中，加入50μ?的內(nèi)標(biāo)溶液，內(nèi)標(biāo)溶液為NNN-d4、NAB-d4、NAT-d4和NNAL_d3混合，配制濃度為0.1-0.2ng/mL，溶劑為乙腈，4種內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的質(zhì)量比為1:1:1:2，轉(zhuǎn)動(dòng)調(diào)節(jié)閥，樣品上到凈化柱后控制流速約為1.0 mL/min ;靜置8分鐘，加ImL 1mM乙酸銨溶液經(jīng)儲(chǔ)液管流入凈化柱；隨后完全打開(kāi)調(diào)節(jié)閥，蓋緊橡皮塞，蓋上玻璃活塞并緩慢向下推，將凈化柱上的水分推干；打開(kāi)橡皮塞，打開(kāi)玻璃活塞，取2mL正庚烷至儲(chǔ)液管中，轉(zhuǎn)動(dòng)調(diào)節(jié)閥，淋洗凈化柱；然后完全打開(kāi)調(diào)節(jié)閥，蓋緊橡皮塞，蓋上玻璃活塞并緩慢向下推，將凈化柱上的正庚烷完全推干；最后打開(kāi)橡皮塞，打開(kāi)玻璃活塞，取2mL甲醇:二氯甲烷1:8 (體積比)的溶液經(jīng)儲(chǔ)液管流入凈化柱進(jìn)行洗脫，重復(fù)2次，用底座上的接液瓶收集洗脫液，取下接液瓶，蒸干后用150μ?乙腈復(fù)溶，進(jìn)LC-MS/MS分析。本發(fā)明用于尿液中亞硝胺標(biāo)志物的檢測(cè)，具有快速、準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種亞硝胺標(biāo)志物檢測(cè)的前處理裝置，其特征在于由儲(chǔ)液管、調(diào)節(jié)閥、凈化柱、固定架、接液瓶和底座構(gòu)成；儲(chǔ)液管連接凈化柱，在儲(chǔ)液管和凈化柱間設(shè)置調(diào)節(jié)閥，凈化柱連接固定架，凈化柱下部設(shè)置接液瓶，接液瓶由底座固定，儲(chǔ)液管上有一細(xì)支管，在細(xì)支管上有橡皮塞。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的亞硝胺標(biāo)志物檢測(cè)的前處理裝置，其特征在于所述的儲(chǔ)液管主管上部有玻璃活塞，尺寸與儲(chǔ)液管管徑相匹配。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的亞硝胺標(biāo)志物檢測(cè)的前處理裝置，其特征在于所述的調(diào)節(jié)閥上有小孔，用于調(diào)節(jié)洗脫液流速。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的亞硝胺標(biāo)志物檢測(cè)的前處理裝置，其特征在于所述的凈化柱填料為亞硝胺分子印跡材料。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的亞硝胺標(biāo)志物檢測(cè)的前處理裝置，其特征在于所述的接液瓶瓶身為圓形，瓶底為尖底，瓶口為磨口，與旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀連接。6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的亞硝胺標(biāo)志物檢測(cè)的前處理裝置，其特征在于所述的底座為泡沫，用于固定接液瓶，座內(nèi)形狀與接液瓶相匹配。7.權(quán)利要求1所述的亞硝胺標(biāo)志物檢測(cè)的前處理裝置的應(yīng)用，其特征在于: 取3mL酶解后的尿液至儲(chǔ)液管中，加入50μ?的內(nèi)標(biāo)溶液，內(nèi)標(biāo)溶液為NNN_d4、NAB_d4、NAT-d4和NNAL-d3混合，配制濃度為0.1-0.2ng/mL，溶劑為乙腈，4種內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的質(zhì)量比為1:1:1: 2，轉(zhuǎn)動(dòng)調(diào)節(jié)閥，樣品上到凈化柱后，控制流速約為0.5-0.8mL/min ;靜置5_8分鐘，加ImL 1mM乙酸銨溶液經(jīng)儲(chǔ)液管流入凈化柱；隨后完全打開(kāi)調(diào)節(jié)閥，蓋緊橡皮塞，蓋上玻璃活塞并緩慢向下推，將凈化柱上的水分推干；打開(kāi)橡皮塞，打開(kāi)玻璃活塞，取l_2mL正庚烷至儲(chǔ)液管中，轉(zhuǎn)動(dòng)調(diào)節(jié)閥，淋洗凈化柱；然后完全打開(kāi)調(diào)節(jié)閥，蓋緊橡皮塞，蓋上玻璃活塞并緩慢向下推，將凈化柱上的正庚烷完全推干；最后打開(kāi)橡皮塞，打開(kāi)玻璃活塞，取l_2mL甲醇:二氯甲烷1:9?1:8，體積比，的溶液經(jīng)儲(chǔ)液管流入凈化柱進(jìn)行洗脫，重復(fù)2次，用接液瓶收集洗脫液，取下接液瓶蒸干后，用150μ?乙腈復(fù)溶，進(jìn)LC-MS/MS分析。
【專利摘要】本發(fā)明是一種亞硝胺標(biāo)志物檢測(cè)的前處理裝置及應(yīng)用。該裝置由儲(chǔ)液管、玻璃活塞、橡皮塞、調(diào)節(jié)閥、凈化柱、固定架、接液瓶和底座等構(gòu)成。應(yīng)用：取酶解后的尿液至儲(chǔ)液管中，加入一定量的內(nèi)標(biāo)溶液，樣品上到凈化柱后，靜置10分鐘，加乙酸銨溶液經(jīng)儲(chǔ)液管流入凈化柱；緩慢向下推，將凈化柱上的水分推干；取正庚烷至儲(chǔ)液管中淋洗凈化柱；并緩慢向下推，將凈化柱上的正庚烷完全推干；取甲醇：二氯甲烷溶液流入凈化柱洗脫，重復(fù)2次，用接液瓶收集洗脫液，蒸干接液瓶后，用乙腈復(fù)溶，進(jìn)LC-MS/MS分析。本發(fā)明用于尿液中亞硝胺的檢測(cè)，具有快速、準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn)。
【IPC分類】G01N30/06, G01N30/14
【公開(kāi)號(hào)】CN105044252
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510506636
【發(fā)明人】張鳳梅, 劉志華, 司曉喜, 朱瑞芝, 申欽鵬, 劉春波, 何沛, 楊光宇, 王昆淼, 王晉, 蘇鐘璧
【申請(qǐng)人】云南中煙工業(yè)有限責(zé)任公司
【公開(kāi)日】2015年11月11日
【申請(qǐng)日】2015年8月18日