一種雞蛋常用藥物殘留檢測(cè)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及藥物檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種雞蛋常用藥物殘留檢測(cè)方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 我國(guó)是家禽養(yǎng)殖大國(guó)，2005年禽蛋年總產(chǎn)量已達(dá)28795萬(wàn)噸，位居世界首位，其中 雞蛋由于營(yíng)養(yǎng)豐富、易被吸收、口感良好、價(jià)格便宜而深受消費(fèi)者喜愛(ài)。雞蛋占絕大部分禽 蛋市場(chǎng)，而90%以上的雞蛋都是由農(nóng)戶(hù)和小企業(yè)生產(chǎn)的，盡管目前無(wú)公害食品蛋雞飼養(yǎng)允 許使用的治療藥物受到嚴(yán)格限制，但實(shí)際生產(chǎn)中，為降低疫病風(fēng)險(xiǎn)，濫用誤用抗生素現(xiàn)象十 分嚴(yán)重，同時(shí)通過(guò)環(huán)境和食物鏈的作用致使藥物殘留問(wèn)題也日益加劇。藥物殘留對(duì)人體的 危害主要有抗生素類(lèi)藥物可引起人類(lèi)發(fā)生不同程度的過(guò)敏反應(yīng)，使細(xì)菌產(chǎn)生耐藥性，給臨 床上感染疾病的治療帶來(lái)困難；食用藥物殘留的動(dòng)物源食品，可導(dǎo)致腸道菌群失調(diào)，致病 菌大量繁殖，給人類(lèi)造成危害。由于藥物殘留危害極大，各國(guó)政府對(duì)食品安全高殘留限量 (MRL)和休藥期，同時(shí)各國(guó)都在努力建立重要藥物殘留檢測(cè)方法，以監(jiān)控和盡量減少藥物殘 留的發(fā)生。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 為了防止市場(chǎng)上雞蛋的常用藥物殘留危害人體健康，本發(fā)明的目的是提供一種雞 蛋常用藥物殘留的檢測(cè)方法，防止殘留藥物超標(biāo)的雞蛋進(jìn)入市場(chǎng)。
[0004] 一種雞蛋常用藥物殘留檢測(cè)方法，其特征在于，包括以下步驟：
[0005] 雞蛋選擇：隨機(jī)選擇1個(gè)雞蛋打碎并在高速食品攪碎機(jī)中攪拌均勻；殘留藥物提 ?。河秒娮映尤⊥ㄟ^(guò)步驟A得到的雞蛋5g，置于離心管中，加入一定比例的磷酸鹽緩沖溶 液和乙腈溶液l〇ml，然后將所得溶液在振蕩器中振蕩一段時(shí)間，再將振蕩所得溶液置于離 心機(jī)中離心一段時(shí)間并收集下層提取液，接著將下層提取液用稀釋劑稀釋至400ml ;溶液 凈化：將SPE固相萃取柱用5ml甲醇，5ml超純水依次淋洗活化，開(kāi)啟真空栗，控制流速將 提取液上柱，過(guò)柱完成后，用5ml甲醇，5ml超純水沖洗萃取柱，繼續(xù)抽真空IOmin以除去 柱中殘留水分，最后，以6ml甲醇洗脫，收集洗脫液并在室溫下用N 2吹掃至近干，用甲醇定 容至Iml ;殘留藥物檢測(cè)：以液相色譜作為分離系統(tǒng)，質(zhì)譜為檢測(cè)系統(tǒng)，步驟C所得溶液在 質(zhì)譜部分和流動(dòng)相分離，被離子化后，經(jīng)質(zhì)譜的質(zhì)量分析器將離子碎片按質(zhì)量數(shù)分開(kāi)，經(jīng)檢 測(cè)器得到質(zhì)譜圖；在本步驟中色譜條件為流動(dòng)相為乙腈和〇. 1%甲酸溶液，柱溫25°C，流速 0. 4ml/min ;進(jìn)樣量20 μ 1 ;質(zhì)譜條件為電噴霧離子源；正離子掃描；霧化氣、脫溶劑氣、錐孔 氣為氮?dú)?，碰撞氣為氬氣；源溫度和脫溶劑氣溫度分別為90和350°C;脫溶劑流速和錐孔氣 流速分別為500和70L/h ;毛細(xì)管電壓為4kV。
[0006] 作為本發(fā)明的進(jìn)一步改進(jìn)，所述磷酸鹽緩沖溶液和乙腈溶液的比例為1 :1~1 :5。
[0007] 作為本發(fā)明的進(jìn)一步改進(jìn)，所述振蕩時(shí)間為15~30min。
[0008] 作為本發(fā)明的進(jìn)一步改進(jìn)，所述稀釋劑為甲醇溶液。
[0009] 作為本發(fā)明的進(jìn)一步改進(jìn)，所述離心時(shí)間為10~20min。
[0010] 作為本發(fā)明的進(jìn)一步改進(jìn)，所述液相色譜所采用的色譜柱粒度為5 μ m。
[0011] 作為本發(fā)明的進(jìn)一步改進(jìn)，所述流速為3~5ml/min。
[0012] 作為本發(fā)明的進(jìn)一步改進(jìn)，所述SPE固相萃取柱為Oasis HLB。
[0013] 本發(fā)明的有益效果在于：
[0014] 1、本發(fā)明的裝置簡(jiǎn)單、操作方便和適用范圍廣，可同時(shí)檢測(cè)抗生素類(lèi)藥物殘留，磺 胺類(lèi)藥物殘留，抗球蟲(chóng)藥物殘留；
[0015] 2、本發(fā)明藥物提取采用乙腈相比于采用乙酸乙酯，二氯甲烷有如下優(yōu)點(diǎn)：乙酸乙 酯提取浸出雜質(zhì)多，且過(guò)SPE柱后基質(zhì)干擾較大；二氯甲烷提取屬于中等極性溶劑，有可能 提取出脂類(lèi)物質(zhì)，因此提取濃縮后需脫去脂類(lèi)物質(zhì)，且乙腈的提取效果較好；
[0016] 3、采用本發(fā)明檢測(cè)準(zhǔn)確度高，效果穩(wěn)定，耗時(shí)少，為監(jiān)控雞蛋品質(zhì)和評(píng)定無(wú)公害 雞蛋提供了有效的檢測(cè)手段。
[0017] 為了對(duì)本發(fā)明有益效果作進(jìn)一步闡述，本發(fā)明人進(jìn)行了大量運(yùn)用性試驗(yàn)，特別說(shuō) 明的是，本發(fā)明試驗(yàn)旨在說(shuō)明本發(fā)明技術(shù)的有益效果，絕不僅限于本發(fā)明的范圍。
[0018] 實(shí)驗(yàn)1 :樣品提取液的選擇
[0019] 綜合考慮本發(fā)明檢測(cè)的抗生素類(lèi)藥物殘留、磺胺類(lèi)藥物殘留、抗球蟲(chóng)藥物殘留的 性質(zhì)，分別用乙酸乙酯、二氯甲烷、乙腈作為提取液，從三者的提取時(shí)間，提取效率，帶入的 雜質(zhì)多少、是否帶入脂類(lèi)物質(zhì)等幾方面進(jìn)行比較。
[0020] 以乙酸乙酯、二氯甲烷、乙腈作為提取液與磷酸鹽緩沖溶液一定比例混合，共 l〇ml，然后將所得溶液在振蕩器中振蕩一段時(shí)間，再將振蕩所得溶液置于離心機(jī)中離心一 段時(shí)間并收集下層提取液，接著將下層提取液用稀釋劑稀釋至400ml，用檢測(cè)器檢測(cè)。
[0021] 表1不同提取液對(duì)藥物殘留提取情況比較分析
[0024] 從上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，雖然乙腈所耗費(fèi)的提取時(shí)間長(zhǎng)，但他的回收率高，帶入雜質(zhì) 數(shù)量少，不帶入脂類(lèi)物質(zhì)無(wú)需濃縮脫脂，因此本發(fā)明選擇乙腈作為提取液。
[0025] 實(shí)驗(yàn)2 :稀釋條件對(duì)提取率的影響
[0026] 本發(fā)明步驟B中將下層提取液稀釋至400ml，并不是隨意增加這一步驟，而是由于 提取液中含有大量極性有機(jī)溶劑，直接進(jìn)行SPE凈化，目標(biāo)抗生素可能會(huì)被有機(jī)溶劑帶出 而無(wú)法保留在SPE柱上，對(duì)此，本實(shí)驗(yàn)以常見(jiàn)的抗生素類(lèi)藥物殘留、磺胺類(lèi)藥物殘留、抗球 蟲(chóng)藥物殘留作為分析對(duì)象，對(duì)稀釋條件對(duì)提取率的影響做一個(gè)比較分析。
[0027] 表2稀釋條件對(duì)提取率的影響
[0029] 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，稀釋后的提取率明顯提高。
【具體實(shí)施方式】
[0030] 為了方便本領(lǐng)域的技術(shù)人員理解，下面將結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步的描述。 實(shí)施例僅僅是對(duì)該發(fā)明的舉例說(shuō)明，不是對(duì)本發(fā)明的限定，實(shí)施例中未作具體說(shuō)明的步驟 均是已有技術(shù)，在此不做詳細(xì)描述。
[0031] 儀器與試劑
[0032] 液相色譜儀、質(zhì)譜聯(lián)用儀器、固相萃取裝置、氮吹儀、Oasis HLB固相萃取柱、電子 秤、振蕩器；
[0033] 磷酸鈉緩沖液、甲醇、超純水、乙腈、氧氟沙星、諾氟沙星、環(huán)丙沙星、恩諾沙星、四 環(huán)