一種電沉積金及金復(fù)合物的胃癌標(biāo)志物ca724生物傳感器的制備方法及應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及本發(fā)明涉及一種電沉積金及金復(fù)合物的胃癌標(biāo)志物CA724生物傳感器的制備方法及應(yīng)用。制備一種電沉積金及金復(fù)合物的胃癌標(biāo)志物CA724生物傳感器，屬于新型功能材料與生物傳感檢測技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002]CA72-4是目前診斷胃癌的最佳腫瘤標(biāo)志物之一，對胃癌具有較高的特異性，其敏感性可達(dá)28-80% JA72-4水平與胃癌的分期有明顯的相關(guān)性，一般在胃癌的II1-1V期增高，對伴有轉(zhuǎn)移的胃癌病人，CA72-4的陽性率更遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于非轉(zhuǎn)移者。CA72-4水平在術(shù)后可迅速下降至正常。在70%的復(fù)發(fā)病例中，CA72-4濃度首先升高。與其它標(biāo)志物相比，CA72-4最主要的優(yōu)勢是其對良性病變的鑒別診斷有極高的特異性，在眾多的良性胃病患者中，其檢出率僅0.7%。本發(fā)明涉及本發(fā)明涉及一種電沉積金及金復(fù)合物的胃癌標(biāo)志物CA724生物傳感器的制備方法及應(yīng)用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明的目的之一是一種電沉積金及金復(fù)合物的胃癌標(biāo)志物CA724生物傳感器的制備方法。
[0004]本發(fā)明的目的之二是將該生物傳感器成功應(yīng)用于胃癌標(biāo)志物CA724的檢測。
[0005]本發(fā)明的技術(shù)方案
I.一種電沉積金及金復(fù)合物的胃癌標(biāo)志物CA724生物傳感器的制備方法
(1)依次用1.0、0.3、0.05 Pm的三氧化二鋁拋光粉對玻碳電極拋光處理，用超純水清洗干凈;
(2)將玻碳電極放在0.02 mmol/L的10 mL的HAuCl4的電化學(xué)沉積液中，沉積過程中利用計時電流方法，在-0.6 V的條件下沉積100 s后用超純水清洗，干燥后在電極表面沉積了 Au NPs ；
(3)將6μ?、5~15 Pg/mL的胃癌標(biāo)志物CA724捕獲抗體Ab1滴至沉積了 Au NPs的電極表面，4°C下晾干，超純水沖洗；
(4)滴加3PL、質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5~15 mg/mL的牛血清白蛋白溶液至電極表面，4°C下晾干，超純水沖洗；
(5)滴加6μ?濃度為0.0001-6 ng/mL的胃癌標(biāo)志物CA724標(biāo)準(zhǔn)溶液至電極表面，4°C下晾干，超純水沖洗；
(6)將4~6μ?檢測抗體標(biāo)記物孵化溶液Au-聚多巴胺/四氧化三鐵-Ab2S液滴至電極表面，置于4°C冰箱中孵化I h，清洗后，晾干，制得一種Au-聚多巴胺/四氧化三鐵胃癌標(biāo)志物CA724的生物傳感器。
[0006]2.檢測抗體標(biāo)記物孵化溶液Au-聚多巴胺/四氧化三鐵4132溶液的制備(1)四氧化三鐵的制備將0. 54 g的FeClJP 0. 15-0. 25 g檸檬酸鈉加入裝有20 mL乙二醇的錐形瓶中，并且在室溫下均勻振蕩1 h。將1. 1-1. 3 g醋酸鈉加入到混合物中繼續(xù)振蕩0. 5 h;將上述混合物放入高溫反應(yīng)釜內(nèi)在200 °C的條件下反應(yīng)12 h，超純水洗滌、60 乂條件下干燥后制得四氧化三鐵；
(2)聚多巴胺/四氧化三鐵的制備將制備的35~45 mg的四氧化三鐵，溶解于20mL、含1~3 mg/mL多巴胺的pH=8. 5Tris-HCl溶液中，在室溫下振蕩8 h，利用磁分離技術(shù)進(jìn)行分離，超純水洗滌，60。C干燥后制得聚多巴胺/四氧化三鐵；
(3)檢測抗體標(biāo)記物Au-聚多巴胺/四氧化三鐵的制備將2. 0~3. Omg的聚多巴胺/四氧化三鐵加入2. 5 mL、0. 07 mmol/L HAuC14溶液中，均勾攪拌，向上述溶液中加入1 mL的0.005 mol/L的朽1檬酸鈉后在室溫下均勾攪拌2 h，用磁分離技術(shù)進(jìn)行分離，超純水洗滌，60 乂條件下干燥制得Au-聚多巴胺/四氧化三鐵；
(4)檢測抗體標(biāo)記物孵化溶液Au-聚多巴胺/四氧化三鐵-Ab2
將1. 5-2. 5 mg的Au-聚多巴胺/四氧化三鐵加入1 mL、pH為7. 4的PBS中均勻攪拌，繼續(xù)加入1. 0 mL、5~10 y g/mL的抗體Ab2，混合；將混合溶液置于4 °C下反應(yīng)12 h，將檢測抗體Ab2負(fù)載于Au-聚多巴胺/四氧化三鐵表面，利用磁分離方法進(jìn)行分離，制得Au-聚多巴胺/四氧化三鐵-Ab2，分散于2 mL、pH為7.4的PBS溶液中，置于4 Y的冰箱里備用。
[0007]3.胃癌標(biāo)志物CA724的測定
(1)采用電化學(xué)工作站的三電極體系進(jìn)行測定，將權(quán)利要求1所制備的免疫傳感器作為工作電極，飽和甘汞電極為對電極，鉑絲電極為輔助電極，在pH=7. 4的磷酸鹽緩沖溶液中，米用時間-電流的方法進(jìn)行掃描，輸入電壓為_0. 4 V，運(yùn)行時間400 s ；
(2)在10mL、pH=7. 4的PBS溶液中，對0. 0001-6 ng/mL的胃癌標(biāo)志物CA724標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行測試，記錄電流變化，根據(jù)所得電流差值與胃癌標(biāo)志物CA724的濃度成線性關(guān)系，繪制工作曲線；
(3)將待測樣品溶液代替胃癌標(biāo)志物CA724標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行檢測。
[0008]本發(fā)明的有益成果
(1)電極表面電沉積的金納米粒子具有較大的比表面積、良好的導(dǎo)電性以及良好的生物相容性和穩(wěn)定性，而且能夠結(jié)合大量的捕獲抗體，增加了傳感器的靈敏度和穩(wěn)定性。
[0009](2)Au基催化劑對雙氧水具有較好的催化性能，被廣泛應(yīng)用于傳感器領(lǐng)域，Au納米粒子和四氧化三鐵以及聚多巴胺材料的結(jié)合能夠提高材料的負(fù)載能力和催化效果。
[0010](3)電沉積金納米粒子和Au基催化劑修飾的傳感器對雙氧水具有雙催化的作用，從而增加了傳感器的靈敏度。
[0011 ] (4)本發(fā)明制備的電化學(xué)免疫傳感器用于胃癌腫瘤標(biāo)志物的檢測，響應(yīng)時間短，檢測限低，線性范圍寬，可以實(shí)現(xiàn)簡單、快速、高靈敏和特異性檢測。測得線性范圍為0. 10pg/mL ~ 6ng/mL，檢測限為 0. 024 pg/mL。
【具體實(shí)施方式】
[0012]實(shí)施例1 一種電沉積金及金復(fù)合物的胃癌標(biāo)志物CA724生物傳感器的制備方法 (1)依次用1.0、0.3、0.05 Pm的三氧化二鋁拋光粉對玻碳電極拋光處理，用超純水清洗干凈;
(2)將玻碳電極放在0.02 mmol/L的10 mL的HAuCl4的電化學(xué)沉積液中，沉積過程中利用計時電流方法，在-0.6 V的條件下沉積100 s后用超純水清洗，干燥后在電極表面沉積了 Au NPs ；
(3)將6μ?、5 Pg/mL的胃癌標(biāo)志物CA724捕獲抗體Ab1滴至沉積了 Au NPs的電極表面，4°C下晾干，超純水沖洗；
(4)滴加3PL、質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5mg/mL的牛血清白蛋白溶液至電極表面，4°C下晾干，超純水沖洗；
(5)滴加6μ?濃度為0.0001-6 ng/mL的胃癌標(biāo)志物CA724標(biāo)準(zhǔn)溶液至電極表面，4°C下晾干，超純水沖洗；
(6)將4μ?檢測抗體標(biāo)記物孵化溶液Au-聚多巴胺/四氧化三鐵-Ab2S液滴至電極表面，置于4°C冰箱中孵化I h，清洗后，晾干，制得一種Au-聚多巴胺/四氧化三鐵胃癌標(biāo)志物CA724的生物傳感器。
[0013]實(shí)施例2—種電沉積金及金復(fù)合物的胃癌標(biāo)志物CA724生物傳感器的制備方法
(1)依次用1.0、0.3、0.05 Pm的三氧化二鋁拋光粉對玻碳電極拋光處理，用超純水清洗干凈;
(2)將玻碳電極放在0.02 mmol/L的10 mL的HAuCl4的電化學(xué)沉積液中，沉積過程中利用計時電流方法，在-0.6 V的條件下沉積100 s后用超純水清洗，干燥后在電極表面沉積了 Au NPs ；
(3)將6μ?、15 Pg/mL的胃癌標(biāo)志物CA724捕獲抗體Ab1滴至沉積了 Au NPs的電極表面，4°C下晾干，超純水沖洗；
(4)滴加3PL、質(zhì)量分?jǐn)?shù)為15 mg/mL的牛血清白蛋白溶液至電極表面，4°C下晾干，超純水沖洗；
(5)滴加6μ?濃度為0.0001-6 ng/mL的胃癌標(biāo)志物CA724標(biāo)準(zhǔn)溶液至電極表面，4°C下晾干，超純水沖洗；
(6)將6μ?檢測抗體標(biāo)記物孵化溶液Au-聚多巴胺/四氧化三鐵-Ab2S液滴至電極表面，置于4°C冰箱中孵化I h，清洗后，晾干，制得一種Au-聚多巴胺/四氧化三鐵胃癌標(biāo)志物CA724的生物傳感器。
[0014]實(shí)施例3檢測抗體標(biāo)記物孵化溶液Au-聚多巴胺/四氧化三鐵-Ab 2溶液制備
(1)四氧化三鐵的制備
將0.54 g的FeClJP 0.15 g檸檬酸鈉加入裝有20 mL乙二醇的錐形瓶中，并且在室溫下均勻振蕩I h。將1.1 g醋酸鈉加入到混合物中繼續(xù)振蕩0.5 h;將上述混合物放入高溫反應(yīng)釜內(nèi)在200 ° C的條件下反應(yīng)12 h，超純水洗滌、60 ° C條件下干燥后制得四氧化三鐵；
(2)聚多巴胺/四氧化三鐵的制備
將制備的35 mg的四氧化三鐵，溶解于20mL、含I mg/mL多巴胺的pH=8.5 Tris-HCl溶液中，在室溫下振蕩8 h，利用磁分離技術(shù)進(jìn)行分離，超純水洗滌，60 T干燥后制得聚多巴胺/四氧化三鐵；(3)檢測抗體標(biāo)記物Au-聚多巴胺/四氧化三鐵的制備將2. Omg的聚多巴胺/四氧化三鐵加入2. 5 mL、0. 07 mmol/L HAuC14溶液中，均勻攪拌，向上述溶液中加入1 mL的0.005 mol/L的朽1檬酸鈉后在室溫下均勾攪拌2 h，用磁分離技術(shù)進(jìn)行分離，超純水洗滌，60 乂條件下干燥制