一種乳制品真蛋白測定儀及其測定方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于屬于乳制品真蛋白檢測技術(shù)領(lǐng)域，尤其與一種乳制品真蛋白測定儀及 其測定方法有關(guān)。
【背景技術(shù)】
[0002] 乳制品是指使用牛乳或羊乳及其加工制品為主要原料，加入或不加入適量的維生 素、礦物質(zhì)和其他輔料，使用法律法規(guī)及標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定所要求的條件，加工制作的產(chǎn)品。蛋白質(zhì) 是人體不可缺少的重要營養(yǎng)成分，乳制品為我們提供了大部分的蛋白質(zhì)來源。因此測定乳 制品中的蛋白質(zhì)是評價(jià)乳制品質(zhì)量的重要指標(biāo)，同時(shí)，蛋白質(zhì)也是其他許多食品中重要的 營養(yǎng)指標(biāo)。測定食品中蛋白質(zhì)的含量，對于評價(jià)食品中的營養(yǎng)價(jià)值、提高產(chǎn)品質(zhì)量、優(yōu)化產(chǎn) 品配方具有極其重要的作用。
[0003] 然而，在利益的驅(qū)使下，不法商販在乳制品中摻假的現(xiàn)象也屢屢發(fā)生。因此，提供 一個(gè)快速、可靠、廉價(jià)的乳制品中蛋白質(zhì)的檢測方法對檢驗(yàn)行業(yè)尤為重要。
[0004]目前國內(nèi)外所采用的測定乳制品中的蛋白質(zhì)的方法有很多，其中主要的檢測方法 有凱氏定氮法、雙縮脲分光光度法、其衍生的Folin-酚試劑法、考馬斯亮藍(lán)法、紫外分光光 度法以及最近發(fā)展起來的蛋白質(zhì)檢測儀和流動(dòng)注射分光光度法等。其中凱氏定氮法因其 測定結(jié)果準(zhǔn)確、穩(wěn)定性好、重復(fù)性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)被評為目前分析含氮化合物最常用的方法，此方 法適用范圍廣，受到國內(nèi)外的廣泛采用和認(rèn)可，但這種方法存在較多缺點(diǎn)，如操作過程繁 瑣、實(shí)際消耗量大、實(shí)驗(yàn)過程中會(huì)產(chǎn)生二氧化硫及硫化氫等有害氣體等，不適合快速檢測； 雙縮脲分光光度計(jì)法干擾物質(zhì)少，但主要的缺點(diǎn)是靈敏度差。Folin-酚試劑法由于增加了 一種增強(qiáng)顯色的試劑，所以其靈敏度比雙縮脲分光光度法高很多，但也需要更精確的控制 操作時(shí)間，一般適合于測定蛋白質(zhì)的相對濃度，也不適合快速檢測；考馬斯亮藍(lán)法摒棄了雙 縮脲分光光度法和酚試劑法的明顯缺點(diǎn)和使用限制，利用考馬斯亮藍(lán)染料測定蛋白質(zhì)的吸 光度，大大提高了靈敏度，測定快速、簡便、干擾物質(zhì)少，是目前測定蛋白質(zhì)靈敏度最高的方 法，但此法在測定不同蛋白質(zhì)時(shí)有較大的差異，去污劑會(huì)造成少許干擾；紫外分光光度法 簡便、快速，但測定的準(zhǔn)確度較差，干擾物質(zhì)多。新型的檢測方法主要有流動(dòng)分光光度法、直 接電位法測定和蛋白質(zhì)測定儀等。其中流動(dòng)分光光度法可實(shí)現(xiàn)樣品和試劑自動(dòng)同時(shí)定量， 這種方法具有分析速度快、試劑消耗量少、檢出限低、重現(xiàn)性好等優(yōu)點(diǎn)，本法已成功用于乳 制品中蛋白質(zhì)含量的準(zhǔn)確測定，滿足了市場對乳制品中蛋白質(zhì)含量的簡便、快速、準(zhǔn)確測定 的需求，但其檢測過程較復(fù)雜，儀器要求高，購買儀器所需費(fèi)用較高，難以實(shí)現(xiàn)對市場上乳 制品的現(xiàn)場快速分析。綜上所述，上述方法都有局限性。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 針對上述問題，本發(fā)明的目的旨在提供一種乳制品真蛋白測定儀及其測定方法。
[0006] 為此，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：一種乳制品真蛋白測定儀，其特征是，所述的乳 制品真蛋白測定儀包括電位計(jì)、溶解氧電極、測試杯體、磁力攪拌器和電流檢測裝置，所述 的測試杯體底部貫通并固定在所述的磁力攪拌器上，磁力攪拌器上的攪拌桿置于所述測試 杯體內(nèi)腔中，所述的溶解氧電極通過導(dǎo)線與所述的電位計(jì)連接，溶解氧電極底部伸入測試 杯體的內(nèi)腔中，所述的電流檢測裝置檢測測試杯體內(nèi)腔中溶液的電流，所述的電位計(jì)、溶解 氧電極、磁力攪拌器和電流檢測裝置通過控制系統(tǒng)控制工作。
[0007] -種乳制品真蛋白測定方法，包括以下步驟：
[0008] 1. 1、零氧校準(zhǔn)：將亞硫酸鈉溶液放入測定儀的測試杯體中并通以溶解氧電極，通 過測定儀上的磁力攪拌器以一定速度對溶液進(jìn)行攪拌，直至測定儀上的讀數(shù)趨于穩(wěn)定；
[0009] 1. 2、滿度校準(zhǔn)：把溶解氧電極用水沖洗干凈后，用濾紙吸干薄膜表面的水分，并將 電極置于空氣中，直至測定儀上的讀數(shù)趨于穩(wěn)定；
[0010] 1. 3氣壓：氣壓設(shè)定值為101. 3KPa;
[0011] 2、甘氨酸標(biāo)準(zhǔn)品的測定
[0012] 2. 1、分別準(zhǔn)備定量的甘氨酸溶液、2%的戊二醛溶液和pH為8. 2的磷酸鹽緩沖溶 液；
[0013] 2. 2、測試杯上加入上述磷酸鹽緩沖溶液和2%的戊二醛溶液，將溶解氧電極放入 溶液中，待讀數(shù)穩(wěn)定時(shí)記錄電流值和溫度，加入甘氨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液，記錄時(shí)間，待電流值穩(wěn)定 后讀取電流下降值，每一標(biāo)準(zhǔn)溶液測定三次，以電流下降值的平均值作為縱坐標(biāo)（nA)，以甘 氨酸溶液的濃度（mM)作為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；
[0014] 3、樣品的測定
[0015] 3. 1、分別取適量牛奶樣品進(jìn)行稀釋，混勻備用，利用加標(biāo)法分別測定樣品溶液與 加入甘氨酸標(biāo)準(zhǔn)品的樣品溶液的電流下降值，每組重復(fù)測量三次，用電流下降的平均值計(jì) 算樣品的蛋白質(zhì)含量，結(jié)果分別以甘氨酸的含量（g)/N的含量以及用N換算的蛋白質(zhì)的含 量計(jì)。
[0016] 使用本發(fā)明可以達(dá)到以下有益效果：本發(fā)明利用電流法快速測定乳制品中蛋白質(zhì) 的含量，并利用雙功能試劑戊二醛和含氨基的化合物如蛋白質(zhì)和氨基酸等反應(yīng)的產(chǎn)物對溶 液中氧的消耗，通過溶解氧儀測定電流下降值來分析樣品中蛋白質(zhì)的含量；通過測定不同 濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、樣品及不同溫度等條件下的試驗(yàn)結(jié)果。本發(fā)明研究的目的在于提供一種更 加簡便、快速、可靠且廉價(jià)的蛋白質(zhì)測定儀，利用溶解氧儀器對反應(yīng)消耗氧的測定從而根據(jù) 回歸方程得到蛋白質(zhì)或氨基酸的含量，減少了因非蛋白氮的存在而導(dǎo)致檢測的誤差，以便 更好的實(shí)現(xiàn)快速準(zhǔn)確的測定食品中蛋白質(zhì)的構(gòu)想，保證市場乳制品的安全。
【附圖說明】
[0017] 圖1為本發(fā)明的結(jié)構(gòu)示意圖。
【具體實(shí)施方式】
[0018] 下面結(jié)合附圖對本發(fā)明的【具體實(shí)施方式】進(jìn)行詳細(xì)描述。
[0019] 如圖1所示，本發(fā)明包括電位計(jì)4、溶解氧電極3、測試杯體1、磁力攪拌器2和電流 檢測裝置5,測試杯體底部貫通并固定在磁力攪拌器2上，磁力攪拌器2上的攪拌桿置于所 述測試杯體內(nèi)腔中，溶解氧電極3通過導(dǎo)線與電位計(jì)4連接，溶解氧電極3底部伸入測試杯 體1的內(nèi)腔中，電流檢測裝置5檢測測試杯體內(nèi)腔中溶液的電流，電位計(jì)4、溶解氧電極3、 磁力攪拌器2和電流檢測裝置5通過控制系統(tǒng)控制工作。
[0020] 實(shí)施例1 :準(zhǔn)備儀器：JPRS-I溶解氧儀；磁力攪拌器；凱氏定氮裝置（實(shí)驗(yàn)室配 置）；分析天平（萬分之一天平）；純水機(jī)；甘氨酸標(biāo)準(zhǔn)品（分析純，l〇〇g);戊二醛（分析純， 25%);磷酸氫二鉀（分析純）；磷酸二氫鉀（分析純）；氯化鉀飽和溶液（分析純氯化鉀晶 體溶于水配制）；濃硫酸（實(shí)驗(yàn)室提供）；硫酸銅（分析純）；硫酸鉀（分析純）。試劑除特 殊說明外均為分析純，本實(shí)驗(yàn)用水均為純水。
[0021] 零氧校準(zhǔn)：稱取5. 26g亞硫酸鈉用IOOmL純水溶解，配制成5%的亞硫酸鈉溶液 備用。按下溶解氧儀的"零氧"鍵，此時(shí)儀器處于零氧狀態(tài)，然后，將電極放入上述新鮮配制 的亞硫酸鈉溶液中，同時(shí)以一定的速度攪拌溶液，當(dāng)儀器顯示讀數(shù)趨于穩(wěn)定后，按下"確認(rèn)" 鍵，儀器完成零氧校準(zhǔn)并返回測量工作狀態(tài)。
[0022] 滿度校準(zhǔn)：儀器按下"滿度"鍵，此時(shí)儀器處于滿度校準(zhǔn)狀態(tài)，把溶解氧電極用水 沖洗干凈后，用濾紙小心吸干薄膜表面的水分，并將電極置于空氣中，待讀數(shù)穩(wěn)定后，按下 "確認(rèn)"鍵，儀器完成滿度校準(zhǔn)并返回測量工作狀態(tài)。
[0023] 氣壓校準(zhǔn)：氣壓設(shè)定值為101. 3KPa
[0024] 甘氨酸標(biāo)準(zhǔn)品的測定：
[0025] 甘氨酸標(biāo)準(zhǔn)品及試劑的配置：分別稱取0. 0000g、0. 0187g、0. 0375g、0. 0563g、 0.0750g、0.0937g、0. 1125g、0. 1500g、0. 1875g甘氨酸標(biāo)準(zhǔn)品，用少量純水溶解后定容至 25mL，配制成OmM、10mM、20mM、30mM、40mM、50mM、60mM、80mM、IOOmM的標(biāo)準(zhǔn)溶液，混勻備用。 準(zhǔn)確吸取8. 00mL25 %的戊二醛溶液于IOOmL容量瓶中，純水定容，配制成2%的戊二醛溶 液，混勻備用。分別稱取5. 25g磷酸二氫鉀和14g磷酸氫二鉀用純水溶解后定容至500mL， 配制成pH8. 2, 0. 2M的磷酸鹽緩沖溶液。
[0026] 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制和線性范圍的確定：燒杯中加入IOOmL緩沖液和10mL2%戊二醛溶 液，放入適當(dāng)攪拌子后置于磁力攪拌器上，將溶解氧儀的電極放入溶液中，待讀數(shù)穩(wěn)定時(shí)記 錄電流值和溫度，分別準(zhǔn)確加入〇 -50mM的甘氨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液10mL，記錄時(shí)間，待電流值穩(wěn)定 后（約10-15min)讀取電流下降值。每一標(biāo)準(zhǔn)溶液測定三次，以電流下降值的平均值作為 縱坐標(biāo)（nA)，以甘氨酸溶液的濃度（mM)作為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
[0027] 按上述方法分別測定20mM-100mM、10-60mM范圍內(nèi)的甘氨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的電流下 降值，并繪制不同濃度范圍的標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算相關(guān)系數(shù)。確定標(biāo)準(zhǔn)曲線以及測量的線性范 圍。若溫度波動(dòng)較大，可將結(jié)果換算成20°C相應(yīng)的值進(jìn)行分析。
[0028] 樣品的測定
[0029] 樣品：伊利純牛奶；華西純牛奶；維維維他型豆奶粉；伊利學(xué)生營養(yǎng)豆奶粉；
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