規(guī)范化川烏炮制工藝的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及中藥領(lǐng)域，特別是設(shè)及一種規(guī)范化川烏炮制工藝的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 炮制是降低川烏毒性的第一步，也是系統(tǒng)研究川烏的起點。歷代醫(yī)家分別采取水 漂、火制、蒸煮及用輔料去毒等不同的方法對川烏進行炮制，據(jù)文獻記載約有70余種炮制 方法，但目前川烏炮制方法仍W水煮、蒸制等方法為主，少數(shù)人應(yīng)用到了高壓蒸制或微波炮 制等方法。雖然應(yīng)用藥典法炮制時川烏中各含量的變化較穩(wěn)定，但人力、物力、財力消耗大， 且根據(jù)口嘗的方法鑒定炮制終點的隨意性比較大，所W對川烏的炮制進行全面的研究是當 務(wù)之急?？蒲腥藛T雖然在烏頭類藥材炮制省時、工業(yè)化生產(chǎn)和降低毒性等方面進行了深入 研究，但是仍然缺乏對其炮制工藝的系統(tǒng)性研究和完整的化學(xué)成分、藥理、毒理相關(guān)性研 究。此研究細化了川烏炮制的各個工藝過程，運用高溫（高壓）對川烏進行了蒸制，不僅節(jié) 省了人力、物力、財力，而且整個過程易于控制，對后期的進一步研究提供了有力的保證。
[0003] 由于川烏藥材質(zhì)地比較堅硬，為了進行充分、有效的炮制，蒸制川烏前須對川烏進 行充分的浸泡（浸泡至內(nèi)無干屯、）。通過對歷代相關(guān)文獻研究可知川烏浸泡所需的時間較 長，一般為2~15天，且川烏藥材中富含淀粉，浸泡時極易發(fā)生霉變。本章通過溫水浸泡川 烏大約1天，大大縮短了其浸泡時間，減少了霉變的風(fēng)險，對整個工藝的優(yōu)化提供了良好的 基礎(chǔ)。
[0004] 制川烏減毒增效的主要環(huán)節(jié)是其中的雙醋型生物堿成分轉(zhuǎn)化為毒性較小的單醋 型生物堿，經(jīng)過炮制后毒性會降低為原來的1/200。烏頭堿類成分的水解動力學(xué)符合一級反 應(yīng)方程，升高反應(yīng)溫度均能加速其水解過程。從實驗結(jié)果中可W看出15min內(nèi)成分含量變 化較大，是因為川烏在高溫高壓下瞬間發(fā)生劇烈的反應(yīng)，15min后雙醋型生物堿較少，雙醋 型生物堿成分轉(zhuǎn)化為單醋型生物堿成分的反應(yīng)也趨于緩和。
[0005] 蒸煮法炮制川烏的主要影響因素是炮制溫度（壓力）及時間，與煮制相比，采用蒸 制的方法對川烏進行炮制可W根據(jù)需求對溫度（壓力）進行控制，不受限至l〇〇°C，在高溫 (高壓）時炮制的時間明顯縮短，同時也節(jié)省了人力及水電，是高效、環(huán)保的炮制方法。
[0006] 制川烏中單醋型生物堿及雙醋型生物堿時量變化關(guān)系曲線擬合回歸方程及 時-量變化散點圖可W直觀地體現(xiàn)兩類成分隨著時間變化的趨勢，說明成分變化在此條件 下是平穩(wěn)、可控的。但是，此方程僅適用于對該產(chǎn)區(qū)相近批次或生川烏初始含量相近的成分 含量的預(yù)測，對初始含量差異比較大的生川烏的炮制時間的預(yù)測將具有一定的局限性，所 W需要應(yīng)用NIR對其進行監(jiān)控。
[0007] 藥典考察制川烏的含量時需要采用HPLC進行含量測定，在同時考察6種成分的 含量后，最后總結(jié)為成分相似的兩類成分進行討論，單醋型生物堿的含量要達到0. 070%~ 0. 150% (0. 7~1. 5mg/g)，雙醋型生物堿的含量要達到0. 04% 0). 4mg/g)W下，該法前處 理過程比較復(fù)雜，每次進樣耗時65min，消耗大量試劑，且毒性較大。藥典考察水分時，除去 稱量樣品的時間，至少需要化，由于需要一定空間進行烘干及冷卻，同時測量的樣品數(shù)與烘 箱大小、干燥器大小等因素相關(guān)?？梢奌PLC及烘干法在測定制川烏樣品時耗時長，效率低， 待測樣品數(shù)很多時，其分析數(shù)據(jù)的效率就更加滯后，而NIR不受W上條件制約，且檢測效率 局。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008] 本發(fā)明的目的是提供一種規(guī)范化川烏炮制工藝的方法，該方法應(yīng)用近紅外光譜法 運一快速檢測技術(shù)輔助川烏的繁瑣的炮制過程，既達到炮制后減毒增效的作用，又達到節(jié) 約資源的目的。
[0009] 實現(xiàn)上述發(fā)明目的技術(shù)方案如下。
[0010] 一種規(guī)范化川烏炮制工藝的方法，包括W下步驟：
[0011] (1)用近紅外漫反射光譜法采集制川烏樣品的NIR數(shù)據(jù)；
[0012] (2)采用PLS法分別建立NIR信息與單醋型生物堿、雙醋型生物堿、水分之間的定 量分析模型。
[0013] 在其中一個實施例中，制川烏中單醋型生物堿、雙醋型生物堿、水分的校正模型 的建模光譜范圍分別為 8431. 26 ~4075. 93,5086. 76 ~4088. 64、7725. 44 ~5924. 25， 7934. 87 ~4088. 64畑1-1。
[0014] 在其中一個實施例中，還包括步驟（3)采用PLS法建立定量校正模型和驗證模型， W校正集樣品的校正均方根誤差（MSEC)及其相關(guān)系數(shù)（r)，驗證集樣品的預(yù)測均方根誤 差（RISE巧及其r為指標優(yōu)化建模參數(shù)。
[001引在其中一個實施例中，校正模型的MSEC削旨型生獅咸= 0? 098，r單醋型生物堿=0? 9559;RM沈C雙醋型生物堿二0? 034，r雙醋型生物堿二0? 9694 ;RM沈C水分二0? 002，r水分二0? 97670
[0016] 在其中一個實施例中，驗證模型的RM沈P單醋型生物堿二0?I68，r單醋型生麵二0?9266; RM沈P雙醋型生物堿二0? 039，r雙醋型生物堿二0? 9826 ;RM沈P水分二0? 004，r水分二0? 8363〇
[0017] 在其中一個實施例中，用近紅外漫反射光譜法采集制川烏樣品的NIR數(shù)據(jù)包括 W下步驟：分別取制川烏樣品粉末5g，放入石英樣品杯中，W完全遮蓋光線為準，W空氣 為參比，按下述實驗條件進行掃描，采樣條件：積分球漫反射，分辨率8cm1，光譜采集范圍 10000~4000cm1，掃描次數(shù)64次，溫度20 °C~25 °C，相對濕度10 %~20%。
[0018] 本發(fā)明應(yīng)用近紅外漫反射光譜法采集119個制川烏樣品的NIR數(shù)據(jù)，采用PLS法 分別建立了NIR信息與單醋型生物堿、雙醋型生物堿、水分之間的定量分析模型。制川烏 中單醋型生物堿、雙醋型生物堿、水分的校正模型的建模光譜范圍為8431. 26~4075. 93， 5086. 76 ~4088. 64、7725. 44 ~5924. 25,79：M. 87 ~4088. 64cm1，校正模型的RM沈C單醋型生 #1堿二0. 〇98,叫醋型生物堿二0. 9559 ;觀沈〔雙醋型生物堿二0. 〇34,1"雙醋型生物堿=0. 9694 ;觀沈〔7_|<；分= 0. 0〇2, '7_|<；分=0. 9767,驗證板型的觀沈口單醋型生物堿=0.I68,1'單醋型生!|：勿堿=0. 9266 ;觀沈口雙醋型 生物堿二〇? 〇39，崎醋型生物堿二〇? 9826 ;觀§6口7_|<；分=0. 004,'7_|<；分=0. 8363。經(jīng)統(tǒng)計學(xué)檢驗，二類 成分的預(yù)測值與參考值的r分別為0. 970、0. 993、0. 918，P< 0. 001，說明NIR與HPLC測定 單醋型生物堿及雙醋型生物堿的相關(guān)性較好，NIR與烘干法測定水分的相關(guān)性較好，可W較 準確地預(yù)測其覆蓋范圍的相應(yīng)物質(zhì)含量。本發(fā)明用NIR技術(shù)對川烏的炮制進行控制，既達 到炮制后減毒增效的作用，又達到節(jié)約資源的目的。
[0019] 由實驗數(shù)據(jù)可知，NIR模型的各項參數(shù)均可滿足相關(guān)精度要求，可較準確地預(yù)測出 制川烏中單醋型生物堿、雙醋型生物堿及水分的含量，可用于制川烏樣品的快速鑒定，來快 速判斷制川烏的炮制終點，不僅為制川烏樣品在線監(jiān)測提供了理論支撐，同時，可協(xié)助制川 烏飲片生產(chǎn)廠家對炮制過程進行控制，也可幫助藥品檢驗部口及制藥公司對制川烏飲片在 投料使用之前進行最后把關(guān)，將保證其安全性，也將為生產(chǎn)應(yīng)用節(jié)約寶貴的時間。
【附圖說明】
[0020] 圖1是實施例1中單醋型生物堿含量分布圖；
[0021] 圖2是實施例1中雙醋型生物堿含量分布圖；
[0022] 圖3是實施例1中水分含量分布圖；
[0023] 圖4是實施例1中119份制川烏樣品NIR疊加圖；
[0024] 圖5是實施例1中119份制川烏樣品的馬氏距離圖，其中a單醋型生物堿；b雙醋 型生物堿；C水分；
[002引圖6是實施例1中各成分的相關(guān)光譜圖，其中a單醋型生物堿；b雙醋型生物堿；C水分；
[0026] 圖7是實施例1中單醋型生物堿近紅外光譜預(yù)測值與參考值相關(guān)圖（a)與模型殘 差分布圖化），注：殘差=預(yù)測值-參考值；
[0027] 圖8是實施例1中雙醋型生物堿近紅外光譜預(yù)測值與參考值相關(guān)圖（a)與模型殘 差分布圖化）；
[0028] 圖9是實施例1中水分近紅外光譜預(yù)測值與烘干法參考值相關(guān)圖（a)與模型殘差 分布圖化）；
[0029] 圖10是實施例2中的制川烏100°C煮制含量變化圖；
[0030] 圖11是實施例2中制川烏在不同溫度（壓力）下蒸制后單醋型生物堿的含量變 化圖；
[0031] 圖12是實施例2中制川烏在不同溫度（壓力）下蒸制后雙醋型生物堿的含量變 化圖；
[0032] 圖13是實施例2中制川烏干燥試驗聚類分析結(jié)果圖；
[0033] 圖14是實施例2中制川烏HPLC圖