肺炎支原體抗原檢測(cè)試劑盒及其檢測(cè)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于醫(yī)學(xué)檢測(cè)領(lǐng)域，涉及一種肺炎支原體抗原檢測(cè)試劑盒及其檢測(cè)方法。
【背景技術(shù)】
[0002]肺炎支原體(IAeymwia)是人類支原體肺炎的病原體。支原體肺炎的病理改變以間質(zhì)性肺炎為主，有時(shí)并發(fā)支氣管肺炎，稱為原發(fā)性非典型性肺炎。主要經(jīng)飛沫傳染，潛伏期2?3周，發(fā)病率以青少年最高。
[0003]支原體肺炎的臨床表現(xiàn)和胸部X線檢查并不具特征性，單憑臨床表現(xiàn)和胸部X線檢查無(wú)法做出診斷。若要明確診斷，需要進(jìn)行病原體的檢測(cè)?，F(xiàn)有的肺炎支原體(IPneumonia )的檢測(cè)方法主要包括:病原體分離培養(yǎng)及組織細(xì)胞培養(yǎng)法，膠體金法，酶免疫測(cè)定(EIA )，核酸擴(kuò)增法(PCR )熒光法。
[0004]中國(guó)專利申請(qǐng)文件CN104673718A公開了 “一種人肺炎支原體培養(yǎng)基及其診斷試劑盒”，即采用病原體分離培養(yǎng)的方法進(jìn)行病原體檢測(cè)，但是此種方法檢測(cè)窗口期長(zhǎng)(需病毒感染7天以上)，容易造成假陽(yáng)性或假陰性；檢測(cè)過(guò)程繁雜，時(shí)間長(zhǎng)；特異性低，肉眼判斷，
不可定量。
[0005]膠體金法也存在特異性低的問(wèn)題。
[0006]核酸擴(kuò)增法(PCR )熒光法對(duì)檢測(cè)設(shè)備儀器PCR儀和檢測(cè)技術(shù)要求高。
[0007]此外酶標(biāo)儀酶免疫測(cè)定(EIA )同樣存在對(duì)檢測(cè)設(shè)備儀器酶標(biāo)儀和檢測(cè)技術(shù)要求尚的缺陷。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008]本發(fā)明的目的是提供一種肺炎支原體抗原檢測(cè)試劑盒及其檢測(cè)方法，以實(shí)現(xiàn)檢測(cè)窗口期短；檢測(cè)用時(shí)短，操作簡(jiǎn)便；檢測(cè)特異性強(qiáng)；靈敏度高的目的。
[0009]為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取下述技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn):
本發(fā)明提供一種肺炎支原體抗原檢測(cè)試劑盒，包括試劑板，樣品抽提液和樣品管； 試劑板包括卡板和試劑條，
其中試劑板的外殼為卡板，試劑條位于卡板內(nèi)部；
卡板上表面設(shè)有加樣孔和檢測(cè)窗口；
試劑條包括PVC板，層析膜，樣品墊，結(jié)合墊和吸水材料；
卡板上的加樣孔位于樣品墊之上，
結(jié)合墊上面含有納米微球標(biāo)記的肺炎支原體單克隆抗體，
層析膜上包含檢測(cè)線T和質(zhì)控線C，檢測(cè)線T和質(zhì)控線C均位于卡板的檢測(cè)窗口內(nèi)，T線含有肺炎支原體單克隆抗體，C線含有羊抗鼠的IgG的多克隆抗體。
[0010]進(jìn)一步，納米微球?yàn)榧{米金顆粒，彩色乳膠微球、或熒光微球以及量子點(diǎn)中的一種，直徑為納米級(jí)別的顆粒。
[0011]進(jìn)一步，試劑盒還包括樣品管支架。
[0012]進(jìn)一步，試劑盒還包括棉簽。
[0013]進(jìn)一步，樣品抽提液為磷酸緩沖液、Tris緩沖液、硼酸緩沖液中的一種。
[0014]優(yōu)選的，所述樣品抽提液中含有質(zhì)量分?jǐn)?shù)1%的表面活性劑TritonX-100。
[0015]本發(fā)明還提供一種肺炎支原體抗原檢測(cè)方法，包括以下步驟:
步驟a，采取待測(cè)樣品；
步驟b，使用如權(quán)利要求1所述的試劑盒，將取出的樣品放入樣品管中，并加入樣品抽提液混合均勾;
步驟C，在試劑板的加樣孔中滴加步驟b中混合均勻的待測(cè)樣品液進(jìn)行反應(yīng)；
步驟d，將反應(yīng)后的試劑板插入免疫分析儀中進(jìn)行檢測(cè)，得到檢測(cè)結(jié)果。
[0016]進(jìn)一步，步驟b中加入的樣品抽提液體積與樣品體積比為1:1。
[0017]進(jìn)一步，步驟c中滴加的待測(cè)樣品液體積為100 μ I。
[0018]進(jìn)一步，步驟d中使用免疫熒光分析儀器時(shí)，其檢測(cè)波段為激發(fā)光波長(zhǎng)365nm，發(fā)射光波長(zhǎng)610nmo
[0019]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn):
本發(fā)明的試劑盒和檢測(cè)方法是采用納米微球免疫層析技術(shù)，其基本原理是免疫層析檢測(cè)方法和納米微球標(biāo)記技術(shù)的結(jié)合，產(chǎn)品是采用的是抗原抗體反應(yīng)方法，即將待測(cè)抗原相應(yīng)的抗體固定于載體T線上，同時(shí)將納米微球標(biāo)記好的另一個(gè)抗體固定于結(jié)合墊上。當(dāng)樣品中含有待檢測(cè)物質(zhì)時(shí)，待檢測(cè)物質(zhì)和固定在結(jié)合墊上的納米微球標(biāo)記抗體反應(yīng)，在層析至固定于T線位置上的抗體處，和該抗體反應(yīng)形成抗體-抗原-抗體-納米微球復(fù)合物，該復(fù)合物可以顯色或者在激發(fā)光作用下顯色，顯色的強(qiáng)弱與待測(cè)物質(zhì)的濃度呈線性關(guān)系。
[0020]應(yīng)用本發(fā)明的檢測(cè)試劑盒和檢測(cè)方法時(shí)，時(shí)間短，操作簡(jiǎn)便。
[0021]本產(chǎn)品以肺炎支原體的抗原和抗體的特異性結(jié)合反應(yīng)，加之熒光物質(zhì)強(qiáng)化特異性反應(yīng)效果，大大提高了產(chǎn)品的性能。
[0022]靈敏度:肺炎支原體抗原檢測(cè)試劑盒最小檢測(cè)靈敏度為7.81 X 102CFU/ml，本發(fā)明較傳統(tǒng)的培養(yǎng)法，其檢測(cè)靈敏度可以高出1-2個(gè)數(shù)量級(jí)。
[0023]特異性:產(chǎn)品的特異性大于99%，交叉反應(yīng)試驗(yàn)確認(rèn)，本試劑與18種細(xì)菌和真菌、14種病毒及衣原體均沒(méi)有交叉反應(yīng)。
[0024]在患者感染的初期(2-3天左右)，僅有少量的肺炎支原體病毒時(shí)。本試劑盒較高的特異性和靈敏度，能夠準(zhǔn)確判斷MP的陽(yáng)性感染情況，在感染初期即可確定是否感染MP病毒，為治療提供依據(jù)。
【附圖說(shuō)明】
[0025]圖1是本發(fā)明實(shí)施例1中的試劑板結(jié)構(gòu)示意圖。
[0026]圖2是本發(fā)明實(shí)施例1中的熒光免疫分析儀讀取的結(jié)果。
[0027]圖3是本發(fā)明實(shí)施例2中的可肉眼判讀的檢測(cè)結(jié)果。
【具體實(shí)施方式】
[0028]下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)闡述。
[0029]實(shí)施例1 一種肺炎支原體抗原檢測(cè)試劑盒(熒光免疫法)
該試劑盒包括試劑板，樣品抽提液，樣品管，棉簽和樣品管架。
[0030]其中樣品抽提液為磷酸緩沖液，所述磷酸緩沖液濃度為ΙΟηΜ，并含有質(zhì)量分?jǐn)?shù)1%的表面活性劑TritonX-100。
[0031 ] 樣品管為普通樣品管即可，無(wú)特殊要求。
[0032]棉簽用于輔助樣品的采集，適用于鼻腔取樣。
[0033]樣品管架用于支撐樣品管，便于操作。
[0034]試劑板如圖1所示，包括卡板I和試劑條，
其中卡板1，包括上下兩塊，分別為卡板11和卡板12，卡板11和卡板12合在一起形成試劑板的外殼，試劑條位于兩塊卡板中間的空腔內(nèi)。
[0035]卡板11的上表面設(shè)有加樣孔13和檢測(cè)窗口 14。
[0036]其中加樣孔13對(duì)應(yīng)試紙條的加樣位置，檢測(cè)窗口 14對(duì)應(yīng)試紙條的檢測(cè)位置。
[0037]試劑條為免疫層析試紙條，包括PVC板，層析膜，樣品墊，結(jié)合墊和吸水材料。
[0038]結(jié)合墊為玻璃纖維，上面固定有熒光微球標(biāo)記的肺炎支原體單克隆抗體。
[0039]層析膜為硝酸纖維素膜，層析膜上包含檢測(cè)線T和質(zhì)控線C，檢測(cè)線T和質(zhì)控線C均位于卡板的檢測(cè)窗口內(nèi)，其中T線位置固定有肺炎支原體單克隆抗體，C線位置固定有羊抗鼠的IgG的多克隆抗體。T線位置固定的肺炎支原體單克隆抗體與結(jié)合墊上固定的肺炎支原體單克隆抗體，此兩處的抗體與抗原結(jié)合的位點(diǎn)不同。
[0040]吸水材料位于層析膜樣品流動(dòng)方向的末端，確保產(chǎn)品能夠順利快速的通過(guò)層析膜。
[0041]使用實(shí)施例1的肺炎支原體抗原檢測(cè)試劑盒(免疫熒光法)檢測(cè)待測(cè)樣品，操作過(guò)程如下:
1.取待測(cè)樣品(如咽拭子)0.5ml，加入樣品管中，然后加入0.5ml的樣品抽提液，反復(fù)擠壓樣品管數(shù)次，使咽拭子樣品中病毒盡可能多的釋放到樣品抽提液中，并且充分混勻樣品O
[0042]2.在試劑板上的加樣孔中，滴加10ul (3滴)的待測(cè)樣品液，等待15_20min。
[0043]3.將反應(yīng)后的試劑板，插入焚光免疫分析儀中，開始檢測(cè)。焚光免疫分析儀的檢測(cè)波段為激發(fā)光波長(zhǎng)365nm，發(fā)射光波長(zhǎng)610nm。
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