紅細(xì)胞和非hdl過濾層及其制備方法、測(cè)量hdl用試紙條的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及了一種用于過濾紅細(xì)胞和非高密度脂蛋白的綜合過濾層及該過濾層的制備方法和使用該過濾層測(cè)量人體血液高密度脂蛋白用的干化學(xué)試紙條。
【背景技術(shù)】
[0002]膽固醇在血液中存在于脂蛋白中，其存在形式包括高密度脂蛋白膽固醇(HDL)Jg密度脂蛋白膽固醇(LDL)、極低密度脂蛋白膽固醇(VLDL)幾種。在血中存在的膽固醇絕大多數(shù)都是和脂肪酸結(jié)合的膽固醇酯，僅有10%不到的膽固醇是以游離態(tài)存在的。高密度脂蛋白有助于清除細(xì)胞中的膽固醇，而低密度脂蛋白超標(biāo)一般被認(rèn)為是心血管疾病的前兆。
[0003]高密度脂蛋白:它運(yùn)載周圍組織中的膽固醇，再轉(zhuǎn)化為膽汁酸或直接通過膽汁從腸道排出，動(dòng)脈造影證明高密度脂蛋白膽固醇含量與動(dòng)脈管腔狹窄程度呈顯著的負(fù)相關(guān)。所以高密度脂蛋白是一種抗動(dòng)脈粥樣硬化的血漿脂蛋白，是冠心病的保護(hù)因子。俗稱“血管清道夫”。血清高密度脂蛋白膽固醇的降低，預(yù)示著冠心病的出現(xiàn)。臨床上常同時(shí)測(cè)定高密度脂蛋白和血清總膽固醇，并根據(jù)它們的比值作為冠心病的信息指標(biāo)。
[0004]測(cè)量全血中的高密度脂蛋白，通常需要兩個(gè)處理步驟。首先，紅細(xì)胞的存在會(huì)干擾比色測(cè)試，需要將全血中的紅細(xì)胞分離出來，以產(chǎn)生血漿或血清；其次，由于通常采用的是相同的酶法比色來檢測(cè)總膽固醇和高密度脂蛋白，因此，需要將總膽固醇中的非高密度脂蛋白如LDL、VLDL和乳糜顆粒除掉，以此排除對(duì)高密度脂蛋白測(cè)定的干擾。
[0005]在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)，將血液離心以從血漿中分離紅細(xì)胞，并在試管通過溶液的比色法以測(cè)定分析物的濃度。但離心需要離心機(jī)，并耗費(fèi)較長的離心時(shí)間。此法并不適用于需要現(xiàn)場(chǎng)測(cè)試的場(chǎng)所如社區(qū)診所和患者在家庭中自己進(jìn)行的測(cè)試。
[0006]另一種測(cè)量體液分析物如總膽固醇、高密度脂蛋白膽固醇(HDL)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL)和甘油三酯的方法，是采用干化學(xué)試紙條。此法操作便捷，檢測(cè)快速，非常適用于床旁診斷(P0CT)。干化學(xué)試紙條利用幾個(gè)膜層來分離紅細(xì)胞和血漿、使所述血漿與特定的一種或多種試劑反應(yīng)并獲得指示特定分析物濃度的信號(hào)，所述信號(hào)通常是分光光度信號(hào)。但目前的干化學(xué)試紙條存在測(cè)量誤差，精密度不夠，且測(cè)試分析時(shí)間長等不足之處。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]為了解決上述現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明提供了一種用于過濾紅細(xì)胞和非高密度脂蛋白的綜合過濾層，該過濾層在測(cè)量人體血液中高密度脂蛋白時(shí)將過濾紅細(xì)胞和除去非HDL綜合在一層中進(jìn)行，減少了測(cè)量誤差，提高了測(cè)量的重復(fù)性，并且響應(yīng)時(shí)間更加快速。本發(fā)明還提供了一種該過濾層的制備方法和測(cè)量人體血液高密度脂蛋白用的干化學(xué)試紙條。
[0008]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題通過以下技術(shù)方案予以實(shí)現(xiàn):
紅細(xì)胞和非高密度脂蛋白過濾層，其包含有用于過濾紅細(xì)胞和非高密脂蛋白所需的試劑；該試劑由潤濕劑、鹽、非高密度脂蛋白沉淀劑按質(zhì)量比1:0.5:1組成；其中，所述潤濕劑為糖類，可以是單糖、二糖或多糖等；所述非高密度脂蛋白沉淀劑為磷鎢酸、硫酸葡聚糖和二價(jià)金屬的組合物；所述試劑還可包括血凝素。
[0009]在本發(fā)明中，所述血凝素為外源凝集素、小麥胚芽凝集素、陽離子聚合物中的任一種。
[0010]在本發(fā)明中，所述試劑均勻噴點(diǎn)在所述過濾層上，具體步驟如下:將潤濕劑、鹽和非高密度脂蛋白沉淀劑按照比例配置成水溶液，用HCl或NaOH調(diào)pH值至6.6-6.4。將過濾層放至傳送帶，所配溶液通過噴點(diǎn)機(jī)準(zhǔn)確控制用量噴于過濾層上，噴點(diǎn)用量約為0.125 μ I/mm ;將噴點(diǎn)后的膜材送入鼓風(fēng)烘道中，溫度為40~60度，濕度低于30%，烘干時(shí)間約為lOmin。所述過濾層為不對(duì)稱膜材。所述不對(duì)稱膜材為玻璃纖維、聚砜、聚醚砜的任一種。
[0011]—種測(cè)量人體血液高密度脂蛋白的干化學(xué)試紙條，由上支持層、下支持層組成，在上支持層的測(cè)試區(qū)開有至少一個(gè)加樣孔，下支持層相應(yīng)位置開有多個(gè)測(cè)試孔，所述加樣孔和測(cè)試孔之間有上述的任一過濾層和反應(yīng)層，所述反應(yīng)層用于將反應(yīng)層的試劑與通過過濾層后的無紅細(xì)胞和非高密度脂蛋白的血液樣品進(jìn)行反應(yīng)。
[0012]本發(fā)明具有如下有益效果:
用于過濾紅細(xì)胞和非高密度脂蛋白的綜合過濾層在測(cè)量人體血液中高密度脂蛋白時(shí)，將過濾紅細(xì)胞和除去非HDL綜合在一層中進(jìn)行，減少了測(cè)量誤差，提高了測(cè)量的重復(fù)性，并且響應(yīng)時(shí)間更加快速，變異系數(shù)達(dá)到1.07%，響應(yīng)時(shí)間低至3s。本發(fā)明還提供了一種測(cè)量人體血液高密度脂蛋白用的干化學(xué)試紙條。
【附圖說明】
[0013]圖1為本發(fā)明干式試紙條的結(jié)構(gòu)示意圖；
圖2是現(xiàn)有技術(shù)中在一個(gè)層中進(jìn)行過濾紅細(xì)胞和低密度脂蛋白膽固醇兩者的常規(guī)試紙條(上部曲線)和根據(jù)本發(fā)明的試紙條(下部曲線)在相同條件下所獲得的反射率圖。
【具體實(shí)施方式】
[0014]下面結(jié)合附圖和實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)的說明。
[0015]本發(fā)明提供了一種紅細(xì)胞和非高密度脂蛋白過濾層，用于過濾掉人體血液中的紅細(xì)胞及非高密度脂蛋白。所述過濾層包含有用于過濾紅細(xì)胞和非高密脂蛋白所需的試劑；該試劑由潤濕劑、鹽、非高密度脂蛋白沉淀劑按質(zhì)量比1:0.5:1組成；其中，所述潤濕劑為糖類，可以是單糖、二糖或多糖等；所述非高密度脂蛋白沉淀劑為磷鎢酸、硫酸葡聚糖和二價(jià)金屬如鎂離子、錳離子等的組合物；所述試劑還可包括血凝素。
[0016]在本發(fā)明中，所述血凝素為外源凝集素、小麥胚芽凝集素、陽離子聚合物中的任一種。
[0017]在本發(fā)明中，所述過濾層膜材要求有較高的紅細(xì)胞分離效率和血漿回收率，以期達(dá)到降低樣品量的目的。優(yōu)選地，血漿回收率多60%，更優(yōu)選地，血漿回收率多80%。此外，膜材還應(yīng)滿足，不會(huì)與目標(biāo)物(如膽固醇、甘油三酯等)特異性結(jié)合，不會(huì)引起紅細(xì)胞破裂從而導(dǎo)致溶血等要求。膜材包括但不限定為玻璃纖維、聚砜、聚醚砜等等。該過濾層為不對(duì)稱膜材結(jié)構(gòu)，上膜材由較大的玻璃纖