一種用于測(cè)定植物油中黃曲霉素b1含量的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及食用油重金屬檢測(cè)領(lǐng)域，具體是指一種用于測(cè)定植物油中黃曲霉素BI含量的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]植物油廣泛分布于自然界中，是從植物的果實(shí)、種子、胚芽中得到的油脂(如花生油、豆油、亞麻油、蓖麻油、菜子油等)。黃曲霉素BI是目前已知植物油中主要的有害物質(zhì)。
[0003]黃曲霉毒素是由黃曲霉和寄生曲霉產(chǎn)生的一組結(jié)構(gòu)類(lèi)似的二呋喃香豆素代謝產(chǎn)物，目前已分離出并明確結(jié)構(gòu)的有12種以上。其中黃曲霉毒素BI的毒性和致癌性最強(qiáng)，其毒性比氰化鉀高，也是目前最強(qiáng)的化學(xué)致癌物，故各國(guó)對(duì)其在食品中的允許量都有嚴(yán)格規(guī)定。我國(guó)植物油中黃曲霉素BI的國(guó)標(biāo)測(cè)定方法也為液相測(cè)定方法，該法采用石油醚溶解樣品，氧化鋁層析柱凈化，再用高效液相色譜儀結(jié)合熒光檢測(cè)器測(cè)定。因?yàn)閷?duì)氧化鋁的規(guī)格及活化程度要求較高，造成檢測(cè)數(shù)據(jù)重現(xiàn)性較差，而且不能滿(mǎn)足確證要求。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的在于提供一種對(duì)儀器條件和前處理?xiàng)l件進(jìn)行優(yōu)化，使得檢測(cè)靈敏度顯著提高的用于測(cè)定植物油中黃曲霉素BI含量的方法。
[0005]本發(fā)明通過(guò)下述技術(shù)方案實(shí)現(xiàn):一種用于測(cè)定植物油中黃曲霉素BI含量的方法，包括以下步驟:
(1)進(jìn)行樣品前處理；
(2)配制標(biāo)準(zhǔn)溶液；
(3)選擇色譜條件；
(4)選擇質(zhì)譜分析條件，質(zhì)譜分析條件為離子源:大氣壓光致電離；掃描方式:正離子掃描；檢測(cè)方式:多反應(yīng)監(jiān)測(cè)；干燥氣:N2 ;干燥氣溫度:325°C ;干燥氣流速:8L/min ;霧化氣壓力:275.8kPa ;氣化溫度:350°C ；
(5)進(jìn)彳丁樣品的檢測(cè)；
(6)記錄所測(cè)得植物油中黃曲霉素BI的含量。
[0006]為了更好地實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的方法，進(jìn)一步地，所述步驟(I)中，樣品前處理的具體過(guò)程包括以下步驟:
(1.1)稱(chēng)取1.0g樣品，精確至0.0OOlg，置于1mL容量瓶中，用乙酸乙酯一環(huán)己烷混合溶液定容至刻度，渦旋lmin，過(guò)0.45 μ m有機(jī)濾膜后上GPC凈化；
(1.2)GPC栗流速4.7mL/min，棄去O?9min流分，收集9?22min流分，22?27min沖洗GPC柱。洗脫液為乙酸乙酯一環(huán)己烷混合溶液；
(1.3)將收集的流分于45°C真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至近干，殘?jiān)肐mL甲醇一丙酮混合溶液充分溶解，準(zhǔn)確移取0.7mL溶解液于ImL進(jìn)樣瓶中，氮吹至干；
(1.4)再加入0.2mL甲醇一丙酮混合溶液充分溶解后供液相色譜一串聯(lián)質(zhì)譜儀分析。
[0007]由于植物油是由不飽和脂肪酸和甘油化合而成的化合物，廣泛分布于自然界中。目前去除脂肪類(lèi)大分子干擾物最有效的方法是GPC(自動(dòng)凝膠系統(tǒng))法。GPC是20世紀(jì)70年代發(fā)展起來(lái)的一種凈化手段，由于具有自動(dòng)化程度高、凈化效果好及回收率高等優(yōu)點(diǎn)而被廣泛應(yīng)用。該方法利用化合物中各組分的分子量大小不同，與柱填料之間的作用不同，導(dǎo)致洗脫時(shí)間不同而達(dá)到分離的目的。因此，本研究利用乙酸乙酯一環(huán)己烷將樣品溶解，通過(guò)凝膠滲透色譜柱除去植物油樣品中的大分子雜質(zhì)，并收集目標(biāo)化合物。在樣品運(yùn)行前，需對(duì)GPC的淋洗條件進(jìn)行選擇。本技術(shù)方案采用推薦流速4.7mL/min洗脫，通過(guò)檢測(cè)濃度為20 μ g/L的黃曲霉素BI在不同流出時(shí)間的收集液，確定收集9?22min的流分。結(jié)果表明，在此洗脫時(shí)間收集，目標(biāo)化合物的回收率均大于80%，以此確定了本方法的GPC收集時(shí)間。此外，為了降低方法檢出限，本方法采取氮吹的方式富集樣品溶解液，取得了較好效果。
[0008]為了更好地實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的方法，進(jìn)一步地，所述步驟(2 )中，配制標(biāo)準(zhǔn)溶液包括標(biāo)準(zhǔn)工作溶液、空白樣品溶液以及基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。
[0009]標(biāo)準(zhǔn)工作溶液:以甲醇一丙酮混合溶液(3: 2)稀釋得到所需濃度的黃曲霉素BI標(biāo)準(zhǔn)溶液，現(xiàn)配現(xiàn)用；空白樣品提取液:選擇陰性樣品，按樣品前處理方法操作；基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液:根據(jù)儀器的靈敏度和線性范圍，吸取一定量的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，用空白樣品提取液配成系列濃度的基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。
[0010]基質(zhì)是指樣品中待測(cè)物以外的組分，其常對(duì)分析物的分析過(guò)程有顯著干擾，并影響分析結(jié)果的準(zhǔn)確性。由于植物油樣品富含油脂，為了消除測(cè)定液中存在的基質(zhì)效應(yīng)，本方法采取凝膠滲透色譜去除油脂，可較大程度減小測(cè)定液中的基質(zhì)效應(yīng)。實(shí)驗(yàn)分別采用甲醇一丙酮混合溶液(3: 2)及空白樣品測(cè)定液配制成濃度分別為3，10，50yg/L的目標(biāo)化合物混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，通過(guò)二者響應(yīng)值的比較來(lái)確定基質(zhì)效應(yīng)。
[0011]為了更好地實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的方法，進(jìn)一步地，所述步驟(3)中，色譜條件為色譜柱:XDBC18 色譜柱(4.6mmX50mm，1.8ym);流速:0.25mL/min ;柱溫:25°C ;進(jìn)樣量:10 μ L ;流動(dòng)相:Α為甲醇，B為10mmoL/L乙酸銨水溶液；梯度洗脫程序:0?5min，25%?75%A ；5?17min，75%A ；17 ?20min，75% ?100%A，20 ?34min，100%A。
[0012]色譜條件的優(yōu)化色譜柱的選擇
為了優(yōu)化色譜峰的分離并改善峰形，本方法分別采用資生堂MG III — C18色譜柱(150mmX2.1mm，5 μπι)、XDBC18 色譜柱(4.6mmX50mm，1.8 μπι)、ZO R BAXSB — Aq 色譜柱(150mmX 2.1mm，3.5 μ m)進(jìn)行分離實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)XDBC18 色譜柱(4.6mmX 50mm, 1.8 μ m)的分離效果較好。
[0013]進(jìn)樣量的選擇
進(jìn)樣量大可提高測(cè)定的靈敏度，但XDBC18色譜柱(4.6mmX50mm, 1.8 μπι)柱容量較小，所以本方法選擇的進(jìn)樣量為10yL。在上述優(yōu)化條件下，黃曲霉素BI。
[0014]為了更好地實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的方法，進(jìn)一步地，所述步驟(4)中，質(zhì)譜分析條件為離子源:大氣壓光致電離；掃描方式:正離子掃描；檢測(cè)方式:多反應(yīng)監(jiān)測(cè)；干燥氣:N2;干燥氣溫度:325°C ;干燥氣流速:8L/min ;霧化氣壓力:275.8kPa ;氣化溫度:350°C。
[0015]離子源與助劑的選擇
因?yàn)辄S曲霉素BI為弱極性化合物，在ESI源和APCI源的作用下均不易電離，因此響應(yīng)值很低。但黃曲霉素BI在接受了光子作用后則會(huì)發(fā)生光電離(PI)成為可被質(zhì)譜儀檢測(cè)的離子，所以實(shí)驗(yàn)選擇APPI源。助劑作為光電離的媒介，主要通過(guò)電荷交換或質(zhì)子轉(zhuǎn)移幫助待測(cè)物形成離子。本實(shí)驗(yàn)對(duì)比了丙酮和甲苯兩種助劑的效果。發(fā)現(xiàn)丙酮作助劑時(shí)，黃曲霉素BI的響應(yīng)值均比相同條件下甲苯作助劑時(shí)低，因此實(shí)驗(yàn)選擇甲苯作為助劑。
[0016]質(zhì)譜參數(shù)的優(yōu)