一種基于大型溞毒性的非甾體抗炎藥類新型污染物的毒性預(yù)測(cè)與評(píng)估方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于環(huán)境毒理學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種基于大型潘毒性的非留體抗炎藥 類新型污染物的毒性預(yù)測(cè)與評(píng)估方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 廣泛使用的非留體抗炎藥在為人類減輕病痛的同時(shí)，也帶來諸多環(huán)境污染和危 害，較低濃度暴露即會(huì)對(duì)水生生物造成不良影響，潛在風(fēng)險(xiǎn)不容忽視。然而，目前有關(guān)非甾 體抗炎藥的毒理研究仍主要集中在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)模擬的短期高劑量暴露下的急性毒性方面，對(duì) 其實(shí)際環(huán)境水平暴露時(shí)所可能引起的慢性則研究較少，但非留體抗炎藥的急性毒性數(shù)據(jù)往 往遠(yuǎn)高于其實(shí)際檢出濃度（100-1000倍），因此，為了避免高估甚至低估非留體抗炎藥的毒 害風(fēng)險(xiǎn)，提高準(zhǔn)確度和有效性，應(yīng)重點(diǎn)加強(qiáng)對(duì)這類污染物的低劑量慢性毒性研究。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明的目的是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中常規(guī)理化指標(biāo)不能反映實(shí)際環(huán)境中低劑量非甾 體抗炎藥類新型污染物慢性毒性的問題，提供一種基于大型潘毒性的非留體抗炎藥類新型 污染物的毒性預(yù)測(cè)與評(píng)估方法，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)非留體抗炎藥類新型污染物的毒性特征和毒性 水平進(jìn)行分析測(cè)試和定量描述。
[0004] 本發(fā)明的基于大型潘毒性的非留體抗炎藥類新型污染物的毒性預(yù)測(cè)與評(píng)估方法， 包括以下步驟：
[0005] a.將待測(cè)的非留體抗炎藥類新型污染物配制成呈等對(duì)數(shù)間距濃度的試驗(yàn)溶液，將 大型潘暴露于試驗(yàn)溶液中；
[0006] b.急性毒性測(cè)定：記錄暴露24h、48h、72h的大型潘的存活率；
[0007] 慢性毒性測(cè)定：定期喂食并定期更換試驗(yàn)溶液，記錄暴露21d的大型潘的存活率、 體長(zhǎng)、脫殼總次數(shù)、懷卵總次數(shù)和產(chǎn)潘總數(shù)；
[0008] c.根據(jù)急性毒性測(cè)定得到的數(shù)據(jù)計(jì)算得到24h LC5(]、48h LC5(]、72h LC5。，根據(jù)慢性 毒性測(cè)定數(shù)據(jù)計(jì)算得到21d LC5。、EC50 (體長(zhǎng)）、EC50 (脫殼）、EC50 (懷卵）、EC50 (產(chǎn)潘）。
[0009] 所述的非留體抗炎藥類新型污染物為雙氯芬酸、醋氨酚和/或布洛芬。
[0010] 所述的步驟a的大型潘為齡期6~24小時(shí)的大型潘。
[0011] 所述的步驟b的急性毒性測(cè)定，暴露期間不換水不喂食。
[0012] 所述的步驟b的記錄大型潘的存活率，是以心臟停止跳動(dòng)計(jì)為死亡。
[0013] 所述的步驟b的定期喂食并定期更換試驗(yàn)溶液，是每天每只大型潘喂0. 15mg斜格 柵藻液一次，并且每隔三天更換一次試驗(yàn)溶液。
[0014] 本發(fā)明方法采用大型潘體內(nèi)試驗(yàn)方法，分別利用短期即24、48、72小時(shí)和長(zhǎng)期即 21天的暴露方式描述非留體抗炎藥類新型污染物對(duì)大型潘的急性毒性、慢性毒性，判斷非 甾體抗炎藥類新型污染物對(duì)大型潘是否具有毒性的判據(jù)為：
[0015] 1、利用短期暴露方式，測(cè)定得到非留體抗炎藥類新型污染物對(duì)大型潘的急性毒 性，急性毒性測(cè)定得到24h、48h、72h LC50,以24h、48h、72h LC50描述急性毒性；
[0016] 2、利用長(zhǎng)期暴露方式，慢性毒性以大型潘21天暴露后的致死性和半致死性效應(yīng) 參數(shù)來表征，具體包括半數(shù)致死濃度（21d LC50, mg/L)、半數(shù)生長(zhǎng)情況受抑制濃度（體長(zhǎng)、 脫殼）和半數(shù)繁殖情況受抑制濃度（懷卵、產(chǎn)潘）；
[0017] 3、參照歐盟委員會(huì)所劃分的污染物對(duì)于水生生物的風(fēng)險(xiǎn)等級(jí)（EU Directive 93/67/EEC，1996) :EC50〈lmg/L 表示非常有毒；lmg/L〈EC50〈10mg/L 表示有毒；llmg/ L〈EC50〈100mg/L表示有害）進(jìn)一步對(duì)比評(píng)估非留體抗炎藥類新型污染物對(duì)大型潘的致毒 級(jí)別。
[0018] 本發(fā)明具有的優(yōu)點(diǎn)：
[0019] 本發(fā)明以大型潘為毒性測(cè)試的模式生物，將其暴露于典型非留體抗炎藥污水中， 通過分析非留體抗炎藥類新型污染物在單獨(dú)暴露時(shí)對(duì)大型潘的急性毒性、慢性毒性，定量 地測(cè)定這類污染物對(duì)大型潘的短期或長(zhǎng)期毒性效應(yīng)，急性毒性以24、48和72小時(shí)的半數(shù)致 死濃度（24h、48h、72h LC50, mg/L)描述，慢性毒性以大型潘21天暴露后的致死性和半致 死性效應(yīng)參數(shù)來表征，具體包括半數(shù)致死濃度（21d LC50，mg/L)、半數(shù)生長(zhǎng)情況受抑制濃度 (體長(zhǎng)、脫殼）和半數(shù)繁殖情況受抑制濃度（懷卵、產(chǎn)潘）。采用該方法可以對(duì)非留體抗炎 藥類新型污染物的毒性特征和毒性水平進(jìn)行分析測(cè)試和定量描述，解決常規(guī)理化指標(biāo)不能 反映的典型非留體抗炎藥污水生物毒性，同時(shí)可作為非留體抗炎藥污水生物毒性監(jiān)測(cè)和評(píng) 價(jià)的指標(biāo)，可為水體中這類污染物的潛在生態(tài)毒性風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測(cè)與評(píng)估提供參考。
【具體實(shí)施方式】
[0020] 以下實(shí)施例是對(duì)本發(fā)明的進(jìn)一步說明，而不是對(duì)本發(fā)明的限制。
[0021] 下列實(shí)例中未具體注明的實(shí)驗(yàn)方法，均可按照常規(guī)方法進(jìn)行，或按照所用產(chǎn)品生 產(chǎn)廠商的使用說明。下述實(shí)施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可通過商業(yè)途徑 得到。
[0022] 實(shí)施例1 :三種典型非留體抗炎藥類新型污染物（雙氯芬酸、醋氨酚和布洛芬）對(duì) 大型潘的急慢性毒性效應(yīng)評(píng)估
[0023] (1)預(yù)試驗(yàn)確定暴露濃度和效應(yīng)參數(shù)
[0024] 在150mL的玻璃燒杯中，盛放50mL試驗(yàn)溶液，分為6個(gè)暴露組（空白對(duì)照與5個(gè) 濃度加標(biāo)樣品組），暴露組濃度以試驗(yàn)溶液中含非留體抗炎藥類新型污染物的體積質(zhì)量濃 度（mg/L)表示。三種非留體抗炎藥類新型污染物加標(biāo)樣品組分別設(shè)置如下：雙氯芬酸暴 露濃度為 〇. 50、I. 50、4. 50、13. 5 和 40. 5mg/L ;醋氨酚暴露濃度為 0. 08、0. 24、0. 72、2. 16 和 6. 48mg/L ;布洛芬暴露濃度組0. 40、I. 20、3. 60、10. 8和32. 4mg/L ;空白對(duì)照的試驗(yàn)溶液為 不含任何非留體抗炎藥類新型污染物的蒸餾水；不設(shè)平行組。每個(gè)暴露組放10只大型潘， 其中慢性毒性試驗(yàn)中使用的大型潘全部為雌性，急性毒性試驗(yàn)連續(xù)暴露24、48、72小時(shí)，慢 性毒性試驗(yàn)連續(xù)暴露21天，每天喂一次斜格柵藻液（0. 15mg/d ·潘），并且每隔三天更換一 次實(shí)驗(yàn)溶液，以盡量確保目標(biāo)物濃度一致。每天觀察記錄大型潘的致死性和半致死性效應(yīng) 終點(diǎn)參數(shù)（表1)。當(dāng)母潘開始繁殖后，及時(shí)將新生幼潘移出。試驗(yàn)結(jié)束時(shí)將大型潘取出，在 顯微鏡下測(cè)量其體長(zhǎng)（從頭盔至殼刺部的長(zhǎng)度，不含尾刺）。毒理試驗(yàn)開展前后及各個(gè)時(shí)間 點(diǎn)均保存部分水樣用于目標(biāo)化合物的實(shí)際濃度測(cè)定。
[0025] 表1預(yù)實(shí)驗(yàn)所選用的致死性和半致死性效應(yīng)參數(shù)
[0026]
[0027] 對(duì)獲得的各效應(yīng)終點(diǎn)參數(shù)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，如果加標(biāo)樣品組與空白對(duì)照組差異 顯著，即0. 01〈P〈0. 05或者P〈0. 01時(shí)，則認(rèn)