，所得到的回歸方程為Iog(Y) = 1.64621og(X)+2. 9548， 線性范圍為0. 5~20ng/mL，相關系數(shù)為0. 9768。
[0064] 4、靈敏度試驗
[0065] 重復測定標準品10次，求發(fā)光平均值及其標準偏差，再由發(fā)光平均值減去兩倍 標準偏差后的值代入校準曲線所求得的濃度，計算平均檢測限。得出該方法的檢測限為 0. 02ng/mL，說明該方法的靈敏度較高。
[0066] 5、精密度試驗
[0067] 對低、中和高三種不同濃度的血清標本，分別進行20次重復測定，計算批內(nèi)變異； 對三個樣本每天重復測試兩次，連續(xù)測試20天，求算批間變異。批內(nèi)精密度[均值（CV)] 分別為[I. 12ng/mL (3. 81 % ) ]、[2. 58ng/mL (2. 53 % )]和[6. 56ng/mL (2. 24 % )];批間 精密度[均值（CV)]分別為[I. 18ng/mL(5.26% )]、[2.49ng/mL(4.75% )]和[6.61ng/ mL(4. 29% )]。
[0068] 6、特異性試驗
[0069] 選擇與鱗狀細胞癌相關的3種腫瘤標志物：CEA、CA19-9和CYFRA21-1，分別考察其 與SCCa的交叉反應，交叉反應率（cross-reactivity, CR)以如下公式計算：CR = SCCa/C 交叉反應物X 100%，其中SCCa指的是將交叉反應物發(fā)光值代入標準曲線所得SCCa的濃 度，C交叉反應物指交叉反應物的實際濃度。實驗結(jié)果如表1所示，SCCa和CEA與CA19-9 無交叉反應，與CYFRA21-1的交叉反應率為1. 45%，能滿足測試的要求，說明該方法的特異 性較好。
[0070] 表1 SCCa與CEA, CA19-9和CYFRA21-1的交叉反應結(jié)果
[0071]
[0073] 7、臨床對比
[0074] 使用上次第4點的方法對80例血清樣本進行檢測（不同的是將SCCa校準品換成 人血清樣本），每一個臨床樣品的檢測及與雅培SCCa試劑盒測定值的比較。以本方法測定 值為X軸，雅培分析系統(tǒng)的測定值為Y軸，作圖得相關曲線，如圖1所示。該曲線方程為Y =0. 9929X+0. 0039,相關系數(shù)為0. 9964,兩者相關性良好。
[0075] 按照非參數(shù)統(tǒng)計分析的95%可信區(qū)間計算參考范圍，收集300名健康志愿者的血 清，其中女性為166例，男性為134例，年齡范圍為21-70歲，測定得到參考范圍的上限為 I. 68ng/mL，與雅培i2000分析系統(tǒng)測定SCCa的參考范圍上限I. 5ng/mL相當。
[0076] 說明該鱗狀細胞癌抗原測定系統(tǒng)可應用于臨床測定人血清中的SCCa水平。
[0077] 8、健全性
[0078] 用SCCa標準品對高值的病人血清標本（濃度約為20ng/mL)進行依次的倍比 稀釋，得到稀釋度分別為1/2、1/4、1/8和1/16的樣品，每個樣品進行雙孔平行測定以得 到SCCa的濃度，以預測濃度作為X軸，實測濃度為Y軸，作圖所得線性擬合方程為Y = I. 0157X-0. 3329,相關系數(shù)為0. 9995,如圖2所示，表明該分析體系有良好的健全性。
[0079] 9、回收率
[0080] 在3份已知SCCA濃度的臨床病人血清中分別加入濃度為I. 0ng/mL、2. Ong/mL和 10ng/mL的SCCa溶液，重復5次測定回收率?；厥章试?7%~104%之間，結(jié)果見表2。 [0081 ] 表2人血清中SCCa的回收率
[0082] CN 105137079 A m ~P 7/7 頁
[0084] 以上所述實施例僅表達了本發(fā)明的幾種實施方式，其描述較為具體和詳細，但并 不能因此而理解為對本發(fā)明專利范圍的限制。應當指出的是，對于本領域的普通技術(shù)人員 來說，在不脫離本發(fā)明構(gòu)思的前提下，還可以做出若干變形和改進，這些都屬于本發(fā)明的保 護范圍。因此，本發(fā)明專利的保護范圍應以所附權(quán)利要求為準。
【主權(quán)項】
1. 一種鱗狀細胞癌抗原測定系統(tǒng)，其特征在于，包括包被有抗異硫氰酸熒光素抗體的 磁珠、異硫氰酸熒光素標記的鱗狀細胞癌抗原抗體、N-(氨基丁基）-N-(異魯米諾）標記的 鱗狀細胞癌抗原抗體、化學發(fā)光底物及熒光檢測裝置； 其中，所述異硫氰酸熒光素標記的鱗狀細胞癌抗原抗體、所述N-(氨基丁基）-N-(異魯 米諾）標記的鱗狀細胞癌抗原抗體及待測物形成雙抗體夾心復合物，所述包被有抗異硫氰 酸熒光素抗體的磁珠用于與所述雙抗體夾心復合物結(jié)合以形成抗原抗體復合物沉淀，所述 抗原抗體復合物沉淀與所述化學發(fā)光底物發(fā)生熒光反應，所述熒光檢測裝置用于檢測所述 焚光反應的焚光強度。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的鱗狀細胞癌抗原測定系統(tǒng)，其特征在于，所述異硫氰酸熒光 素標記的鱗狀細胞癌抗原抗體按如下方法制備： 配制異硫氰酸熒光素的溶液，并將鱗狀細胞癌抗原抗體與所述異硫氰酸熒光素的溶液 進行混合得到混合液； 將所述混合液進行透析，得到含有異硫氰酸熒光素標記的鱗狀細胞癌抗原抗體溶液， 離心，收集上清液，稀釋，得到所述異硫氰酸熒光素標記的鱗狀細胞癌抗原抗體。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的鱗狀細胞癌抗原測定系統(tǒng)，其特征在于，所述異硫氰酸熒光 素標記的鱗狀細胞癌抗原抗體的濃度為0. 7X 10 4~0. 84X 10 3mg/mL。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的鱗狀細胞癌抗原測定系統(tǒng)，其特征在于，所述N-(氨基丁 基）-N-(異魯米諾）標記的鱗狀細胞癌抗原抗體按如下方法制備： 將N-(氨基丁基）-N-(異魯米諾）溶液、N-羥基琥珀酰亞胺溶液、1-乙基-3- (3-二甲 基氨丙基）_碳化二亞胺溶液和鱗狀細胞癌抗原抗體的溶液進行混合得到混合物，將所述 混合物于37°C下溫育lh，透析、洗脫、稀釋，得到所述N-(氨基丁基）-N-(異魯米諾）標記 的鱗狀細胞癌抗原抗體。5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的鱗狀細胞癌抗原測定系統(tǒng)，其特征在于，所述N-(氨基丁 基）-N-(異魯米諾）標記的鱗狀細胞癌抗原抗體的濃度為0. 58 X 10 4~0. 92 X 10 3mg/mL。6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的鱗狀細胞癌抗原測定系統(tǒng)，其特征在于，所述化學發(fā)光底物 包括氫氧化鈉的水溶液和雙氧水。7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的鱗狀細胞癌抗原測定系統(tǒng)，其特征在于，所述異硫氰酸熒光 素標記的鱗狀細胞癌抗原抗體、所述N-(氨基丁基）-N-(異魯米諾）標記的鱗狀細胞癌抗 原抗體及待測物按如下方法形成雙抗體夾心復合物： 將所述異硫氰酸熒光素標記的鱗狀細胞癌抗原抗體、所述N-(氨基丁基）-N-(異魯米 諾）標記的鱗狀細胞癌抗原抗體及待測物進行混合，于37°C下溫育5~40min，得到所述雙 抗體夾心復合物。8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的鱗狀細胞癌抗原測定系統(tǒng)，其特征在于，所述異硫氰酸熒光 素標記的鱗狀細胞癌抗原抗體及所述N-(氨基丁基）-N-(異魯米諾）標記的鱗狀細胞癌抗 原抗體的體積比為1:1。9. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的鱗狀細胞癌抗原測定系統(tǒng)，其特征在于，所述包被有抗異 硫氰酸熒光素抗體的磁珠與所述異硫氰酸熒光素標記的鱗狀細胞癌抗原抗體的體積比為 10 ~80:30〇10. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的鱗狀細胞癌抗原測定系統(tǒng)，其特征在于，所述異硫氰酸熒光 素標記的鱗狀細胞癌抗原抗體與所述化學發(fā)光底物的體積比為30:50~350。
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種鱗狀細胞癌抗原測定系統(tǒng)，包括包被有抗異硫氰酸熒光素抗體的磁珠、異硫氰酸熒光素標記的鱗狀細胞癌抗原抗體、N-(氨基丁基)-N-(異魯米諾)標記的鱗狀細胞癌抗原抗體、化學發(fā)光底物及熒光檢測裝置；異硫氰酸熒光素標記的鱗狀細胞癌抗原抗體、N-(氨基丁基)-N-(異魯米諾)標記的鱗狀細胞癌抗原抗體及待測物形成雙抗體夾心復合物，包被有抗異硫氰酸熒光素抗體的磁珠用于與雙抗體夾心復合物結(jié)合以形成抗原抗體復合物沉淀，抗原抗體復合物沉淀與化學發(fā)光底物發(fā)生熒光反應，熒光檢測裝置用于檢測所述熒光反應的熒光強度。該鱗狀細胞癌抗原測定系統(tǒng)不含有放射性物質(zhì)，且靈敏度較高、特異性較好、準確性較高。
【IPC分類】G01N33/574
【公開號】CN105137079
【申請?zhí)枴緾N201510435550
【發(fā)明人】田峰, 齊素文
【申請人】田峰
【公開日】2015年12月9日
【申請日】2015年7月22日