一種gc-ms/ms測(cè)定水果和蔬菜中二溴氯丙烷殘留的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種二溴氯丙烷殘留量的檢測(cè)方法，更具體地說，涉及一種采用氣相 色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（GC-MS/MS)定性定量測(cè)定水果和蔬菜中二溴氯丙烷殘留量的方法，屬于 農(nóng)藥殘留的檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 二溴氯丙烷，俗稱黑藥，學(xué)名1，2_二溴-3-氯丙烷，英文名稱1， 2-Dibrom〇-3-chloropropane(簡(jiǎn)稱：DBCP)，CAS 號(hào)為 96-12-8,分子量 236. 3328,結(jié)構(gòu)式為：
二溴氯丙烷是液態(tài)熏蒸性殺線蟲劑的活性成份。它是一種農(nóng)業(yè)上使用的土壤熏蒸劑， 適用于蔬菜、花卉、煙草、草莓等作物的苗床和溫室大棚的熏蒸，防治根結(jié)線蟲、孢囊線蟲、 短體線蟲、螺旋線蟲、紐帶線蟲、矮化線蟲等。眾多研究表明二溴氯丙烷對(duì)人體有劇毒，具有 高殘留、致畸、致不育的特點(diǎn)。在發(fā)現(xiàn)它對(duì)人類健康造成不良影響之后，此化合物于1979年 被禁止及限制使用。但仍有不法分子為取得高效的種植效果，暗地使用該農(nóng)藥，為社會(huì)留下 不少隱患。
[0003] 國(guó)內(nèi)外對(duì)于水果和蔬菜中二溴氯丙烷的檢測(cè)研究開展的較少，且主要集中在上世 紀(jì)80年代。已有的研究主要是針對(duì)花生上的二溴氯丙烷，采用氣相色譜技術(shù)進(jìn)行其殘留量 檢測(cè)，但前處理手段落后、過程繁瑣、檢測(cè)效率低，且溶劑多為毒性較大的苯、乙烷、濃硫酸 等，對(duì)人體有較大危害，不適用于果蔬基質(zhì)。另外，氣相色譜技術(shù)無法克服基質(zhì)干擾、假陽(yáng)性 等問題，不能進(jìn)行較復(fù)雜基質(zhì)中二溴氯丙烷的檢測(cè)，限制了其使用范圍。因此，迫切需要建 立一種操作簡(jiǎn)單、回收率高、重復(fù)性好、檢出限低、選擇性好的方法，適用于各種蔬菜和水果 中二溴氯丙烷的檢測(cè)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明要解決的問題是針對(duì)以上不足，提供一種GC-MS/MS測(cè)定水果和蔬菜中二 溴氯丙烷殘留的方法，克服傳統(tǒng)技術(shù)檢測(cè)步驟繁瑣、溶劑毒性較大、靈敏度低、回收率低、重 現(xiàn)性差、不適用于果蔬基質(zhì)的缺陷，采用本發(fā)明的方法，具有檢測(cè)快速簡(jiǎn)便、毒性小、靈敏度 高、選擇性強(qiáng)、重現(xiàn)性好、回收率高的優(yōu)點(diǎn)。
[0005] 為解決以上問題，本發(fā)明采取的技術(shù)方案是：一種GC-MS/MS測(cè)定水果和蔬菜中二 溴氯丙烷殘留的方法，其特征在于，包括如下步驟： (1) 提?。悍Q取粉碎好的樣品置于具塞離心管中，加入無水硫酸鎂、無水乙酸鈉和〇. 1% 醋酸/乙腈溶液，立即用玻璃棒充分?jǐn)嚢杈鶆?，均質(zhì)后離心得樣品提取液； (2) 凈化：移取樣品提取液上清液于旋蒸瓶中，旋蒸至近干，用乙腈溶解殘?jiān)?，渦旋振 蕩，溶解液轉(zhuǎn)入加有分散固相萃取劑和甲苯的離心管中，渦旋振蕩，離心，過膜得樣品液； (3)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的配制：采用樣品空白基質(zhì)提取液配制不同濃度標(biāo)準(zhǔn)工作液，然后用 標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度-色譜峰面積作標(biāo)準(zhǔn)工作曲線； (4 )氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜（GC-MS/MS )測(cè)定 將步驟（3)中的各濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作液進(jìn)行GC-MS/MS測(cè)定，用標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度-色譜峰面 積作出標(biāo)準(zhǔn)工作曲線； 在相同條件下將步驟（2)中得到的樣品液進(jìn)行GC-MS/MS測(cè)定，測(cè)得樣品中二溴氯丙烷 的色譜峰面積，帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到樣品液中二溴氯丙烷的含量，然后根據(jù)樣品液所代表的 質(zhì)量計(jì)算得到樣品中二溴氯丙烷的殘留量。
[0006] 以下是對(duì)上述技術(shù)方案的進(jìn)一步說明： 步驟（1)中樣品若為脫水蔬菜和水果，稱樣量減為正常值的十分之一，然后加水至正常 值，浸泡半小時(shí)，進(jìn)行檢測(cè)。
[0007] 步驟（2)中分散固相萃取劑由PSA和C18組成，加入量分別為150mg和200mg，甲 苯為IOOul。
[0008] 步驟（4)中色譜條件為：色譜柱HP-5MS毛細(xì)管色譜柱，30*0. 25*0. 25 ;進(jìn)樣口溫度 250°C ;載氣：He氣，不分流模式進(jìn)樣，進(jìn)樣量Iul ;恒流模式，柱流量1.0 ml/min ;程序升溫： 初溫50°C保持2min，以每分鐘5°C的速度升至180°C，保持5min，然后以每分鐘20°C的速度 升至210°C，保持5min ;傳輸線溫度250°C。質(zhì)譜條件為：離子源溫度：250°C;電離模式：EI ; 碰撞氣：高純氬；多反應(yīng)監(jiān)測(cè)掃描模式SRM，二溴氯丙烷的母離子為156. 8-157. 2,子離子分 別為 74. 8-75. 2 和 76. 8-77. 2。
[0009] 步驟（4)中測(cè)定樣品和標(biāo)準(zhǔn)工作溶液時(shí)，若兩者相應(yīng)農(nóng)藥的保留時(shí)間一致，并且在 扣除背景后的樣品質(zhì)譜圖中所選擇的離子均出現(xiàn)，且離子豐度比與標(biāo)準(zhǔn)溶液一致，則可判 斷樣品中殘留此種農(nóng)藥，若不能同時(shí)滿足上述兩個(gè)條件，則判斷不含該種農(nóng)藥。
[0010] 回收率為 86. 54-95. 25%，檢出限為 0· 76ug/kg，RSD 為 2. 44-5. 79%。
[0011] 本發(fā)明采用以上技術(shù)方案，與傳統(tǒng)技術(shù)相比，具有以下優(yōu)點(diǎn)：將分散固相萃取前處 理技術(shù)和GC-MS/MS檢測(cè)技術(shù)相結(jié)合，快速簡(jiǎn)便，采用醋酸、乙腈作為溶劑，毒性小。檢出限 低至0. 76ug/kg，所以靈敏度高?；厥章?6. 54-95. 25%，所以選擇性強(qiáng)。RSD值2. 44-5. 79%， 所以重現(xiàn)性好，有效的去除了基質(zhì)的干擾，適用于各種蔬菜水果中二溴氯丙烷的檢測(cè)。在分 散固相萃取前處理方法的凈化步驟中加入了甲苯，降低PSA對(duì)目標(biāo)物的吸附，同一基質(zhì)中 使方法的回收率由不加甲苯時(shí)的72. 03-75. 88%，提高到86. 54-94. 29%。
[0012] 下面結(jié)合附圖和實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作詳細(xì)說明。
【附圖說明】
[0013] 附圖1為添加在空白蘋果基質(zhì)中的二溴氯丙烷標(biāo)液的選擇離子色譜圖； 附圖2為空白蘋果樣品的選擇離子色譜圖； 附圖3為添加在空白蘋果基質(zhì)中的二溴氯丙烷標(biāo)液的質(zhì)譜圖。
【具體實(shí)施方式】
[0014] 現(xiàn)以以下實(shí)施實(shí)例來說明本發(fā)明，但并不是限制本發(fā)明的范圍。
[0015] 實(shí)施例1 :下面以蘋果為例，說明GC-MS/MS測(cè)定二溴氯丙烷殘留的方法，包括如下 步驟： (1)樣品前處理 稱取粉碎并充分混勻的蘋果15g，置于IOOmL塑料離心管中，加入0. 1%醋酸/乙腈溶 液15mL，無水硫酸鎂6. 0g，無水乙酸鈉 I. 5g，用玻璃棒充分?jǐn)嚢杈?，于均質(zhì)器上高速均質(zhì) 2min，10000r/min，4°C高速離心 IOmin ; 取IOmL上清液于250mL旋蒸瓶中，旋蒸至近干，準(zhǔn)確加入乙腈2mL溶解殘?jiān)?，HOOr/ min渦混2min，溶解液轉(zhuǎn)移入盛有150mg PSA、200mg C18和IOOuL甲苯的離心管中，1400r/ min禍混2min，凈化液4000r/min，離心10min后用0. 45um濾膜過濾，供GC-MS/MS分析。
[0016] (2 )氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜（GC-MS/MS )測(cè)定 將不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作液進(jìn)行GC-MS/MS測(cè)定，用標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度-色譜峰面積作出標(biāo)準(zhǔn) 工作曲線； 在相同條件下將樣品液進(jìn)行GC-MS/MS測(cè)定，測(cè)得樣品中二溴氯丙烷的色譜峰面積，帶 入標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到樣品液中二溴氯丙烷的含量，然后根據(jù)樣品液所代表的質(zhì)量計(jì)算得到樣 品中^?漠氣丙烷的殘留量。
[0017] (3)色譜條件和質(zhì)譜條件 色譜條件： 色譜柱HP-5MS毛細(xì)管色譜柱，30*0. 25*0. 25 ;進(jìn)樣口溫度250°C ;載氣：He氣，不分流 模式進(jìn)樣，進(jìn)樣量IuL ;恒流模式，柱流量1.0 mL/min ;程序升溫：初溫50°C保持2min，以每 分鐘5°C的速度升至180°C，保持5min，然后以每分鐘20°C的速度升至210°C，保持5min ;傳 輸線溫度250 °C。
[0018] 質(zhì)譜條件： 離子源溫度：250°C ;電離模式：EI ;碰撞氣：高純氬；多反應(yīng)監(jiān)測(cè)掃描模式SRM，二溴氯 丙烷的母離子為156. 8-157. 2,子離子分別為74. 8-75. 2和76. 8-77. 2。
[0019] 表1MRM檢測(cè)參數(shù)
*為定莖尚子對(duì)。
[0020] (4)基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作曲線 分別用蘋果空白基質(zhì)提取液配制標(biāo)準(zhǔn)工作液各點(diǎn)：〇. 02、0. 05、0. 1、0. 2、0. 5ug/mL，按 照實(shí)驗(yàn)條件GC-MS/MS測(cè)定，用標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度-色譜峰面積作出標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，求出回歸方 程如表2。
[0021] 表2蘋果空白基質(zhì)中二溴氯丙烷的標(biāo)準(zhǔn)曲線
加標(biāo)回收率和重復(fù)性： 在不含二溴氯丙烷的空白蘋果樣品中加入50、100