寬體金線蛭油酸的氣相色譜指紋圖譜檢測方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種寬體金線蛭油酸的氣相色譜指紋圖譜檢測方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 水輕，俗稱為螞幢，其基源是水輕科動物寬體金錢輕（Whitmania pigra Whitman)、日本醫(yī)輕（Hirudo nipponica Whitman)或柳葉媽幢（Whitmania acranulata Whitman)的干燥全體，在中國藥典（2010)中有記載[1]，其中寬體金線輕（Whitmania Pigra)是目前國內(nèi)中藥材市場上銷售的主要商品，其味苦咸腥、性平，有小毒，具有破血、逐 瘀、通經(jīng)之功效，廣泛被應(yīng)用于臨床治療。野生寬體金線蛭廣泛分布于長江中下游地區(qū)及山 東、河北、東北等地，歷史上是以自然捕撈為主作為藥材商品。近年來，以水蛭為原料的藥品 及保健品日漸增多，但因農(nóng)藥、化肥等濫用，及工農(nóng)業(yè)"三廢"對環(huán)境的污染，野生自然資源 銳減，隨著水蛭藥用價值的深度開發(fā)，其市場需求量增大。因此，有關(guān)寬體金線蛭的人工養(yǎng) 殖探索逐步展開，規(guī)模也逐年增大。然而，不同養(yǎng)殖產(chǎn)地的水蛭藥材質(zhì)量差異較大，嚴(yán)重影 響其臨床療效[2]。寬體金線蛭是一種非吸血型水蛭，體內(nèi)不含天然的水蛭素。迄今為止，有 關(guān)寬體金線蛭的有效藥用成分研究報道比較少，特別是抗凝物質(zhì)的序列至今未見報道[4]。 呂丹等[5]對山東微山湖產(chǎn)的寬體金錢蛭的生化成分進(jìn)行了分析，認(rèn)為其獨特的脂肪酸和氨 基酸組成特點或許是其高藥用價值的重要依據(jù)之一。
[0003] 油酸屬于單不飽和脂肪酸，對血液總膽固醇和有害膽固醇有明顯降低的作用， 卻不降低有益膽固醇，因此在預(yù)防心血管疾病方面發(fā)揮有效作用。寬體金線蛭中油酸 (18 : 1)的含量在脂肪酸中的含量次高。目前對不同產(chǎn)地或中藥材市場的寬體金線蛭的優(yōu) 劣沒有一個有效的評判方法，色譜指紋圖譜可以表征物質(zhì)包含化學(xué)成分的綜合信息，可以 通過圖譜特性判斷樣品質(zhì)量優(yōu)劣。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的在于提供了一種寬體金線蛭油酸的氣相色譜指紋圖譜檢測方法，獲 得不同產(chǎn)地或中藥材市場的寬體金線蛭油酸的氣相色相指紋圖譜，圖譜可以表征物質(zhì)包含 化學(xué)成分的綜合信息，可以根據(jù)圖譜特性來判斷樣品質(zhì)量優(yōu)劣。對寬體金線蛭的優(yōu)劣提供 一個有效的評判方法寬體，對金線蛭的人工養(yǎng)殖和藥材質(zhì)量評價體系的建立提供客觀參 考。
[0005] 本發(fā)明提供的技術(shù)方案為：
[0006] -種寬體金線蛭油酸的氣相色譜指紋圖譜檢測方法，該方法包括以下步驟：
[0007] a)對照品溶液制備：取600mg自制現(xiàn)榨花生油，加15%三氟化硼甲醇溶液進(jìn)行甲 脂化，再將脂化后的溶液置于萃取儀中，用加入萃取劑萃取30min，即得對照品溶液；
[0008] b)待測溶液制備：稱取寬體金線蛭油酸干樣品5g，加入IOOmg焦性沒食子酸、2mL 十一碳酸甘油三酯內(nèi)標(biāo)溶液、2mL乙醇和IOmL鹽酸溶液混合均勻，再進(jìn)行加熱水解得到水 解溶液，將水解溶液置于分液漏斗中，加入提取溶劑振搖后靜置15min，然后揮發(fā)提取溶劑， 得到寬體金線蛭油酸的脂肪提取物，將得到的寬體金線蛭油酸的脂肪提取物加三氟化硼溶 液進(jìn)行脂化，再將脂化后的溶液置于萃取儀中，用萃取劑萃取30min，即得待測溶液；
[0009] c)氣相色譜指紋圖譜測定：設(shè)定氣相色譜條件，取1 μ L步驟a)中的對照品溶液 置于氣相色譜儀中，在設(shè)定的氣相色譜條件下測定對照品氣相色譜指紋圖譜，取1 μ L步驟 b)中待測溶液照品溶液置于氣相色譜儀中，在同樣的氣相色譜條件下測定待測品氣相色譜 指紋圖譜。
[0010] 優(yōu)選的是，在所述的寬體金線蛭油酸的氣相色譜指紋圖譜檢測方法中，所述步驟 a)中甲脂化的過程中要進(jìn)行加熱，加熱溫度為80~85°C。
[0011] 優(yōu)選的是，在所述的寬體金線蛭油酸的氣相色譜指紋圖譜檢測方法中，所述步驟 a) 中的萃取劑為正庚烷。
[0012] 優(yōu)選的是，在所述的寬體金線蛭油酸的氣相色譜指紋圖譜檢測方法中，所述步驟 b) 中加熱水解的溫度為70~80°C。
[0013] 優(yōu)選的是，在所述的寬體金線蛭油酸的氣相色譜指紋圖譜檢測方法中，所述步驟 b) 中揮發(fā)提取溶劑為乙醚石油醚混合液，萃取劑為正庚烷。
[0014] 優(yōu)選的是，在所述的寬體金線蛭油酸的氣相色譜指紋圖譜檢測方法中，所述步驟 c) 中氣相色譜條件為：色譜分析柱為DB-WAX(30mX0. 32mmX0. 25μπι);載氣為氮氣，其 壓強(qiáng)為40KPa，氫氣為30KPa，空氣為400KPa ;氣化室溫度為270 °C ;檢測器（FID)溫度為 280°C，升溫程序：柱溫130°C，保持5min，以3°C /min速率升至230°C，保持lOmin。
[0015] 本發(fā)明提供一種寬體金線蛭油酸的氣相色譜指紋圖譜檢測方法，通過氣相色相指 紋圖譜可以判斷樣品質(zhì)量優(yōu)劣。對寬體金線蛭的優(yōu)劣提供一個有效的評判方法，對金線蛭 的人工養(yǎng)殖和藥材質(zhì)量評價體系的建立提供客觀參考。
【附圖說明】
[0016] 圖1為對照品氣相色譜指紋圖譜；
[0017] 圖2為10批寬體金線蛭油酸氣相色譜指紋圖譜重疊圖；
[0018] 圖3為寬體金線蛭油酸氣相對照色譜指紋圖譜。
【具體實施方式】
[0019] 下面結(jié)合實施例對本發(fā)明作進(jìn)一步描述，但不應(yīng)以此限制本發(fā)明的保護(hù)范圍。
[0020] 實施例選用用寬體金線蛭于2013年7月-8月采自全國各地養(yǎng)殖基地或者中藥材 市場，米集樣品?目息如下表。
[0021] CN 105181845 A 說明書 3/3 頁
[0022] 從圖2中可以看出，不同產(chǎn)地的10批寬體金線蛭油酸氣相色譜指紋圖譜中雖然出 現(xiàn)了相應(yīng)的色譜峰，但是峰面積比值有所不同，這說明不同產(chǎn)地間因成分相對含量不同所 表現(xiàn)出的質(zhì)量水平也不盡相同。因此，中藥制劑中的原藥材需要注意產(chǎn)地的來源，并確保提 取工藝技術(shù)相同，才能保證中藥制劑質(zhì)量的穩(wěn)定可控。
[0023] 盡管發(fā)明的實施方案已公開如上，但其并不僅僅限于說明書和實施方式中所列運(yùn) 用，它完全可以被適用于各種適合本發(fā)明的領(lǐng)域，對于熟悉本領(lǐng)域的人員而言，可容易地實 現(xiàn)另外的修改，因此在不背離權(quán)利要求及等同范圍所限定的一般概念下，本發(fā)明并不限于 特定的細(xì)節(jié)和這里示出與描述的配比示例。
【主權(quán)項】
1. 一種寬體金線蛭油酸的氣相色譜指紋圖譜檢測方法，其特征在于，該方法包括以下 步驟： a) 對照品溶液制備：取600mg自制現(xiàn)榨花生油，加15%三氟化硼甲醇溶液進(jìn)行甲脂化， 再將脂化后的溶液置于萃取儀中，用加入萃取劑萃取30min，即得對照品溶液； b) 待測溶液制備：稱取寬體金線蛭油酸干樣品5g，加入IOOmg焦性沒食子酸、2mL十一 碳酸甘油三酯內(nèi)標(biāo)溶液、2mL乙醇和IOmL鹽酸溶液混合均勻，再進(jìn)行加熱水解得到水解溶 液，將水解溶液置于分液漏斗中，加入提取溶劑振搖后靜置15min，然后揮發(fā)提取溶劑，得到 寬體金線蛭油酸的脂肪提取物，將得到的寬體金線蛭油酸的脂肪提取物加三氟化硼溶液進(jìn) 行脂化，再將脂化后的溶液置于萃取儀中，用萃取劑萃取30min，即得待測溶液； c) 氣相色譜指紋圖譜測定：設(shè)定氣相色譜條件，取IyL步驟a)中的對照品溶液置于 氣相色譜儀中，在設(shè)定的氣相色譜條件下測定對照品氣相色譜指紋圖譜，取IyL步驟b)中 待測溶液照品溶液置于氣相色譜儀中，在同樣的氣相色譜條件下測定待測品氣相色譜指紋 圖譜。2. 如權(quán)利要求1所述的寬體金線蛭油酸的氣相色譜指紋圖譜檢測方法，其特征在于， 所述步驟a)中甲脂化的過程中要進(jìn)行加熱，加熱溫度為80~85°C。3. 如權(quán)利要求1所述的寬體金線蛭油酸的氣相色譜指紋圖譜檢測方法，其特征在于， 所述步驟a)中的萃取劑為正庚烷。4. 如權(quán)利要求1所述的寬體金線蛭油酸的氣相色譜指紋圖譜檢測方法，其特征在于， 所述步驟b)中加熱水解的溫度為70~80°C。5. 如權(quán)利要求1所述的寬體金線蛭油酸的氣相色譜指紋圖譜檢測方法，其特征在于， 所述步驟b)中揮發(fā)提取溶劑為乙醚石油醚混合液，萃取劑為正庚烷。6. 如權(quán)利要求1所述的寬體金線蛭油酸的氣相色譜指紋圖譜檢測方法，其特征在于， 所述步驟〇)中氣相色譜條件為：色譜分析柱為08-1纟1(3011^0.32臟\0.25^111) ;載氣為氮 氣，其壓強(qiáng)為40KPa，氫氣為30KPa，空氣為400KPa;氣化室溫度為270°C;檢測器（FID)溫度 為280°C，升溫程序：柱溫130°C，保持5min，以3°C/min速率升至230°C，保持lOmin。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種寬體金線蛭油酸的氣相色譜指紋圖譜檢測方法，包括以下步驟：a)對照品溶液制備：取自制現(xiàn)榨花生油，加15％三氟化硼甲醇溶液進(jìn)行甲脂化，萃取30min，即得對照品溶液；b)待測溶液制備：稱取寬體金線蛭油酸干樣品，處理脂肪后得到其脂肪提取物，加三氟化硼溶液進(jìn)行脂化，萃取30min，即得待測溶液；c)氣相色譜指紋圖譜測定：設(shè)定氣相色譜條件，取1μL對照品溶液和1μL待測溶液照品溶液置于氣相色譜儀中測定氣相色譜指紋圖譜。采用本發(fā)明獲得不同產(chǎn)地或中藥材市場的寬體金線蛭油酸的氣相色相指紋圖譜，對寬體金線蛭的優(yōu)劣提供一個有效的評判方法，對金線蛭的人工養(yǎng)殖和藥材質(zhì)量評價體系的建立提供客觀參考。
【IPC分類】G01N30/02, G01N30/06
【公開號】CN105181845
【申請?zhí)枴緾N201510615041
【發(fā)明人】黃勇, 繆劍華, 張月云, 韋范, 李力, 趙成堅
【申請人】廣西壯族自治區(qū)藥用植物園
【公開日】2015年12月23日
【申請日】2015年9月24日