一種植物油中污染物快速免疫檢測方法和應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于食品安全檢測領(lǐng)域，具體設(shè)及一種植物油中污染物快速免疫檢測方法 和應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 植物油中的污染物主要來自于原材料、生產(chǎn)過程、包裝材料中的污染。例如植物 油中的黃曲霉毒素、玉米赤霉締酬等真菌毒素W及農(nóng)藥殘留主要來自于受污染的棒油原 料；植物油中的苯并（a)巧主要來自于棒油工序的原料炒制過程；而鄰苯二甲酸醋類化合 物、雙酪A等主要來自于生產(chǎn)過程的塑料器皿或塑料包裝材料。我國現(xiàn)行食用油國家標(biāo)準(zhǔn) 《食用植物油衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》（GB2716-2005)規(guī)定花生油、玉米胚油黃曲霉毒素B1殘留限量為 20yg/kg，其它油中黃曲霉毒素B1殘留限量為20yg/kg;苯并（a)巧殘留限量為lOyg/ kg;農(nóng)藥殘留按照GB2763的規(guī)定執(zhí)行。
[0003] 現(xiàn)有檢測植物油中污染物的方法必須經(jīng)過一個比較復(fù)雜的樣品前處理過程。典 型步驟包括：1)用極性有機(jī)溶劑與植物油振蕩混合；2)靜置或離屯、，使極性有機(jī)溶劑與植 物油分離；3)取極性有機(jī)溶劑相，加入非極性有機(jī)溶劑，除去其中殘余油脂；4)用旋轉(zhuǎn)蒸 發(fā)儀、或氮吹儀將除去油脂的極性有機(jī)溶劑相蒸干或吹干；5)用水、緩沖溶液、或有機(jī)試劑 將殘余物復(fù)溶，用色譜或免疫方法、或其它方法進(jìn)行檢測。顯然，現(xiàn)有植物油中污染物檢測 方法存在操作復(fù)雜、樣品處理時間長、需要用大量有機(jī)溶劑、需要配套樣品前處理儀器等缺 陷，難W實(shí)現(xiàn)現(xiàn)場快速檢測。
[0004] 直接在油水混合體系中進(jìn)行免疫檢測的研究至今未見報道。其原因在于在油水混 合體系中，非極性的油脂會與抗體蛋白或目標(biāo)化合物的非極性部分結(jié)合，從而改變蛋白構(gòu) 象，干擾抗原、抗體反應(yīng)。
[0005] 相關(guān)文獻(xiàn)可參見：
[0006] 1)D.Zhang,P.Li,Y.Yang,Q.Zhang,W.Zhang,Z.XiaoandX.Ding,Talan ta, 2011,85, 736-742.
[0007] 2)Bao L. ;Liang C. Jrucksess M. W. ;Xu Y. ;Lv N. ;Wu Z. ;Jing P. ;Rry F. S. J AOAC Int 2012,95化），1689-1700.
[000引扣鮑蕾；呂寧點(diǎn)振興；靜平；許艷麗注彥斐；王麗；王江；果旗；王雄.糧食科技 與經(jīng)濟(jì) 2012 (05)，16-18.
[0009] 4)《食品中黃曲霉毒素的測定免疫親和層析凈化高效液相色譜法和巧光光度法》 (GB/T18979-2007)
[0010] 5)《食品中玉米赤霉締酬的測定免疫親和層析凈化高效液相色譜法》（GB/T 23504-2009)

【發(fā)明內(nèi)容】

[0011] 因此，本發(fā)明的目的是提供一種不需要分離油相、直接用免疫試劑在油水混合物 體系中快速檢測食用油中污染物的檢測方法和應(yīng)用，該檢測方法是通過對包被在納米金、 量子點(diǎn)、巧光微球、磁性微球等標(biāo)記材料上的污染物抗體進(jìn)行親水性保護(hù)實(shí)現(xiàn)的。所謂對抗 體進(jìn)行親水性保護(hù)，是指將抗體按一定量包被在上述標(biāo)記材料上W后，在材料上再結(jié)合一 層親水性聚合物，使抗體處于水化層保護(hù)中。本發(fā)明可W實(shí)現(xiàn)在油水混合物中免疫檢測的 原因在于1)標(biāo)記材料表面的水化層阻止了油脂靠近抗體，從而保護(hù)了抗體活性；2)油脂中 的污染物根據(jù)分配定律，會有一部分通過擴(kuò)散進(jìn)入水相，在油水充分混合的條件下，很快達(dá) 到平衡，在水相中的污染物會擴(kuò)散到抗體表面，與抗體發(fā)生免疫反應(yīng)。
[0012] 與現(xiàn)有植物油中污染物檢測方法相比，本方法操作更簡單、檢測更方便、檢測時間 更短，無需有機(jī)溶劑、經(jīng)濟(jì)環(huán)保，無需其他輔助樣品處理設(shè)備，適合現(xiàn)場檢測。
[0013] 針對上述目的，本發(fā)明提供的技術(shù)方案如下：
[0014] 一方面，本發(fā)明提供一種植物油中污染物檢測方法，包括W下步驟：
[0015] 1)根據(jù)污染物在植物油中的殘留限量，按適當(dāng)?shù)闹亓矿w積比將植物油與純凈水或 提取溶液混合；
[0016] 2)然后，劇烈振蕩10-60秒，使植物油和純凈水或提取溶液充分混合均勻；
[0017] 3)再然后，直接將混合液滴到免疫層析檢測卡的加樣孔上，或直接用免疫層析檢 測試紙薩取混合液，反應(yīng)3-5分鐘。
[0018] 4)最后，直接觀察檢測卡或檢測試紙T線和C線出現(xiàn)情況，定性判斷植物油中污染 物是否超標(biāo)；也可W利用檢測卡/檢測試紙讀數(shù)儀，根據(jù)T線和C線顯色情況，定量檢測植 物油中污染物殘留量。
[0019] 另一方面，本發(fā)明還提供一種本發(fā)明在用于植物油中污染物殘留檢測中的應(yīng)用。
[0020] 優(yōu)選地，所述植物油中污染物殘留檢測包括植物油中黃曲霉毒素、苯并（a)巧、 農(nóng)藥殘留、鄰苯二甲酸醋類化合物、玉米赤霉締酬、雙酪A、嘔吐毒素、髓曲霉毒素、伏馬毒素 等的檢測。
[0021] 在
【發(fā)明內(nèi)容】
中引入了一系列簡化形式的概念，運(yùn)將在【具體實(shí)施方式】部分中進(jìn)一步 詳細(xì)說明。本
【發(fā)明內(nèi)容】
部分并不意味著要試圖限定出所要求保護(hù)的技術(shù)方案的關(guān)鍵特征和 必要技術(shù)特征，更不意味著試圖確定所要求保護(hù)的技術(shù)方案的保護(hù)范圍。
[002引 W下結(jié)合附圖，詳細(xì)說明本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)和特征。
【附圖說明】
[0023] 本發(fā)明的下列附圖在此作為本發(fā)明的一部分用于理解本發(fā)明。附圖中示出了本發(fā) 明的實(shí)施方式及其描述，用來解釋本發(fā)明的原理。在附圖中，
[0024]圖1為抗體親和性保護(hù)的原理示意圖；其中，1為納米金、量子點(diǎn)、巧光微球、磁性 微球等標(biāo)記材料，2為污染物抗體，3為親水性聚合物，4為由親水性聚合物形成的標(biāo)記性材 料表面水化層。
[0025] 圖2為免疫層析檢測卡結(jié)構(gòu)示意圖；其中，5為樣品墊，6為金標(biāo)墊，7為T線，8為 C線，9為塑料底板，10為硝酸纖維素膜，11為吸水紙
[002引圖3為檢測植物油中苯并（a)巧時，當(dāng)油水重量體積比為1:4時，本發(fā)明檢測方 法對植物油中苯并（a)巧的檢測標(biāo)準(zhǔn)曲線。圖中橫坐標(biāo)為苯并（a)巧濃度（yg/Kg)，縱 坐標(biāo)為T線相對巧光值燈％)的自然對數(shù)。
【具體實(shí)施方式】
[0027] 在下文的描述中，提供了大量的細(xì)節(jié)W便能夠徹底地理解本發(fā)明。然而，本領(lǐng)域技 術(shù)人員可W了解，如下描述僅設(shè)及本發(fā)明的較佳實(shí)施例，本發(fā)明可W無需一個或多個運(yùn)樣 的細(xì)節(jié)而得W實(shí)施。此外，為了避免與本發(fā)明發(fā)生混淆，對于本領(lǐng)域公知的一些技術(shù)特征未 進(jìn)行描述。
[0028] 實(shí)施例1
[0029] 1)取平均粒徑為25皿的納米金顆粒的溶液，用0.Imol/L的碳酸鐘溶液調(diào)節(jié)抑 值為7. 5,向溶液中加入濃度為3yg/mL的黃曲霉毒素B1單克隆抗體，反應(yīng)30分鐘后，加 入含親水性聚合物PV- 3的封閉緩沖液，繼續(xù)反應(yīng)30分鐘。標(biāo)記與封閉完成后，如附圖 1所示，納米金表面形成保護(hù)抗體的水化層。經(jīng)4°C、12000r/min離屯、30分鐘后，去除上 清，然后用納米金稀釋液將標(biāo)記有抗體的納米金重懸。用噴金劃膜儀將重懸后的納米金W 1. 5yL/cm速度噴到玻璃纖維素膜上；然后室溫真空干燥20小時，制成金標(biāo)墊；用噴金劃膜 儀W〇.8iiL/cm速度將AFB1-BSA偶聯(lián)蛋白（0.04mg/mL)及羊抗鼠抗體（0. 2mg/mL)分別 包被在硝酸纖維素膜的T線和C線位置，37°C干燥4小時，制成抗原包被膜；將玻璃纖維素 膜浸在樣品墊處理液（溶液組成：〇. 1MpH8. 0TRIS-HCL緩沖液，含0. 5%BSA，2%化。'一 35, 0. 03%Proclin-300)中，2秒鐘后取出，37°C干燥4小時，制成樣品墊；按照本領(lǐng)域公知 的方法，將金標(biāo)墊、抗原包被膜、樣品墊組裝成黃曲霉毒素B1免疫層析檢測卡。室溫保存?zhèn)?用。
[0030] 2)按1:1的重量體積比將植物油與純凈水混合。
[0031] 3)然后，劇烈振蕩10-60秒，使植物油和純凈水充分混合均勻；
[0032] 4)再然后，直接將混合液滴到黃曲霉毒素B1免疫層析檢測卡的加樣孔上，反應(yīng)3 分鐘。
[0033] 5)最后，直接觀察如圖2所示檢測卡T線和C線出現(xiàn)情況，當(dāng)樣品中黃曲霉毒素 B1含量小于1. 5yg/Kg時，檢測卡T線、C線位置均有紅色金線出現(xiàn)；當(dāng)樣品中黃曲霉毒素 B1含量大于1. 5yg/Kg時，檢測卡T線位置沒有紅色金線出現(xiàn)。因此，可W根據(jù)檢測卡T線 是否出現(xiàn)判定樣品中黃曲霉毒素含量是否大于1. 5yg/Kg。
[0034] 實(shí)施例2
[0035] 1)黃曲霉毒素B1免疫層析檢測卡制備方法同實(shí)施例1
[0036] 2)按1:4的重量體積比將不同植物油樣品與純凈水混合。
[0037] 3)然后，劇烈振蕩10-60秒，使植物油和純凈水充分混合均勻；
[0038]4)再然后，直接將混合液滴到黃曲霉毒素B1免疫層析檢測卡的加樣孔上，反應(yīng)3 分鐘。
[003引 W最后，直接觀察檢測卡T線和C線出現(xiàn)情況，T線位置出現(xiàn)紅色金線，記為陰性， 即油樣中黃曲霉毒素B1含量小于2yg/Kg，T線位置不出現(xiàn)紅色金線，記為陽性，即油樣中 黃曲霉毒素B1含量大于2yg/Kg。
[0040] 6)同時，利用國標(biāo)方法《食品中黃曲