一種用于通關(guān)藤的檢測方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于中藥檢測的技術(shù)領(lǐng)域，具體的涉及一種用于通關(guān)藤的檢測方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 通關(guān)藤為蘿蘑科植物，又名烏骨藤等，始載于《滇南本草》，藥材標(biāo)準(zhǔn)收載于1974 年版《云南省藥品標(biāo)準(zhǔn)》、1977年版《中國藥典》及2010年版《中國藥典》。目前檢測通關(guān) 藤的方法主要包括性狀鑒定、顯微鑒定、薄層鑒定、理化鑒定及含量測定等方法。含量測定 主要通過分光光度法或者如《通關(guān)藤藥材及制劑指紋圖譜的建立方法及應(yīng)用》（專利申請 號CN201410119474. 8) -文中采用HPLC-ELSD法測定通關(guān)藤中留體皂苷含量，還有《通關(guān) 藤藥材及制劑指紋圖譜的建立方法及應(yīng)用》（專利申請?zhí)朇N201310684459.3)提到的采用 HPLC-ELSD法測定通關(guān)藤中酚酸類含量。
[0003] 專利《一種烏骨藤皂苷的檢測方法》（專利申請?zhí)朇N201110232427. 0)認(rèn)為："烏 骨藤皂苷在紫外光區(qū)沒有顯著的特征吸收，因此很難對其中化學(xué)成分含量進行精密準(zhǔn)確的 測定"，"選用紫外檢測器，由于烏骨藤皂苷在紫外光區(qū)無特征吸收，因此選用該方法檢測必 定會有專屬性差、誤差大的缺點。"
[0004] 由上述可知現(xiàn)有技術(shù)中所存在的缺陷如下：
[0005] 1、現(xiàn)有技術(shù)中僅僅是通過單一的某成分，如綠原酸或通關(guān)藤苷H中的一個單一成 分為指標(biāo)來鑒別和控制通關(guān)藤含量，這樣對于通關(guān)藤含量的測定準(zhǔn)確性、穩(wěn)定性以及靈敏 度均不能達到最佳的效果，從而不能很好控制藥材及制劑的質(zhì)量；
[0006] 2、現(xiàn)有技術(shù)認(rèn)為采用HPLC-UV檢測通關(guān)藤苷H存在專屬性差，誤差大的缺陷，因而 均不采用HPLC-UV的檢測方法，而是選用靈敏度與檢測限度遠小于HPLC-UV的HPLC-ELSD 方法進行檢測；
[0007] 3、現(xiàn)有技術(shù)檢測的對象為藥材或者制劑，尚未有一種檢測方法均適用于藥材、水 提取物和制劑中通關(guān)藤含量的檢測。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008] 本發(fā)明的目的在于針對上述存在的缺陷而提供一種用于通關(guān)藤的檢測方法，該檢 測方法對通關(guān)藤中綠原酸、通關(guān)藤苷H同時進行鑒別，同時檢測出兩種成分的含量，并建立 以綠原酸、通關(guān)藤苷H為參照物的特征指紋圖譜，可以同時應(yīng)用于藥材、水提取物、消癌平 制劑，穩(wěn)定性好，易操作，一次性檢測兩種成分，專屬性強，節(jié)約檢測時間，大大提高檢測精 準(zhǔn)度和靈敏度。
[0009] 本發(fā)明的技術(shù)方案為：一種用于通關(guān)藤的檢測方法，包括以下步驟：
[0010] (1)供試品溶液、對照品溶液與對照藥材溶液的制備：分別制備供試品溶液、2~ 6mg/ml綠原酸對照品溶液、0. 1~0. 5mg/ml通關(guān)藤苷H對照品溶液和通關(guān)藤對照藥材溶 液；
[0011] (2)綠原酸、通關(guān)藤苷H的鑒別：分別取供試品溶液、綠原酸對照品溶液、通關(guān)藤苷 H對照品溶液、通關(guān)藤對照藥材溶液10ul，點于同一硅膠G薄層板，然后配制展開劑，取展開 劑的上層溶液置于薄層板上；靜置待上層溶液展開，將薄層板取出并晾干；待薄層板晾干 后將薄層板置于紫外光燈下，在波長365nm的條件下進行檢視，首先供試品溶液的色譜分 別與綠原酸對照品溶液、通關(guān)藤對照藥材溶液的色譜在相應(yīng)位置上顯相同顏色的熒光斑點 或主斑點；然后利用質(zhì)量濃度為5%的硫酸香草醛試液顯色，加熱至斑點清晰，供試品溶液 的色譜分別與通關(guān)藤苷H對照品溶液、通關(guān)藤對照藥材溶液的色譜在相應(yīng)位置上顯相同顏 色的斑點或主斑點；
[0012] (3)綠原酸、通關(guān)藤苷H的含量檢測：取供試品溶液、綠原酸對照品溶液和通關(guān)藤 苷H對照品溶液采用HPLC-UV進行檢測；其中流動相為乙腈和0. 5%磷酸水溶液，檢測波長 為 190 ~220nm ;
[0013] (4)建立以綠原酸、通關(guān)藤苷H為參照物的特征指紋圖譜。
[0014] 所述步驟⑵中的展開劑由乙酸丁酯、甲酸和水組成。
[0015] 所述乙酸丁酯：甲酸：水的體積比為14:5:5。
[0016] 所述步驟⑶中的檢測波長為201nm。
[0017] 所述步驟（3)中采用的HPLC-UV填充劑為十八烷基硅烷鍵合硅膠。
[0018] 所述步驟⑶中采用流動相梯度洗脫，其中梯度改變流動相比例的時間點以及該 時間點設(shè)定的乙腈與〇. 5%磷酸水溶液的體積比如下：0min時，乙腈與0. 5%磷酸水溶液 的體積比為15:85 ;5min時，乙腈與0. 5%磷酸水溶液的體積比為8:92 ;50min時，乙腈與 0. 5%磷酸水溶液的體積比為80:20 ;55min時，乙腈與0. 5%磷酸水溶液的體積比為15:85 ; 60min時，乙腈與0. 5%磷酸水溶液的體積比為15:85。
[0019] 所述檢測方法應(yīng)用于通關(guān)藤藥材、通關(guān)藤水提取物和消癌平制劑。
[0020] 本發(fā)明的有益效果為：本發(fā)明所述用于通關(guān)藤的檢測方法（1) 一次性檢測綠原 酸、通關(guān)藤苷H兩種成分，專屬性強，檢測方便，與現(xiàn)有技術(shù)相比簡便省時，節(jié)約檢測成本與 人工，大幅度提尚檢測分析能力，同時檢測兩種指標(biāo)成分，更能有效控制廣品的質(zhì)量，提尚 檢測準(zhǔn)確度；（2)采用HPLC-UV法檢測，沒有出現(xiàn)專屬性差，誤差大的缺陷，同時提高了檢測 的靈敏度與檢測限度；(3)該檢測方法可以同時檢測通關(guān)藤藥材、通關(guān)藤水提取物和通關(guān) 藤制劑，能更好的控制整個生產(chǎn)環(huán)節(jié)的質(zhì)量；(4)現(xiàn)有技術(shù)中綠原酸都在327nm左右檢測， 而本發(fā)明突破了固有觀念，在190~220nm處進行檢測，效果良好。
【附圖說明】
[0021] 圖1為本發(fā)明【具體實施方式】中綠原酸鑒別圖譜，其中1為通關(guān)藤空白樣品、2為綠 原酸對照品、3為通關(guān)藤苷H對照品、4為通關(guān)藤對照藥材、5為通關(guān)藤藥材樣品、6為通關(guān)藤 提取物樣品、7為消癌平片樣品、8為消癌平膠囊樣品、9為消癌平顆粒樣品、10為消癌平散 樣品、11為消癌平丸樣品、12為消癌平糖漿樣品、13為消癌平口服液樣品、14為消癌平注射 液樣品。
[0022] 圖2為本發(fā)明【具體實施方式】中通關(guān)藤苷H、通關(guān)藤對照藥材鑒別圖譜，其中1為通 關(guān)藤空白樣品、2為綠原酸對照品、3為通關(guān)藤苷H對照品、4為通關(guān)藤對照藥材、5為通關(guān)藤 藥材樣品、6為通關(guān)藤提取物樣品、7為消癌平片樣品、8為消癌平膠囊樣品、9為消癌平顆粒 樣品、10為消癌平散樣品、11為消癌平丸樣品、12為消癌平糖漿樣品、13為消癌平口服液樣 品、14為消癌平注射液樣品。
[0023] 圖3為本發(fā)明【具體實施方式】中甲醇溶劑峰圖譜。
[0024] 圖4為本發(fā)明【具體實施方式】中對照品圖譜，S1為綠原酸、S2為通關(guān)藤苷H。
[0025] 圖5為本發(fā)明【具體實施方式】中原酸對照品圖譜，S1為綠原酸。
[0026] 圖6為本發(fā)明【具體實施方式】中通關(guān)藤提取物指紋圖譜（Sl、S2為對照峰）。
[0027] 圖7為本發(fā)明【具體實施方式】中通關(guān)藤藥材指紋圖譜。
[0028] 圖8為本發(fā)明【具體實施方式】中消癌平片劑指紋圖譜。
[0029] 圖9為本發(fā)明【具體實施方式】中消癌平膠囊劑指紋圖譜。
[0030] 圖10為本發(fā)明【具體實施方式】中消癌平顆粒劑指紋圖譜。
[0031] 圖11為本發(fā)明【具體實施方式】中消癌平散劑指紋圖譜。
[0032] 圖12為本發(fā)明【具體實施方式】中消癌平丸劑指紋圖譜。
[0033] 圖13為本發(fā)明【具體實施方式】中消癌平糖漿劑指紋圖譜。
[0034] 圖14為本發(fā)明【具體實施方式】中消癌平口服液指紋圖譜。
[0035] 圖15為本發(fā)明【具體實施方式】中消癌平注射液指紋圖譜。
[0036] 圖16為本發(fā)明【具體實施方式】中綠原酸標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。
[0037] 圖17為本發(fā)明【具體實施方式】中通關(guān)藤苷H標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。
[0038] 圖18為本發(fā)明【具體實施方式】中展開劑為氯仿-丙酮-甲醇的通關(guān)藤苷H鑒別圖 譜，其中1為通關(guān)藤苷H對照品，2為空白供試品，3為通關(guān)藤對照藥材，4為通關(guān)藤藥材，5 為通關(guān)藤提取物，6為消癌平片。
[0039] 圖19為本發(fā)明【具體實施方式】中展開劑為氯仿-甲醇的通關(guān)藤苷H鑒別圖譜，其中 1為通關(guān)藤苷H對照品，2為通關(guān)藤藥材，3為通關(guān)藤提取物，4為消癌平片。
[0040] 圖20為本發(fā)明【具體實施方式】中展開劑為氯仿-甲醇-水的通關(guān)藤苷H鑒別圖譜， 其中1為通關(guān)藤苷H對照品（5ul)，2為通關(guān)藤苷H對照品（10ul)，3為通關(guān)藤藥材，4為通 關(guān)藤提取物，5為消癌平片。
[0041] 圖21為本發(fā)明【具體實施方式】中恒速洗脫條件下的通關(guān)藤圖譜。
[0042] 圖22為本發(fā)明【具體實施方式