一種豆芽中尿素及總氨氮的檢測方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明化學(xué)領(lǐng)域，特別是涉及一種豆芽中尿素及總氨氮檢測方法。
【背景技術(shù)】
[0002]豆芽的正常生產(chǎn)周期多為11?15天左右，可一些商販為了提高豆芽產(chǎn)量，縮短生產(chǎn)周期，往豆芽上噴灑尿素、硝酸銨、硫酸銨和無根劑等化肥和激素催生。尿素是人體正常新陳代謝的產(chǎn)物，是一種含氮的小分子物質(zhì)，會隨著人體排尿而排出，少量尿素并不會對人體造成危害，當(dāng)尿素大量聚集而不能排出時，會對人體造成損傷，主要是使人體的體內(nèi)電解質(zhì)平衡被破壞，從而產(chǎn)生疾病，即尿毒癥。另外這些銨類化合物，在細(xì)菌的作用下，可以轉(zhuǎn)變成亞硝胺，而亞硝胺是一種致癌物質(zhì)。加強(qiáng)對芽菜的監(jiān)控工作，尋求快速準(zhǔn)確的快篩方法是大量樣品篩選的市場需求。
[0003]目前，尿素檢測方面主要有一下幾種方法:
[0004]I) 二乙酰一肟顯色法
[0005]二乙酰一肟法原理是:強(qiáng)酸加熱的條件下，尿素與二乙酰反應(yīng)生成紅色的原二嗪，顏色深淺與尿素含量呈正比。此法所用的試劑易得，成本低，但檢測操作時需加熱，線性范圍低，一般不適用于現(xiàn)場快速檢測。更重要的是此種方法在豆芽尿素測定中，豆芽中成分干擾較大，易造成假陽性。
[0006]2)鄰苯二甲醛法
[0007]鄰苯二甲醛法測定尿素原理是:在酸性條件下，尿素與鄰苯二甲醛的結(jié)合物在安替比林存在的條件下，生成黃色的化合物，這種黃色的化合物與偏釩酸根結(jié)合呈藍(lán)色。此法不需煮沸，操作簡單，干擾因素少，但此方法試劑不易長時間保存，不宜于做成快檢產(chǎn)品。
[0008]3)對二甲氨基苯甲醛法
[0009]對二甲氨基苯甲醛法原理是:在酸性溶液中，尿素與對二甲氨基苯甲醛生成檸檬黃色的二氨基苯甲醛脲。該方法穩(wěn)定性、線性良好，干擾少、操作方便，但其靈敏度不高，一般用于乳制品、飼料等方面的尿素檢測。
[0010]4)亞硝酸鹽-格里斯試劑法
[0011]尿素與亞硝酸鹽在強(qiáng)酸性條件下反應(yīng)生成氮?dú)?，格里斯試劑與亞硝酸鹽反應(yīng)生成紅色化合物。含有尿素的反應(yīng)液紅色會偏淡，根據(jù)溶液顏色與標(biāo)準(zhǔn)液的顏色來判斷是否存在尿素。該方法可用于對尿素的定性，反應(yīng)的靈敏度為0.2%，達(dá)不到豆芽中尿素的測定要求。
[0012]考慮到以上方法試劑穩(wěn)定性、物質(zhì)干擾、靈敏度、方便性等方面的缺陷，尋找一種操作簡便、靈敏度高、結(jié)果準(zhǔn)確、成本低、實(shí)用快速的豆芽尿素檢測方法是食品安全方面大量樣品篩選的市場需求。脲酶是一種高效的尿素分解催化劑，尿素經(jīng)脲酶酶解生成NH4+，根據(jù)銨根離子水解PH變化而引起的酸堿指示劑如甲酚紅、鄰苯甲酚絡(luò)合劑、甲基麝香草酚藍(lán)等變色或通過水楊酸_館酸藍(lán)、苯酸-館酸藍(lán)等法測NH4+來對尿素間接定量是研究熱點(diǎn)之
O
[0013]酸堿指示劑間接測定法與待測液PH、緩沖液緩沖能力等有很大的關(guān)系，其檢測限為20mg/L尿素以上。水楊酸-靛酚藍(lán)、苯酚-靛酚藍(lán)法原理是亞硝基鐵氰化鈉催化NH4+與酚及次氯酸根反應(yīng)生成藍(lán)色化合物，根據(jù)顏色深淺對尿素間接定量，此種方法靈敏度高，但反應(yīng)時間較長，不宜于做快篩產(chǎn)品。而納氏試劑法與NH4+反應(yīng)迅速，搖勻后即可比色，脲酶與納氏試劑結(jié)合間接測尿素含量大大提高了檢測靈敏度和快篩效率。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0014]本發(fā)明的目的是克服以上方法試劑穩(wěn)定性、物質(zhì)干擾、靈敏度、方便性等方面的缺陷，提供一種操作簡便、靈敏度高、結(jié)果準(zhǔn)確、成本低、實(shí)用快速的豆芽中尿素及其總氨氮檢測方法。
[0015]本發(fā)明的技術(shù)方案是:
[0016]—種豆芽中尿素及總氨氮的檢測方法，其通過檢測經(jīng)脲酶分解尿素產(chǎn)生的氨氮，根據(jù)氨氮含量對尿素進(jìn)行半定量，其檢測尿素及總氨氮的方法包括以下步驟:
[0017]I)檢測物為豆芽，將豆芽剪碎，加入水混勻，室溫放置，中間不時搖動，得上清液為待測液；
[0018]2)分別取兩份檢測液，一份加入脲酶，另一份加入等體積的水，搖勻，室溫催化；
[0019]3)向步驟2)中所述的兩份反應(yīng)液中分別加入納氏試劑，搖勻；
[0020]4)步驟3)搖勻，觀察反應(yīng)液顏色，與色階卡對比，對尿素含量半定量。
[0021]脲酶為豆類脲酶；所述豆類脲酶從黃豆、青豆、黑豆中提取。
[0022]所述豆類脲酶的制備方法為:向豆中加入水，浸泡過夜，加乙醇水溶液打漿，離心，上清液為豆類脲酶液，將上清液真空冷凍干燥得豆類脲酶。
[0023]步驟I)豆芽與水的比例為1:1-1:10。
[0024]步驟I)室溫放置時間為2_15min。
[0025]步驟2)樣品和脲酶用量比為0.5mL:20_200uL。
[0026]步驟2)脲酶活性為30?180U.mL 1O
[0027]步驟2)脲酶催化時間為2-10min。
[0028]步驟3)顯色劑的用量為20-200uL。
[0029]步驟4)搖勻后，O-1Omin內(nèi)與色階卡對比。
[0030]步驟4)與色階卡對比，待測液中尿素含量為加脲酶組與未加脲酶組兩者的與色卡對應(yīng)值的差值，待測液中NH4-N的含量為未加脲酶組與色階卡對比得到的數(shù)值*0.5。
【具體實(shí)施方式】
[0031]本實(shí)施例主要列舉以黃豆脲酶作為檢測試劑時的過程。
[0032]豆芽尿素及總氨氮快速檢測試劑包括脲酶和顯色劑。
[0033]脲酶為黃豆脲酶。
[0034]脲酶的制備方法:黃豆浸泡過夜，向黃豆中加入乙醇水溶液，粉碎，離心，上清液為黃豆脲酶液，將上清液冷凍干燥得黃豆脲酶。
[0035]顯色劑由如下的質(zhì)量百分比組成:氫氧化鈉16%，碘化汞10%，碘化鉀7%，余量為水。
[0036]豆芽尿素及總氨氮的快速檢測方法，其步驟如下:
[0037]I)檢測物為豆芽，將豆芽剪碎，加入水混勻，室溫放置2_15min，中間不時搖動，得上清液為待測液；
[0038]2)分別取兩份檢測液，一份加入脲酶，另一份加入等體積的水，搖勻，室溫催化2-10min ；
[0039]3)向步驟2)反應(yīng)液中加入顯色劑，搖勻；
[0040]4)步驟3)搖勾，O-1Omin內(nèi)觀察反應(yīng)液顏色，與色階卡對比，對尿素含量半定量。
[0041]步驟I)豆芽與水的比例為1:1-1:10。
[0042]步驟2)樣品和脲酶用量比為0.5mL:20_200uL。
[0043]步驟2)脲酶活性為30?180U.mL_l。
[0044]步驟3)顯色劑的用量為20-200uL。
[0045]步驟4)與色階卡對比，待測液中尿素含量為加脲酶組和未加脲酶組兩者的與色卡對應(yīng)值的差值，未加脲酶組與色階卡對比得到的數(shù)值*0.5為待測液中NH4-N的含量。
[0046]以上對本發(fā)明所提供的一種資源的主題處理方法和裝置，進(jìn)行了詳細(xì)介紹，本文中應(yīng)用了具體個例對本發(fā)明的原理及實(shí)施方式進(jìn)行了闡述，以上實(shí)施例的說明只是用于幫助理解本發(fā)明的方法及其核心思想；同時，對于本領(lǐng)域的一般技術(shù)人員，依據(jù)本發(fā)明的思想，在【具體實(shí)施方式】及應(yīng)用范圍上均會有改變之處，綜上所述，本說明書內(nèi)容不應(yīng)理解為對本發(fā)明的限制。
[0047]最后說明的是，以上實(shí)施例僅用以說明本發(fā)明的技術(shù)方案而非限制，盡管參照較佳實(shí)施例對本發(fā)明進(jìn)行了詳細(xì)說明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以對本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的宗旨和范圍，其均應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的權(quán)利要求范圍當(dāng)中。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種豆芽中尿素及總氨氮的檢測方法，其特征在于:其通過檢測經(jīng)脲酶分解尿素產(chǎn)生的氨氮，根據(jù)氨氮含量對尿素進(jìn)行半定量，其檢測尿素及總氨氮的方法包括以下步驟: 1)檢測物為豆芽，將豆芽剪碎，加入水混勻，室溫放置，中間不時搖動，得上清液為待測液； 2)分別取兩份檢測液，一份加入脲酶，另一份加入等體積的水，搖勻，室溫催化； 3)向步驟2)中所述的兩份反應(yīng)液中分別加入納氏試劑，搖勻； 4)步驟3)搖勻，觀察反應(yīng)液顏色，與色階卡對比，對尿素含量半定量。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種豆芽中尿素及總氨氮的檢測方法，其特征在于:脲酶為豆類脲酶；所述豆類脲酶從黃豆、青豆、黑豆中提取。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種豆芽中尿素及總氨氮的檢測方法，其特征在于:所述豆類脲酶的制備方法為:向豆中加入水，浸泡過夜，加乙醇水溶液打漿，離心，上清液為豆類脲酶液，將上清液真空冷凍干燥得豆類脲酶。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種豆芽中尿素及總氨氮的檢測方法，其特征在于:步驟I)豆芽與水的比例為1:1-1:10。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種豆芽中尿素及總氨氮的檢測方法，其特征在于:步驟I)室溫放置時間為2-15min。6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種豆芽中尿素及總氨氮的檢測方法，其特征在于:步驟2)樣品和脲酶用量比為0.5mL:20-200uLo7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種豆芽中尿素及總氨氮的檢測方法，其特征在于:步驟2)脲酶活性為30?180U.mL、8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種豆芽中尿素及總氨氮的檢測方法，其特征在于:步驟2)脲酶催化時間為2-10min。9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種豆芽中尿素及總氨氮的檢測方法，其特征在于:步驟3)顯色劑的用量為20-200uL。10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種豆芽中尿素及總氨氮的檢測方法，其特征在于:步驟4)搖勻后，O-1Omin內(nèi)與色階卡對比。11.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種豆芽中尿素及總氨氮的檢測方法，其特征在于:步驟4)與色階卡對比，待測液中尿素含量為加脲酶組與未加脲酶組兩者的與色卡對應(yīng)值的差值，待測液中NH4-N的含量為未加脲酶組與色階卡對比得到的數(shù)值*0.5。
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種豆芽中尿素及總氨氮檢測方法,其檢測方法為將豆芽剪碎并加水浸泡，取上清液加脲酶催化，加顯色劑顯色并與色階卡對比得到尿素含量。其中，樣品、脲酶和顯色劑的用量比為0.5mL：20-200uL：20-200uL，脲酶酶活在30-180U·mL-1。本發(fā)明的檢測方法成本低，靈敏度高，能快速、準(zhǔn)確、方便地檢測大于或等于3mg/L尿素的含量和大于或等于1.5mg/L氨氮的含量。
【IPC分類】G01N21/78, G01N1/28
【公開號】CN105203532
【申請?zhí)枴緾N201510582321
【發(fā)明人】劉海靜, 李濤, 馬魁, 喬蓉霞, 林芳, 裴小龍, 王宇, 劉逸瓊, 袁磊
【申請人】陜西省食品藥品檢驗(yàn)所, 西安中潤生物科技有限公司
【公開日】2015年12月30日
【申請日】2015年9月15日