一種用于測定中獸藥散劑中11種非法添加藥物含量的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種用于測定中獸藥散劑中11種非法添加藥物含量的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 中獸藥具有毒副作用相對較小、在動物源性食品中無殘留或殘留量少和不易產(chǎn)生 耐藥性等優(yōu)點，其產(chǎn)品日益受到畜禽養(yǎng)殖者的重視，許多畜禽養(yǎng)殖企業(yè)已將中獸藥作為預(yù) 防、治療疾病及促進動物生長的重點使用對象。目前一些不法分子利用獸藥監(jiān)管中存在的 漏洞，通過非法添加療效確定且使用廣泛的化學(xué)藥物，使療效緩和的中獸藥具有速效等優(yōu) 點，這些化學(xué)成分通過食物鏈傳遞，最終對人體健康產(chǎn)生嚴(yán)重危害，中獸藥中非法添加化學(xué) 藥物的檢測逐漸受到人們的重視。
[0003] 關(guān)于中獸藥中非法添加藥物的檢測方法，目前有薄層色譜法、紅外光譜法、毛細(xì)管 電泳法、原子吸收法、液相色譜法等，但上述方法存在操作繁瑣，靈敏度低或準(zhǔn)確性差等問 題。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的是為了克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種用于測定中獸藥散劑中11 種非法添加藥物含量的方法。
[0005] 為了解決以上技術(shù)問題，本發(fā)明的技術(shù)方案為：
[0006] -種用于測定中獸藥散劑中11種非法添加藥物含量的方法，包括以下步驟：
[0007] (1)采用有機溶劑超聲提取方法對待測中獸藥散劑進行預(yù)處理，有機溶劑為甲 醇-水，甲醇和水的體積比為〇. 9-1. 1:0. 9-1. 1 ;
[0008] (2)通過液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法對提取液中的喹乙醇、利巴韋林、金剛烷胺、金剛 乙胺、地塞米松、氯霉素、己烯雌酚、呋喃它酮、呋喃妥因、呋喃西林和呋喃唑酮進行檢測。
[0009] 優(yōu)選的，所述甲醇-水中，甲醇和水的體積為1:1。
[0010] 以甲醇/水（1:1)作為提取試劑超聲提取，過濾膜后即可上機檢測，預(yù)處理簡單易 于操作，且回收率良好。雖然利用有機溶劑進行提取有機物質(zhì)是公知常識，但是，不同的有 機溶劑的提取效果不同，且有些有機溶劑會對后續(xù)的檢測產(chǎn)生干擾。經(jīng)過反復(fù)試驗發(fā)現(xiàn)，大 部分常用的有機溶劑都不能對這11種物質(zhì)進行有效提取，或?qū)罄m(xù)的檢測產(chǎn)生較大干擾， 即得到的回收率普遍較小，且檢測的譜圖雜峰較多，不能精確反應(yīng)待測物質(zhì)的含量。本發(fā)明 中選用體積比為1 :1左右的甲醇-水作為提取液，對這11中非法添加物質(zhì)都能進行很有效 地提取，且不會對后續(xù)檢測造成干擾，而甲醇的比例過大或過小都不能取得好的效果。
[0011] 雖然有些有些地方會用到甲醇/水作為提取劑，但是待提取的對象不同，如，動植 物組織中的相關(guān)物質(zhì)的提取。雖然甲醇提取有機物是利用相似相溶的原理，甲醇/水的量 足夠多時，可以將待提取對象中的相關(guān)物質(zhì)提取完全，但是，仍舊存在如下問題：待提取對 象的不同，會導(dǎo)致提取到甲醇/水中的物質(zhì)的種類及含量不同，無法保證提取的這些物質(zhì) 中不會存在干擾物質(zhì)，或?qū)⒋郎y物質(zhì)屏蔽，或與待測物質(zhì)產(chǎn)生相同的實驗結(jié)果，或不能與待 測物質(zhì)完全分離產(chǎn)生干擾，進而使實驗結(jié)果偏大或偏小，這些都是不可預(yù)期的，所以，本發(fā) 明選擇提取劑時，是大范圍實驗，不斷排除，大部分的有機溶劑都不能產(chǎn)生令人滿意的實驗 結(jié)果，而最后選擇甲醇和水的體積比為1:1的甲醇/水也是不經(jīng)意的一個發(fā)現(xiàn)，該甲醇/水 不僅使實驗結(jié)果令人滿意，還大大提高了實驗結(jié)果的重現(xiàn)性，所以該處的甲醇/水存在意 料不到的技術(shù)效果。
[0012] 優(yōu)選的，步驟⑴中，所述中獸藥散劑和甲醇-水的比例為（0.4-0.6)g: (4. 5-5. 5)ml。試驗證明，當(dāng)中獸藥散劑和甲醇-水為以上比例時，能更有效利用甲醇-水， 保證有效提取的同時，防止了甲醇-水的浪費。
[0013] 優(yōu)選的，步驟（1)中，所述超聲時間為15-45min，優(yōu)選為30min ;超聲的溫度為 25-35 °C，優(yōu)選為 30 °C。
[0014] 優(yōu)選的，步驟（1)中，將超聲提取后的溶液進行過濾，有機濾膜的孔徑為0.22或 0? 45 y m，優(yōu)選 0? 22 y m。
[0015] 超聲波提取是利用超聲波具有的機械效應(yīng)，空化效應(yīng)和熱效應(yīng)，通過增大介質(zhì)分 子的運動速度、增大介質(zhì)的穿透力以提取生物有效成分。利用超聲波技術(shù)來強化提取分離 過程，可有效提高提取分離率，縮短提取時間、節(jié)約成本。上述超聲條件經(jīng)過實驗驗證使提 取分離率最高。經(jīng)過實驗分析，所述濾膜的孔徑為〇. 22 y m，濾膜過濾可以有效除去雜質(zhì)，以 免影響檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。
[0016] 優(yōu)選的，步驟（2)中，液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法的色譜條件為：采用十八烷基健合硅 膠柱（C18柱），流動相由A相和B相組成，A相為水，B相為乙腈，采用梯度洗脫。
[0017] 進一步優(yōu)選的，所述C18柱的粒徑5 y m，柱內(nèi)徑為2. 1或4. 6mm，柱長為50、150或 250mm ;優(yōu)選色譜柱為C182. 1 X 150mm，5 y m ;柱溫為30°C，進樣量：5 y L。
[0018] 更進一步優(yōu)選的，喹乙醇、利巴韋林、金剛烷胺、金剛乙胺、地塞米松、氯霉素、呋 喃它酮和呋喃唑酮的檢測條件：流速：〇. 2mL/min ;梯度洗脫程序：0-2min，B相保持5% ; 2_8min，B 相從 5%升至 95% ;8. 1-lOmin，B 相降至 5% ;10min 后停止；
[0019] 呋喃妥因、呋喃西林和己烯雌酚的檢測條件：流速：0. 3mL/min，梯度洗脫程序： 0-51^11，8相從20%升至50%;5-7111111，8相從50%升至95% ;7-8111111，8相保持95%; 8. 1-lOmin B 相降至 5% ;10min 后停止。
[0020] 由于獸藥粉劑中的這11種非法添加物中，有些物質(zhì)的極性相差很小，難以保證在 有限的時間內(nèi)將每種物質(zhì)進行有效分離，所以，很難根據(jù)其性質(zhì)確定流動相以及流動相的 配比，而流動相的種類很多，每種流動相的濃度也有很大差別，所以，流動相的確定和梯度 洗脫都是需要反復(fù)試驗，需要發(fā)明人根據(jù)其多年工作經(jīng)驗，不斷調(diào)整才能得到的。試驗證 明，當(dāng)流動相為以上兩種，梯度洗脫程序為以上程序時，可以有效將這11種物質(zhì)進行分離， 使這11種物質(zhì)之間沒有相互干擾，保證了試驗結(jié)果的準(zhǔn)確性。
[0021 ] 優(yōu)選的，步驟（2)中，液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法的質(zhì)譜條件為：
[0022] 喹乙醇、利巴韋林、金剛烷胺、金剛乙胺、地塞米松、氯霉素、呋喃它酮和呋喃唑酮 的檢測條件：離子源：API-ES ;毛細(xì)管電壓：3000V ;霧化壓力：35psi ;干燥氣溫度：325°C ; 干燥氣流量：l〇L/min;離子極性：正；質(zhì)量掃描模式:MRM模式（多反應(yīng)監(jiān)測模式）；
[0023] 呋喃妥因、呋喃西林和己烯雌酚的檢測條件：離子源：API_ES;毛細(xì)管電壓： 3000V;霧化壓力：30psi;干燥氣溫度：300°C;干燥氣流量：10L/min;離子極性：負(fù)；質(zhì)量掃 描模式:MRM模式（多反應(yīng)監(jiān)測模式）。
[0024] 本發(fā)明方法還包括用各種非法添加的藥物的標(biāo)準(zhǔn)品繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并由此計算待 測獸藥散劑中非法添加藥物的含量，具體方法如下：取11種化學(xué)藥物的對照品儲備液，配 制一系列不同質(zhì)量濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)液，于上述條件和設(shè)定的11種非法添加藥物的質(zhì)譜參 數(shù)下分別進樣測定，繪制11種非法添加藥物的標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到線性方程、相關(guān)系數(shù)和線性 范圍。
[0025] 雖然在相關(guān)文獻中已經(jīng)公開了很多中獸藥散劑中的非法添加藥物，但是公開的非 法添加藥物的數(shù)量很多，現(xiàn)有技術(shù)中還沒有人提出將本發(fā)明中的11種物質(zhì)的含量進行檢 測，喹乙醇、利巴韋林、地塞米松、己烯雌酚、呋喃它酮、呋喃妥因以及呋喃唑酮都沒有使用 液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜的方法檢測過，所以，這幾種物質(zhì)是否可以被該方法檢測存在不可預(yù)期 性，即使可以使用該方法進行檢測，由于沒有現(xiàn)有的技術(shù)作為參考，很難確定每種物質(zhì)利用 該方法進行檢測的條件。
[0026] 既然這些物質(zhì)單獨存在時是否能使用該方法進行檢測都是未知的，而多種物質(zhì)同 時存在時，由于不同物質(zhì)的極性不同或相差較小；或者不同物質(zhì)之間存在相互作用，使物質(zhì) 的極性發(fā)生改變，進而使原本可以分離的物質(zhì)不能分離等，這些都是制約使用液相色譜串 聯(lián)質(zhì)譜方法進行同時檢測的因素。所以，這11種物質(zhì)是否能夠同時檢測或分幾次才能檢測 出來都是未知的，如過這些物質(zhì)不能同時被檢測，就會使實驗的進行更加困難，這都需要發(fā) 明人的反復(fù)試驗進行探索才能最終確定。所以使用本發(fā)明的方法來檢測中獸藥散劑中的這 11種物質(zhì)不是顯而易見的。
[0027] 本發(fā)明的有益效果為：
[0028] 1、本發(fā)明的樣品預(yù)處理簡單，以甲醇/水（50+50)作為提取試劑超聲提取，過濾膜 后即可上機檢測，且回收率良好，平均回收率為90. 2%~111%;
[0029] 2、本發(fā)明的方法具有更低的檢出限，喹乙醇、利巴韋林、金剛烷胺、金剛乙胺、地塞 米松、氯霉素、呋喃它酮、呋喃唑酮的檢出限為50 y g/kg;呋喃妥因、呋喃西林和己烯雌酚 的檢出限為100 yg/kg，可以實現(xiàn)對中獸藥散劑中這些非法添加藥物更準(zhǔn)確地檢測。
【附圖說明】
[0030] 圖1為利巴韋林提取離子流譜圖；
[0031] 圖2為喹乙醇提取離子流譜圖；
[0032] 圖3為金剛烷胺提取離子流譜圖；
[0033] 圖4為金剛乙胺提取離子流譜圖；
[0034] 圖5為呋喃它酮提取離子流譜圖；
[0035] 圖6為呋喃妥因提取離子流譜圖；
[0036] 圖7為呋喃西林提取離子流譜圖；
[0037] 圖8為呋喃唑酮提取離子流譜圖；
[0038] 圖9為地塞米松提取離子流譜圖；
[0039] 圖10為己烯雌酚提取離子流譜圖；
[0040]圖11為氯霉素提取離子流譜圖；
[0041] 圖12和圖13為檢測實際樣品中11種非法添加藥物的總離子流圖。
【具體實施方式】
[0042] 下面結(jié)合【具體實施方式】對本發(fā)明作進一步說明。
[0043] 儀器與試劑：快速分離液