飼料酸化劑中乳酸含量的檢測(cè)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及分析檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及混合型飼料添加劑成分的檢測(cè)，具體是 指一種飼料酸化劑中乳酸含量的檢測(cè)方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 乳酸，學(xué)名2-羥基丙酸，分子式C3H603，是一種羧酸，無(wú)氣味，具有吸濕性，能與水、 乙醇、甘油混溶，不溶于氯仿、二硫化碳和石油醚。在飼料添加劑領(lǐng)域，乳酸可被用于配備飼 料混合酸化劑，以取代飼用抗生素，保障畜禽健康，促進(jìn)生長(zhǎng)與生產(chǎn)，并且還能夠抑制有害 菌，促使有益菌的生長(zhǎng)，調(diào)節(jié)胃腸道的PH，起到抗生素和生菌劑的雙重作用。配備飼料混合 酸化劑時(shí)通常將乳酸與其他多種有機(jī)酸一起加入到二氧化硅和/或石粉等載體中混合均 勾，制備成所需廣品。
[0003] 在目前的飼料混合酸化劑的生產(chǎn)過(guò)程中，存在如下情況：
[0004] 1)市售乳酸一般的濃度為40%、50%、80%或90%左右，為無(wú)色或微帶黃色的澄 清液體。飼料混合酸化劑生產(chǎn)中一般采購(gòu)高含量的乳酸（通常都> 50% )作為原料，因乳 酸分子含有一個(gè)羥基和一個(gè)羧基，在高濃度的乳酸中，兩分子乳酸常發(fā)生脫水聚合形成乳 酸酐，因此原料中常含有乳酸酐，這也導(dǎo)致了生產(chǎn)的飼料混合酸化劑中常含有乳酸酐。
[0005] 2)飼料混合酸化劑中乳酸的含量通常很高，而生產(chǎn)過(guò)程中涉及加熱熔化與混合工 序，因此又會(huì)發(fā)生乳酸聚合而成乳酸酐。
[0006] 3)飼料混合酸化劑中除乳酸外還有其他有機(jī)酸，生產(chǎn)過(guò)程中的加熱和儲(chǔ)存中可能 發(fā)生不同酸分子之間的聚合或酯化，導(dǎo)致飼料混合酸化劑中有機(jī)酸不完全是以酸的單體形 式存在
[0007] 基于以上3個(gè)原因，在測(cè)定酸化劑中的乳酸含量前必須將飼料酸化劑中的乳酸聚 合物完全解離，檢測(cè)出的結(jié)果才能保證準(zhǔn)確。
[0008] 檢索了同行業(yè)以及相關(guān)行業(yè)的乳酸檢測(cè)方法，檢索出如下幾個(gè)方法標(biāo)準(zhǔn)：
[0009] 方法標(biāo)準(zhǔn)一《GB/T 23877-2009飼料酸化劑中檸檬酸、富馬酸和乳酸的測(cè)定高效 液相色譜法》，此標(biāo)準(zhǔn)為飼料混合酸化劑中乳酸含量的檢測(cè)的國(guó)家通用標(biāo)準(zhǔn)。但該標(biāo)準(zhǔn)中試 樣的處理方法僅為水溶解，在這樣的前處理?xiàng)l件下，飼料酸化劑中存在的乳酸聚合物（包 括酸酐和酯）不易離解，直接導(dǎo)致乳酸含量的檢測(cè)結(jié)果誤差很大，按照此方法只能測(cè)出乳 酸實(shí)際添加量的60%左右。
[0010] 方法標(biāo)準(zhǔn)二《GB 2023-2003食品添加劑乳酸》，此標(biāo)準(zhǔn)為食品添加劑行業(yè)的乳酸檢 測(cè)方法標(biāo)準(zhǔn)，該標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了食品添加劑乳酸的滴定檢測(cè)法，但該方法只適用于單體乳酸的 檢測(cè)，它實(shí)際檢測(cè)的是試樣中的氫離子，再通過(guò)換算得出乳酸結(jié)果，所以它容易受到試樣中 其他酸性物質(zhì)的影響，不適用于飼料酸化劑中乳酸含量的檢測(cè)。
[0011] 方法標(biāo)準(zhǔn)三《SNT 2007-2007進(jìn)出口果汁中乳酸、檸檬酸、富馬酸含量檢測(cè)方法高 效液相色譜法》及方法標(biāo)準(zhǔn)四《SNT 1511. 1-2005進(jìn)出口果汁中乳酸含量檢驗(yàn)方法》，這兩標(biāo) 準(zhǔn)與方法標(biāo)準(zhǔn)一相同，未規(guī)定乳酸聚合體的皂化過(guò)程，檢測(cè)結(jié)果有很大誤差。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0012] 本發(fā)明的目的是克服了上述現(xiàn)有技術(shù)混合酸化劑中乳酸檢測(cè)時(shí)因乳酸聚合物未 充分解聚成乳酸單體，而導(dǎo)致檢測(cè)準(zhǔn)確度低的情況的缺點(diǎn)，提供了一種能夠?qū)崿F(xiàn)的試樣在 充分的解聚后再用液相色譜進(jìn)行檢測(cè)，保證結(jié)果的高準(zhǔn)確性的飼料酸化劑中乳酸含量的檢 測(cè)方法。
[0013] 為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明具有如下構(gòu)成：
[0014] 該飼料酸化劑中乳酸含量的檢測(cè)方法，其主要特點(diǎn)是，所述的檢測(cè)方法包括：
[0015] (1)待測(cè)樣品制備步驟：將待測(cè)樣品加入強(qiáng)堿中以解聚乳酸酐，稀釋后過(guò)濾；
[0016] (2)樣品檢測(cè)步驟：
[0017] (a)制作用液相色譜法測(cè)得的乳酸標(biāo)準(zhǔn)品濃度與峰面積的對(duì)應(yīng)關(guān)系標(biāo)準(zhǔn)曲線；
[0018] (b)用液相色譜-紫外檢測(cè)器測(cè)定待測(cè)樣品溶液和標(biāo)準(zhǔn)溶液；
[0019] (c)將乳酸標(biāo)準(zhǔn)工作液進(jìn)樣在（b)的色譜條件下進(jìn)樣分析，根據(jù)各濃度所測(cè)乳酸 峰面積的大小與濃度的對(duì)應(yīng)關(guān)系做標(biāo)準(zhǔn)曲線；
[0020] ⑷去所述的待測(cè)樣品的過(guò)濾液，進(jìn)行色譜分析，測(cè)得濾液中乳酸的峰面積。
[0021] 優(yōu)選地，所述的待測(cè)樣品制備步驟具體為：
[0022] 稱(chēng)量飼料酸化劑，加入1~10mL 10mol/L NaOH并在70~95°C下水浴加熱，以使 酸化劑中的酸酐和酯充分解聚，取出冷卻后調(diào)節(jié)pH值為2. 1~3. 5,以使得酸化劑中的有機(jī) 酸充分離子化，將溶液稀釋到固定的倍數(shù)，并過(guò)一次性有機(jī)濾膜。
[0023] 更優(yōu)選地，所述的待測(cè)樣品制備步驟中，加入NaOH后，溶液pH為強(qiáng)堿性，pH值 彡12,且水浴時(shí)間不得少于0. 5h。
[0024] 進(jìn)一步優(yōu)選地，所述的步驟（a)具體為：
[0025] 制作用液相色譜法測(cè)得的乳酸標(biāo)準(zhǔn)品濃度與峰面積的對(duì)應(yīng)關(guān)系標(biāo)準(zhǔn)曲線：配置至 少5個(gè)濃度梯度在0. 2~10mg/mL之間的乳酸標(biāo)準(zhǔn)工作液，過(guò)一次性有機(jī)濾膜。
[0026] 再一步優(yōu)選地，所述的步驟（b)具體為：
[0027] 用液相色譜-紫外檢測(cè)器VWD測(cè)定待測(cè)樣品溶液和標(biāo)準(zhǔn)溶液，使用外標(biāo)法檢測(cè)，測(cè) 試條件及儀器參考條件如下：
[0028] 色譜柱：Agilent Z0RBAX Eclipse Plus C18 柱，250mmX 4. 6mm，5 y m ;流動(dòng)相：A 為乙腈，B為pH 2. 4的0.0 lmol/L磷酸二氫銨水溶液，A:B = 2. 5:97. 5 ;流速：lmL/min ;柱 溫：25°C ;進(jìn)樣量：20 y L ;VWD檢測(cè)器檢測(cè)波長(zhǎng)：210nm。
[0029] 再進(jìn)一步優(yōu)選地，所述的樣品檢測(cè)步驟（c)中的標(biāo)準(zhǔn)曲線，其中相關(guān)系數(shù)大于 0.9999。
[0030] 更進(jìn)一步優(yōu)選地，所述的檢測(cè)方法在樣品檢測(cè)步驟（2)之后，還包括結(jié)果分析步 驟：根據(jù)步驟（2)中（c)制作的乳酸濃度與峰面積的對(duì)應(yīng)關(guān)系標(biāo)準(zhǔn)曲線，再結(jié)合步驟（2)中 (d)得到的濾液中乳酸的峰面積，計(jì)算濾液中乳酸的濃度，由此計(jì)算出待檢測(cè)樣品中乳酸含 量。
[0031] 最優(yōu)選地，所述的有機(jī)濾膜孔徑為0. 4~0. 5 y m。
[0032] 本發(fā)明用于對(duì)以二氧化硅和/或石粉為載體的混合型飼料添加劑，特別是酸化劑 中乳酸含量的液相色譜定量分析方法，先利用強(qiáng)堿將聚乳酸解離，再調(diào)節(jié)pH保證酸性條件 下充分質(zhì)子化，而后定容，過(guò)有機(jī)濾膜，最后取濾液進(jìn)樣檢測(cè)，酸化劑樣品的皂化解聚的前 處理過(guò)程，使得試樣在充分的解聚后再用液相色譜進(jìn)行檢測(cè)，保證結(jié)果的高準(zhǔn)確性。本方法 結(jié)合乳酸的化學(xué)性質(zhì)，進(jìn)行特殊化前處理，大大提高了檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確度和精密度，操作過(guò) 程簡(jiǎn)單，所用試劑安全無(wú)毒，檢測(cè)人員安全性高，結(jié)果準(zhǔn)確穩(wěn)定，所用設(shè)備常見(jiàn)易得，是一種 非常理想的乳酸液相色譜檢測(cè)方法，適合大規(guī)模推廣使用。
【附圖說(shuō)明】
[0033] 圖1為本發(fā)明的酸化劑樣品乳酸含量檢測(cè)結(jié)果圖。
【具體實(shí)施方式】
[0034] 為了能夠更清楚地描述本發(fā)明的技術(shù)內(nèi)容，下面結(jié)合具體實(shí)施例來(lái)進(jìn)行進(jìn)一步的 描述。
[0035] 1試劑和材料：
[0036] 除非有特殊說(shuō)明，本測(cè)定方法中所用試劑均為分析純，水為GB/T 6682規(guī)定的二 級(jí)水。
[0037] 1. 1磷酸二氫銨
[0038] 1. 2 磷酸
[0039] 1. 3 硫酸
[0040] 1. 4氫氧化鈉飽和溶液：稱(chēng)取110g氫氧化鈉，溶于100mL無(wú)二氧化碳的水中搖勻， 注入聚乙烯容器中，密閉放置溶液澄清
[0041] 1 ? 5 L-乳酸標(biāo)準(zhǔn)品：純度彡98 %。
[0042] 1. 6 L-乳酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：準(zhǔn)確稱(chēng)取0. 1020g L-乳酸標(biāo)準(zhǔn)品（1. 4)于100ml容量 瓶中，用水溶解并定容至刻度，搖勻。此溶液中L-乳酸濃度為1.00mg/mL。此溶液4°C條件 下儲(chǔ)藏，保存期3個(gè)月。
[0043] 1. 7 L-乳酸標(biāo)準(zhǔn)工作液：準(zhǔn)確吸取 1. 00ml、2. 00ml、3. 00ml、5. 00ml 和 10. 00ml L_乳酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（1. 6)于10ml容量瓶中，用水定容至刻度，搖勻。此為L(zhǎng)-乳酸標(biāo)準(zhǔn)工作 液，現(xiàn)配現(xiàn)用。
[0044] 1. 8 0? 01mol/L NH4H2P04d#取磷酸二氫銨1. 5g，用適量水溶解，用磷酸調(diào)節(jié)pH至 2. 4,轉(zhuǎn)移至500mL容量瓶中，定容，搖勻。
[0045] 1. 9 10mol/L NaOH :吸取28mL飽和NaOH于50mL容量瓶中，定容至刻度，搖勻。
[0046] 1. 10 20 % 硫酸溶液（V/V)
[0047] 2儀器和設(shè)備：
[0048] 2. 1實(shí)驗(yàn)室常用儀器設(shè)備。
[0049] 2. 2分析天平：感量0? 0001g。
[0050] 2. 3酸度計(jì)
[0051] 2. 4有機(jī)性微孔濾膜：孔徑0? 45 y m
[0052] 2. 5高效液相色譜儀，配有二極管陣列檢測(cè)器或紫外檢測(cè)器。
[0053] 2. 6恒溫水浴