一種同時(shí)測(cè)定苦玄參藥材中苦玄參苷ia和苦玄參苷ib含量的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于生物檢測(cè)領(lǐng)域，具體涉及一種同時(shí)測(cè)定苦玄參藥材中苦玄參苷IA和 苦玄參苷IB含量的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 隨著現(xiàn)代醫(yī)學(xué)模式的轉(zhuǎn)變、人們對(duì)化學(xué)藥物毒副作用認(rèn)識(shí)的提高以及化學(xué)藥物開 發(fā)難度的增大，植物提取物和復(fù)方藥物的開發(fā)成為新的選擇。西方國(guó)家對(duì)植物藥的認(rèn)可，營(yíng) 造了巨大的天然植物產(chǎn)品市場(chǎng)。然而，我國(guó)的中藥市場(chǎng)目前存在著一個(gè)嚴(yán)重的問題，即我國(guó) 中藥產(chǎn)品質(zhì)量可控性差，缺乏內(nèi)在的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。要想讓我國(guó)中藥市場(chǎng)規(guī)范化、質(zhì)量安全可控 化及真正走向國(guó)際市場(chǎng)，就應(yīng)加強(qiáng)中藥基礎(chǔ)研究，從中藥產(chǎn)品生產(chǎn)的各個(gè)環(huán)節(jié)控制生產(chǎn)質(zhì) 量。藥用資源是中藥產(chǎn)品生產(chǎn)鏈的源頭，加強(qiáng)藥用資源的基礎(chǔ)研究，使中藥生產(chǎn)質(zhì)量在源頭 得到控制尤為重要。
[0003] 廣西作為擁有中藥資源的第二大省，依照國(guó)家對(duì)中醫(yī)藥發(fā)展的中長(zhǎng)期規(guī)劃，出臺(tái) 了一系列政策以促進(jìn)廣西中醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，如《廣西壯族自治區(qū)發(fā)展中醫(yī)藥壯醫(yī)藥條 例》、《壯瑤醫(yī)藥振興計(jì)劃》、《廣西中藥材產(chǎn)業(yè)優(yōu)先發(fā)展規(guī)劃大綱》等，廣西中醫(yī)藥科學(xué)研究 亦因此得到迅速發(fā)展?？嘈⒆鳛閺V西道地藥材，被列入十二五期間廣西重點(diǎn)扶持的十大 中藥材之一。
[0004] 苦玄參Picria fel-tearrae Lour.是玄參科苦玄參屬唯一的一種植物，作為藥用 在廣西已經(jīng)有200多年的歷史，是廣西道地藥材。其主要藥理作用有消腫止痛、抗菌、消炎、 鎮(zhèn)痛等。其主要化學(xué)成分為三萜類化合物、黃酮類化合物及苷類化合物幾大類，而其主要藥 用有效成分為四環(huán)三萜苷類，其中以苦玄參苷IA和苦玄參苷IB為主，以及苦玄參苷II。
[0005] 本發(fā)明的目的在于為苦玄參藥材質(zhì)量檢測(cè)提供一種同時(shí)測(cè)定苦玄參苷IA和IB含 量的方法，同時(shí)為苦玄參人工種植藥材的良種選育、品種改良、資源利用等提供檢測(cè)方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明提供了一種同時(shí)測(cè)定苦玄參藥材中苦玄參苷IA和苦玄參苷IB含量的方 法。該方法在原有的分別單獨(dú)測(cè)定苦玄參苷IA和苦玄參苷IB含量方法的基礎(chǔ)上進(jìn)行整合 和改良，大大縮短了提取時(shí)間，減少提取溶劑的使用，降低提取成本；測(cè)定時(shí)一針多測(cè)，高效 快速。
[0007] 本發(fā)明通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：
[0008] 本發(fā)明原料為苦玄參藥材，其制備方法為：采集苦玄參鮮株，陰涼通風(fēng)處晾干，藥 材通過粉碎機(jī)粉碎后過20目篩，封口袋密封后備用。
[0009] 本發(fā)明使用的提取液為：50 %~70 %濃度的甲醇。
[0010] 本發(fā)明采用的提取方法為：將藥粉放入提取容器中，以甲醇為提取溶劑，加熱回流 提?。黄渲刑崛r(shí)間為30~40分鐘。
[0011] 本發(fā)明苦玄參苷IA和苦玄參苷IB含量測(cè)定方法為：高效液相色譜測(cè)定法。
[0012] 本發(fā)明高效液相色譜法待測(cè)溶液的制備方法為：上述加熱回流后的提取液，采用 中性濾紙進(jìn)行初濾，取濾液，用〇. 45 y m微孔濾膜過濾，制成待測(cè)溶液。
[0013] 本發(fā)明高效液相色譜法采用純度彡98%的苦玄參苷IA和苦玄參苷IB為對(duì)照品。
[0014] 本發(fā)明高效液相色譜測(cè)定條件為：色譜柱為Agilent ZORBAX SB-C18柱，流動(dòng)相為 乙腈-7K，檢測(cè)波長(zhǎng)為264nm，柱溫35°C、流速1.0ml/min。
[0015] 本發(fā)明高效液相色譜法標(biāo)準(zhǔn)曲線制作方法為：精密稱取苦玄參苷IA對(duì)照品 5. 17mg，苦玄參苷IB對(duì)照品4. 95mg，分別置于25ml容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，制 成母液。從苦玄參苷IA、苦玄參苷IB的母液中各量取2. 5ml置于5ml容量瓶中，制成混合 標(biāo)準(zhǔn)溶液。取苦玄參苷IA和IB的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液經(jīng)0. 45 y m微孔濾膜過濾，自動(dòng)進(jìn)樣2,4， 6,8,10,12,14,16,18 y 1，以峰面積（Y)對(duì)進(jìn)樣量（X)進(jìn)行回歸，得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程。
[0016] 本發(fā)明含量計(jì)算方法為：待測(cè)溶液按照標(biāo)準(zhǔn)曲線相同的色譜條件進(jìn)樣，外標(biāo)一點(diǎn) 法計(jì)算樣品的含量。
【具體實(shí)施方式】
[0017] 以下結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步的解釋說明，但并不對(duì)本發(fā)明造成任何限制。
[0018] -、實(shí)施例1至實(shí)施例3的儀器、試劑和檢測(cè)流程如下：
[0019] 1 ?儀器
[0020] Agilent 1260高效液相色譜儀【包括：四元低壓梯度栗，二極管陣列檢測(cè)器 (DAD)，HP化學(xué)工作站（Agilent)】；超純水儀（Milipore公司）。
[0021] 2?試劑
[0022] 乙腈（色譜純?cè)噭?，甲醇（分析純?cè)噭ǔ兯?，自制），苦玄參苷IA和苦 玄參苷IB對(duì)照品純度大于98%。
[0023] 3?檢測(cè)流程
[0024] 苦玄參鮮株，陰涼通風(fēng)處晾干后，用粉碎機(jī)粉碎，過20目篩。取過20目篩苦玄參藥 材粉末約lg，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入相應(yīng)濃度的甲醇25ml，密塞，稱定重量， 加熱回流適當(dāng)時(shí)間，放冷，再稱定重量，用相同濃度的甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，中性濾紙 過濾，取經(jīng)過濾紙過濾的濾液用0. 45 y m微孔濾膜過濾，作為供試品溶液。
[0025] 供試品溶液以苦玄參苷IA和苦玄參苷IB為對(duì)照品，采用Agilent ZORBAX SB-C18 柱、乙腈-水為流動(dòng)相，在檢測(cè)波長(zhǎng)264nm、柱溫35°C、流速1.0ml/min條件下，用高效液相 色譜法測(cè)定其含量。
[0026] 標(biāo)準(zhǔn)曲線制作：精密稱取苦玄參苷IA對(duì)照品5. 17mg，苦玄參苷IB對(duì)照品4. 95mg， 分別置于25ml容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，制成母液。從苦玄參苷IA、苦玄參苷 IB的母液中各量取2. 5ml置于5ml容量瓶中，制成混合標(biāo)準(zhǔn)溶液。取苦玄參苷IA和IB的 混合標(biāo)準(zhǔn)溶液經(jīng)〇. 45 y m微孔濾膜過濾，自動(dòng)進(jìn)樣2,4,6,8,10,12,14,16,18 y 1，以峰面積 (Y)對(duì)進(jìn)樣量（X)進(jìn)行回歸，得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程。
[0027] 供試品溶液按照標(biāo)準(zhǔn)曲線相同的色譜條件進(jìn)樣，外標(biāo)一點(diǎn)法計(jì)算樣品的含量。
[0028] 二、實(shí)施例1至實(shí)施例3供試品溶液制備條件見表1
[0029] 表1.實(shí)施例1至實(shí)施例3供試品溶液制備條件
[0030]
[0031] 三、實(shí)施例1至實(shí)施例3含量測(cè)定結(jié)果見表2
[0032] 表2.實(shí)施例1至實(shí)施例3含量測(cè)定結(jié)果
[0033]
[0034] 四、結(jié)果分析
[0035] 由實(shí)施例1至實(shí)施例3的含量測(cè)定結(jié)果可知，當(dāng)提取溶劑為甲醇，提取液濃度為 50%~70%%，采用加熱回流方法，加熱回流30~40分鐘時(shí)，可有效提取苦玄參藥材中的 藥用有效成分苦玄參苷IA和苦玄參苷IB，通過高效液相色譜法檢測(cè)，其含量標(biāo)準(zhǔn)達(dá)到國(guó)家 藥典規(guī)定的不低于〇. 25%的標(biāo)準(zhǔn)，該方法是可行的。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種同時(shí)測(cè)定苦玄參藥材中苦玄參苷IA和苦玄參苷IB含量的方法，其特征在于，包 括以下步驟：苦玄參藥材粉碎，稱取適量藥粉，有機(jī)溶劑提取，加熱回流，過濾得提取液，提 取液采用高效液相色譜法測(cè)定苦玄參苷IA和苦玄參苷IB含量。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的同時(shí)測(cè)定苦玄參藥材中苦玄參苷IA和苦玄參苷IB含量的方 法，其特征在于，所述的苦玄參藥材為苦玄參鮮植株經(jīng)干燥后所得藥材。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的同時(shí)測(cè)定苦玄參藥材中苦玄參苷IA和苦玄參苷IB含量的方 法，其特征在于，其有機(jī)溶劑為甲醇。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的同時(shí)測(cè)定苦玄參藥材中苦玄參苷IA和苦玄參苷IB含量的方 法，其特征在于，其有機(jī)溶劑濃度為50 %~70 %。5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的同時(shí)測(cè)定苦玄參藥材中苦玄參苷IA和苦玄參苷IB含量的方 法，其特征在于，其提取方法為加熱回流。6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的同時(shí)測(cè)定苦玄參藥材中苦玄參苷IA和苦玄參苷IB含量的方 法，其特征在于，其加熱回流時(shí)間為30~40min。7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的同時(shí)測(cè)定苦玄參藥材中苦玄參苷IA和苦玄參苷IB含量的方 法，其特征在于，其含量測(cè)定的方法采用高效液相色譜法測(cè)定。8. 根據(jù)權(quán)利要求1和權(quán)利要求7所述的同時(shí)測(cè)定苦玄參藥材中苦玄參苷IA和苦玄參 苷IB含量的方法，其特征在于，液相色譜測(cè)定條件為：色譜柱為AgilentZORBAXSB-C18 柱，流動(dòng)相為乙腈-水，檢測(cè)波長(zhǎng)264nm，柱溫35°C，流速I.Oml/min。
【專利摘要】本發(fā)明屬于生物檢測(cè)領(lǐng)域，具體涉及一種同時(shí)測(cè)定苦玄參藥材中苦玄參苷IA和苦玄參苷IB含量的方法。包括以下步驟：采集苦玄參鮮株，陰涼處晾干制成苦玄參藥材?？嘈⑺幉姆鬯?，稱取適量藥粉，用50％～70％濃度甲醇，加熱回流30～40分鐘，中性濾紙初濾，濾液用微孔濾膜過濾，得提取液。提取液以苦玄參苷IA和苦玄參苷IB為對(duì)照品，采用Agilent？ZORBAX？SB-C18柱、乙腈-水為流動(dòng)相，在檢測(cè)波長(zhǎng)264nm、柱溫35℃、流速1.0ml/min條件下，用高效液相色譜測(cè)定其含量。本發(fā)明測(cè)定方法能同時(shí)測(cè)定苦玄參藥材中苦玄參苷IA和苦玄參苷IB的含量，具有快速、準(zhǔn)確、穩(wěn)定且重復(fù)性好、節(jié)約測(cè)定成本的特點(diǎn)。
【IPC分類】G01N30/06, G01N30/02
【公開號(hào)】CN105203669
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510726721
【發(fā)明人】謝陽姣, 周雅琴, 何志鵬, 李耀燕, 閆國(guó)躍, 符標(biāo)芳
【申請(qǐng)人】廣西中醫(yī)藥大學(xué)
【公開日】2015年12月30日
【申請(qǐng)日】2015年11月2日