丹參酸甲酯磺酸鈉的制備方法和應(yīng)用
【專利說(shuō)明】
[0001] 本申請(qǐng)為申請(qǐng)?zhí)朇N201410093547. 0,申請(qǐng)日為2014年3月14日，申請(qǐng)名稱為："丹 參酸甲酯磺酸鈉的制備方法和應(yīng)用"的專利申請(qǐng)的分案申請(qǐng)。
技術(shù)領(lǐng)域
[0002] 本發(fā)明涉及藥物領(lǐng)域，具體涉及丹參酸甲酯磺酸鈉的制備方法和應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0003] 丹參，又名血參、赤根、紅根、血生根，為唇形科植物（Salviamiltiorrhza)的根 莖，其入藥始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》。中醫(yī)認(rèn)為，其味苦微寒，具有活血痛經(jīng)、祛瘀止痛、清心除 煩、涼血消癰的功效，適用于治療月經(jīng)不調(diào)、痛經(jīng)、經(jīng)閉、崩漏、帶下、冠心病、動(dòng)脈粥樣硬化、 高血脂、心絞痛、跌打淤血、失眠、神經(jīng)衰弱、乙肝等疾病，為婦科、內(nèi)科及外傷科證屬血瘀兼 熱者常用。
[0004] 現(xiàn)代藥學(xué)研究表明，丹參中化學(xué)成分復(fù)雜，主要為水溶性丹參酚酸類和脂溶性二 萜醌類丹參酮類化合物。其中，丹參酮類化合物主要包括丹參酮I、丹參酮IIA、丹參酮 IIB、異丹參酮I、異丹參酮IIA、隱丹參酮、異隱丹參酮、甲基丹參酮、羥基丹參酮等。
[0005] 丹參酮IIA是重要的丹參有效成分。丹參酮IIA磺酸鈉（SodiumTanshinoneIIA Sulfonate，STS)，則是丹參酮IIA經(jīng)磺化后得到的水溶性磺酸鹽。由于磺酸基的引入，在治 療冠心病、心絞痛、心肌梗塞等疾病方面，丹參酮IIA磺酸鈉相比丹參酮IIA具有更多的優(yōu) 越性，從而成為主要的心血管類丹參提取物中藥。
[0006] 丹參酮IIA是制備丹參酮IIA磺酸鈉的原料，從丹參藥材飲片提取，故難免混有少 量、或極低含量其他結(jié)構(gòu)較為相似的組分，如丹參酮IIB、丹參酮I、隱丹參酮、紫丹參甲素 等。若要制備高純度丹參酮IIA磺酸鈉，則獲得這些極低含量相關(guān)組分標(biāo)準(zhǔn)品、以及這些標(biāo) 準(zhǔn)品在丹參酮IIA磺酸鈉原料相關(guān)成分含量控制中的應(yīng)用，具有重要意義。
[0007] 但是，由于該類化合物結(jié)構(gòu)復(fù)雜，化學(xué)全合成難度大，要獲得高純度對(duì)照品成為挑 戰(zhàn)。有研究報(bào)道從丹參酮IIA磺酸鈉原料藥中提取相關(guān)物質(zhì)，由于其含量極低，HPLC純度 通常不到百分之一，采用高效液相法分離提取，工作量大、難度高。因此，丹參提取物中極低 含量組分的高純度標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)模化制備，及其在丹參酮IIA磺酸鈉原料藥相關(guān)物質(zhì)含量監(jiān)控 中的應(yīng)用成為本領(lǐng)域長(zhǎng)期以來(lái)難以解決的技術(shù)難題。
[0008] 丹參酸甲酯也是丹參脂溶性二萜醌類化合物有效成分之一，并且尚未有技術(shù)大量 制備丹參酸甲酯磺酸鈉的報(bào)道?，F(xiàn)有技術(shù)中專利CN200610039234. 2"一組從丹參中提取的 二萜醌類化合物的磺化物在醫(yī)藥中的應(yīng)用"表明丹參酸甲酯磺酸鈉可以應(yīng)用于治療冠心病 (包括心絞痛，心肌梗死，心律失常，心肌血供應(yīng)不足）和抗菌消炎等。因此，定量控制丹參 酸甲酯磺酸鈉，對(duì)丹參酮IIA磺酸鈉原料的質(zhì)量保證具有重要意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0009] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題在于為了克服現(xiàn)有技術(shù)中丹參酸甲酯磺酸鈉提純困 難、效率低、提取量低的缺陷，提供了丹參酸甲酯磺酸鈉的制備方法和應(yīng)用。本發(fā)明的制備 方法的制備能力強(qiáng)、制備量大、周期短、純度高、效率高，并且減少了有機(jī)溶劑的使用，工藝 操作連續(xù)性強(qiáng)易于進(jìn)行質(zhì)量控制和生產(chǎn)。
[0010] 本發(fā)明通過(guò)以下技術(shù)方案解決上述技術(shù)問(wèn)題。
[0011] 本發(fā)明的丹參酸甲酯磺酸鈉的結(jié)構(gòu)如下式所示：
[0012]
[0013] 本發(fā)明提供了丹參酸甲酯磺酸鈉的制備方法，其包括下述步驟：采用高效液相反 相色譜法分離丹參酮類磺化液，即可；
[0014] 其中，高效液相反相色譜法的條件如下：
[0015] 流動(dòng)相A為0. 1 %三乙胺-水、流動(dòng)相B為0. 1 %三乙胺-甲醇；或，流動(dòng)相A為 0. 1 %二乙胺-水、流動(dòng)相B為0. 1 %二乙胺-甲醇；或，流動(dòng)相A為0. 1 %氨水、流動(dòng)相B為 甲醇；百分比為組分占流動(dòng)相的體積百分比；檢測(cè)波長(zhǎng)為271nm，保留時(shí)間為35~50min。
[0016] 其中，所述的高效液相反相色譜法較佳地包括富集純化、中間純化和精制純化，其 中，所述的富集純化的條件優(yōu)選如下：
[0017] 流動(dòng)相A為0. 1 %三乙胺-水、流動(dòng)相B為0. 1 %三乙胺-甲醇；或，流動(dòng)相A為 0. 1 %二乙胺-水、流動(dòng)相B為0. 1 %二乙胺-甲醇；或，流動(dòng)相A為0. 1 %氨水、流動(dòng)相B為 甲醇；流速為80~120mL/min(較佳地為100mL/min)，檢測(cè)波長(zhǎng)為271nm;
[0018] 將丹參酮類磺化液與流動(dòng)相A按體積比為1:4的混合物上樣25min，80%流動(dòng)相 A+20 %流動(dòng)相B(體積分?jǐn)?shù)）平衡lmin，以流動(dòng)相A和流動(dòng)相B按照下述體積比進(jìn)行線性梯 度洗脫40min:80%A+20%B- 40%A+60%B，再以100%流動(dòng)相B再生lOmin，收集保留 時(shí)間為42~50min的洗脫液得到富集純化樣品溶液；
[0019] 采用美國(guó)Varian公司的Pr印StarSD-I制備系統(tǒng)和L&L4002色譜柱（內(nèi)徑50mm)， 裝Varian公司的PLRP-S反相C18聚合物填料160.Og(粒徑10ym，孔徑IOnm)，動(dòng)態(tài)軸向 壓縮系統(tǒng)裝填至壓力650psi，靜態(tài)鎖緊至柱床高度25cm。
[0020] 其中，所述的中間純化的條件優(yōu)選如下：
[0021] 流動(dòng)相A為0. 1 %三乙胺-水、流動(dòng)相B為0. 1 %三乙胺-甲醇；或，流動(dòng)相A為 0. 1 %二乙胺-水、流動(dòng)相B為0. 1 %二乙胺-甲醇；或，流動(dòng)相A為0. 1 %氨水、流動(dòng)相B為 甲醇；流速為80~120mL/min(較佳地為100mL/min)，檢測(cè)波長(zhǎng)為271nm;
[0022] 將上述富集純化樣品溶液與水按體積比為1:1的混合物上樣lOmin，80%流動(dòng)相 A+20%流動(dòng)相B(體積分?jǐn)?shù)）平衡lOmin，以流動(dòng)相A和流動(dòng)相B按照下述體積比進(jìn)行線性 梯度洗脫40min:80%A+20%B- 40%A+60%B，再以100%流動(dòng)相B再生lOmin，收集保 留時(shí)間為36~44min的洗脫液得到中間純化樣品溶液；
[0023] 采用美國(guó)Varian公司的Pr印StarSD-I制備系統(tǒng)和L&L4002色譜柱（內(nèi)徑50mm)， 裝Varian公司的PLRP-S反相C18聚合物填料160.Og(粒徑10ym，孔徑IOnm)，動(dòng)態(tài)軸向 壓縮系統(tǒng)裝填至壓力650psi，靜態(tài)鎖緊至柱床高度25cm。
[0024] 其中，所述的精制純化的條件優(yōu)選如下：
[0025] 流動(dòng)相A為0. 1 %三乙胺-水、流動(dòng)相B為0. 1 %三乙胺-甲醇；或，流動(dòng)相A為 0. 1 %二乙胺-水、流動(dòng)相B為0. 1 %二乙胺-甲醇；或，流動(dòng)相A為0. 1 %氨水、流動(dòng)相B為 甲醇；流速為20~30mL/min(較佳地為25mL/min)，檢測(cè)波長(zhǎng)為271nm;
[0026] 將上述中間純化樣品溶液與水按體積比為1:1的混合物上樣lOmin，80%流動(dòng)相 A+20%流動(dòng)相B(體積分?jǐn)?shù)）平衡lOmin，以流動(dòng)相A和流動(dòng)相B按照下述體積比進(jìn)行線性 梯度洗脫30min:80%A+20%B- 50%A+50%B，再以100%流動(dòng)相B再生lOmin，收集保 留時(shí)間為45~50min的洗脫液得到精制純化樣品溶液；
[0027] 采用美國(guó)Varian公司的Pr印StarSD-I制備系統(tǒng)和L&L4001色譜柱（內(nèi)徑25mm)， 裝瑞典Kromasil公司的反相C18硅膠填料100.Og(粒徑10ym，孔徑IOnm)，動(dòng)態(tài)軸向壓縮 系統(tǒng)裝填至壓力650psi，靜態(tài)鎖緊至柱床高度25cm。
[0028] 其中，所述的丹參酮類磺化液可為本領(lǐng)域常規(guī)的丹參進(jìn)行磺化反應(yīng)的反應(yīng)液，較 佳地通過(guò)下述步驟制得：
[0029] (1)將丹參提取物溶解于冰醋酸-乙酸酐的混合溶液中，再加入濃硫酸-冰醋酸的 混合溶液，進(jìn)行反應(yīng)得到反應(yīng)液；
[0030] (2)將石油醚、二氯甲烷和水的混合溶液加入步驟（1)的反應(yīng)液，再加入氯化鈉溶 液，抽濾，得到濾餅；
[0031] (3)用石油醚-二氯甲烷的混合溶液浸泡步驟（2)的濾餅，抽濾干燥得粗品；
[0032] (4)用甲醇溶解步驟（3)的粗品，活性炭過(guò)濾，濾液濃縮，冷卻結(jié)晶過(guò)濾，濾液即為 丹參酮類磺化液。
[0033] 其中，所述的冰醋酸-乙酸酐的混合溶液與所述的丹參提取物的體積質(zhì)量比較佳 地為7~9ml/g。
[0034] 其中，所述的冰醋酸-乙酸酐的混合溶液較佳地為冰醋酸與乙酸酐體積比為1 : (2~3)的混合溶液。
[0035] 其中，所述的濃硫酸-冰醋酸的混合溶液較佳地為濃硫酸與冰醋酸體積比為1:1 的混合溶液，所述的濃硫酸的質(zhì)量分?jǐn)?shù)較佳地為98 %。
[0036] 其中，所述的石油醚、二氯甲烷和水的混合溶液較佳地為石油醚、二氯甲烷和水的 體積比為1:2: (2~2. 5)的混合溶液。
[0037] 其中，所述的石油醚-二氯甲烷的混合溶液較佳地為石油醚與二氯甲烷體積比為 1:3的混合溶液。
[0038] 其中，所述的丹參提取物可為本領(lǐng)域常規(guī)方法得到的丹參提取物，較佳地通過(guò)下 述步驟制得：將丹參用乙醇提取，過(guò)濾，濾液濃縮，干燥，即得。
[0039] 本發(fā)明中，色譜柱的柱溫較佳地為10~30°C。
[0040] 本發(fā)明的制備方法中，所述的精致純化結(jié)束后還可包括凍干過(guò)程。所述的凍干過(guò) 程優(yōu)選包括如下步驟：將所述的精制純化樣品溶液濃縮，冷凍干燥，即得純凈的丹參酸甲酯 磺酸鈉。所述的減壓濃縮的壓力較佳地為-0. 〇8MPa~-0.1 MPa，所述的減壓濃縮的溫度較 佳地為30~40°C，所述的真空冷凍干燥較佳地采用上海東富龍科技股份有限公司的LYO-I真空冷凍干燥機(jī)進(jìn)行。
[0041] 本發(fā)明中0. 1 %三乙胺-水是指三乙胺的體積分?jǐn)?shù)為0. 1 %的三乙胺水溶液， 0. 1%三乙胺-甲醇是指三乙胺的體積分?jǐn)?shù)為0. 1%的三乙胺甲醇溶液，0. 1%二乙胺-水是 指二乙胺的體積分?jǐn)?shù)為0.1%的二乙胺水溶液，0.1%二乙胺-甲醇是指指二乙胺的體積分 數(shù)為0. 1 %的二乙胺甲醇溶液，0. 1 %氨水是指氨的體積分?jǐn)?shù)為0. 1 %的氨水溶液。
[0042] 本發(fā)明還提供了上述丹參酸甲酯磺酸鈉作為標(biāo)準(zhǔn)品在檢測(cè)藥品中丹參酸甲酯磺 酸鈉含量的應(yīng)用。
[0043] 其中，所述的藥品較佳地為丹參酮IIA磺酸鈉原料藥。
[0044] 其中，所述的應(yīng)用較佳地包括下述步驟：將丹參酮IIA磺酸鈉原料藥溶液和丹參 酸甲酯磺酸鈉標(biāo)準(zhǔn)品溶液分別進(jìn)行高效液相色譜檢測(cè)，根據(jù)丹參酸甲酯磺酸鈉標(biāo)準(zhǔn)品色譜 圖的保留時(shí)間確定丹參酮IIA磺酸鈉原料藥色譜圖中相關(guān)物質(zhì)的峰，并根據(jù)峰面積計(jì)算丹 參酮IIA磺酸鈉原料藥中丹參酸甲酯磺酸鈉的含量。
[0045] 其中，所述的高效液相色譜的條件優(yōu)選