一種測定含氯消毒廢水中大腸桿菌殘留的新方法
【專利說明】一種測定含氯消毒廢水中大腸桿菌殘留的新方法 【技術領域】
[0001] 本發(fā)明涉及水質生物檢測技術領域，具體涉及測定含氯消毒廢水中大腸桿菌殘留 的新方法。 【【背景技術】】
[0002] 大腸桿菌（dachangganjun) (Escherichiacoli)細菌門。細胞桿狀，直徑約1微 米，長約2微米，兩端鈍圓，周身具鞭毛，可運動。革蘭氏染色陰性，不形成芽孢。菌落圓形， 白色或黃白色，光滑而具閃光，低平或微凸起，邊緣整齊。最適條件下培養(yǎng)20分鐘可繁殖1 代。大腸桿菌是人和溫血動物腸道內普遍存在的細菌，是糞便中的主要菌種。一般生活在 人大腸中并不致病，可能在腸中對合成維生素 K起作用。但它侵入人體一些部位時，可引起 感染，如腹膜炎、膽囊炎、膀胱炎及腹瀉等。人在感染大腸桿菌后的癥狀為胃痛、嘔吐、腹瀉 和發(fā)熱。感染可能是致命性的，尤其是對孩子及老人。由大腸桿菌導致的疾病：一是腸道外 感染。多為內源性感染，以泌尿系感染為主；二是急性腹瀉。某些血清型大腸桿菌能引起人 類腹瀉。
[0003] 大腸桿菌（escherichia coli) -般不致病。但致病性大腸菌株能引起食物中毒。 致病性菌株能侵入腸粘膜上皮細胞，具有痢疾桿菌樣致病力。已知大腸桿菌有菌體（〇)抗 原170種，表面（K)抗原近103種，鞭毛（H)抗原60種，因而構成了許多血清型。在引起 人畜腸道疾病的血清型中，有腸致病性大腸桿菌（簡稱EPEC)、腸毒素性大腸桿菌（簡稱 ETEC)和腸侵襲性大腸桿菌（間稱EIEC)等之分，多數(shù)腸毒素性大腸桿菌都帶有F抗原。在 170種"0"型抗原血清型中約1/2左右對禽有致病性，但最多的是01、02、078、035四個血 清型。另有產(chǎn)腸毒素大腸桿菌，其腸毒素有耐熱性及不耐熱性兩種，均能使人致病。腸出血 性大腸桿菌（EHEC) 0157 :H7感染性腹瀉是近年來新發(fā)現(xiàn)的危害嚴重的腸道傳染病，它除引 起腹瀉、出血性腸炎外，還可發(fā)生溶血性尿毒綜合癥（HUS)、血栓性小板減少性紫癲（TTP) 等嚴重的并發(fā)癥。后者病情兇險，病死率高。
[0004] 依據(jù)《中華人民共和國傳染病防治法》和《消毒管理辦法》（衛(wèi)生部第27號令） 的相關規(guī)定，生活及醫(yī)療污水必須經(jīng)過無害化處理，才可以排放，其中常用的消毒處理方法 有：加氯消毒，臭氧法消毒，次氯酸鈉法、二氧化氯法消毒等，而這些廢水、污水是大腸桿菌 很重要的一個污染源，雖然經(jīng)過消毒，但由于消毒的效果與水中菌液的濃度、作用時間、消 毒劑的含量都有著重要的關系，即便是經(jīng)過消毒的廢水，也可能有大腸桿菌的殘留，對于這 些污水消毒處理的效果，有關單位會定期對其進行監(jiān)測，對此有很大的檢測市場需求，而我 國目前的水質檢測方法中只有生活飲用水GB5750. 12-2006中有大腸桿菌的相關檢測，環(huán) 保部標準HJ/T347-2007《水質糞大腸菌群的測定多管發(fā)酵法和濾膜法（試行）》中檢測 的糞大腸菌群，廢水中未發(fā)現(xiàn)大腸桿菌的相關檢測方法。由于含氯消毒劑有強氧化性，如果 參照生活飲用水的檢測方法來測定含氯消毒廢水中大腸桿菌，會使乳糖膽鹽培養(yǎng)液中的指 示劑脫色，致使實驗無法操作，因此，建立一個準確可行的含氯消毒廢水大腸桿菌的測定方 法非常必要。
[0005] 本發(fā)明建立了一種檢測含氯消毒廢水中殘留的大腸桿菌新方法，雖然消毒劑對大 腸桿菌的消毒效果很好，但由于其濃度、作用時間、菌的濃度都與消毒效果息息相關。本方 法采用測定游離余氯的量來初步判定是否有大腸桿菌殘留，再對廢水中的余氯進行還原來 測定大腸桿菌殘留。方法簡單，易于操作，污染小，準確度高。 【
【發(fā)明內容】
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[0006] 本發(fā)明的目的是解決含氯消毒廢水中大腸桿菌殘留測定的問題，用于檢測消毒廢 水中大腸桿菌的殘留，避免大腸桿菌對環(huán)境水質的生物污染，本方法成本低，污染小，準確 度高，能夠滿足檢測需求。
[0007] 本發(fā)明公開了一種測定含氯消毒廢水中大腸桿菌殘留的新方法，具體采用下述技 術方案：
[0008] (1)對樣品先進行游離余氯的測定，方法參照GB/T5750. 11-2006《生活飲用水標 準檢驗方法消毒劑指標》。
[0009] (2)根據(jù)游離余氯的值判定是否有大腸桿菌殘留可能。當游離余氯的含量小于等 于165mg/L時，大腸桿菌可能殘留，需要進一步檢測來確證。
[0010] (3)如果大腸桿菌有可能殘留，向每升水樣中加入ImL濃度為0. llg/L的硫代硫酸 鈉溶液，還原游離余氯。
[0011] (4)取水樣IOmL于IOmL雙倍乳糖蛋白胨培養(yǎng)液中，平行接種5份，36°C ± 1°C培 養(yǎng)24h±2h，如未產(chǎn)酸產(chǎn)氣則繼續(xù)培養(yǎng)24h，對產(chǎn)酸產(chǎn)氣管劃線分離于伊紅美藍瓊脂平板， 36°C ±1°C培養(yǎng)24h±2h，挑取典型和可疑菌落接種于頂ViC(用來測定大腸桿菌的生化特 征的4個實驗，參見GB4789. 38-2012《食品衛(wèi)生微生物學檢驗大腸桿菌計數(shù)》）進行生化鑒 定和革蘭氏染色，符合其特征的判定大腸桿菌檢出。
[0012] (5)當游離余氯的量為165mg/L時是大腸桿菌殘留的臨界點，本處的臨界點指水 樣的菌落總數(shù)為< 108cfu/mL，按《水和廢水監(jiān)測分析方法》（第四版增補版）5. 2. 4方法操 作，消毒時間大于2h。大于此值時，定性檢測大腸桿菌無殘留。 【【具體實施方式】】
[0013] 下面對本發(fā)明做進一步詳細說明。
[0014] 實施例1 :
[0015] 分析步驟：取營養(yǎng)肉湯300mL于無菌罐中，制備20罐，121°C滅菌15min，向每個無 菌罐中加入一環(huán)（接種環(huán)）大腸埃希氏菌液，36°C培養(yǎng)24h后，對每個無菌罐進行編號，分 別加入10%次氯酸鈉溶液，如下表所示：
[0016]
[0017] 將所有無菌罐放置2小時（消毒劑作用時間）后分別無菌取2mL用于測定游離余 氯的值參照（GB/T5750. 11-2006)，同時無菌取IOmL于IOmL雙倍乳糖蛋白胨中，平行接種5 份，36°C培養(yǎng)24h，觀察產(chǎn)酸產(chǎn)氣情況，未產(chǎn)酸產(chǎn)氣者繼續(xù)培養(yǎng)24h，將產(chǎn)酸產(chǎn)氣管挑取一環(huán) 劃線于伊紅美藍瓊脂平板上，36°C培養(yǎng)24h，觀察有無典型菌落，挑取單個典型和可疑菌落 接種于頂ViC進行生化鑒定和革蘭氏染色，36°C培養(yǎng)24h后觀察結果，大腸桿菌的生化特征 為靛基質陽性、甲基紅試驗陽性、乙酰甲基甲醇試驗陰性、檸檬酸鹽試驗陰性。具體結果如 下表。
[0020] 結果分析：當游離余氯的量為165mg/L時是大腸桿菌殘留的臨界點，本處的臨界 點指水樣的菌落總數(shù)為< 10scfu/mL，按《水和廢水監(jiān)測分析方法》（第四版增補版）5. 2. 4 方法操作，消毒時間大于2h。大于此值時，定性檢測大腸桿菌無殘留。
[0021] 實施例2:
[0022] 分析步驟：無菌取經(jīng)含氯消毒過的生活污水2mL測定游離余氯的值為164mg/L。判 定有大腸桿菌殘留，向IL水樣中加入0. llg/L的硫代硫酸鈉溶液lmL，取IOmL于雙倍乳糖 蛋白胨中，同時平行接種5份，36°C培養(yǎng)24h后產(chǎn)酸產(chǎn)氣者，挑取一環(huán)劃線于伊紅美藍平板 上，36°C培養(yǎng)24h，觀察有黑色中心，帶金屬光澤的菌落，挑取5個單菌落接種于頂ViC (用來 測定大腸桿菌的生化特征的4個實驗）進行生化鑒定和革蘭氏染色，36°C培養(yǎng)24h后，靛基 質陽性、甲基紅試驗陽性、乙酰甲基甲醇試驗陰性、檸檬酸鹽試驗陰性，革蘭氏染色為陰性 無芽孢桿菌。符合大腸桿菌的特征，判定水樣中大腸桿菌檢出。
[0023] 上述實施例僅供說明本發(fā)明之用，而并非是對本發(fā)明專利的限制；應當指出的是， 對于本領域的普通技術人員，在不脫離本發(fā)明構思范圍的情況下，還可以作出各種變化和 變型，這些都屬于本發(fā)明的保護范圍；因此，凡跟本發(fā)明權利要求范圍所做的變化與修飾， 均應屬于本發(fā)明權利要求的覆蓋范圍。
【主權項】
1. 一種測定合氯消毒廢水中大腸桿菌殘留的新方法，其特征包括如下步驟： (1) 對樣品先進行游離余氯的測定； (2) 根據(jù)游離余氯的值是否達到臨界點來判定是否有大腸桿菌殘留； (3) 如果游離余氯的值小于臨界點，則向每升水樣中加入lmL濃度為0.llg/L的硫代硫 酸鈉溶液，還原游離余氯； (4) 取水樣10mL于10mL雙倍乳糖蛋白胨培養(yǎng)液中，平行接種五份，36°C±1°C培養(yǎng) 24h±2h，如未產(chǎn)酸產(chǎn)氣則繼續(xù)培養(yǎng)24h，對產(chǎn)酸產(chǎn)氣管劃線分離于伊紅美藍瓊脂平板， 36°C±1°C培養(yǎng)24h±2h，挑取典型和可疑菌落進行頂ViC(用來測定菌的生化特征的4個 實驗）生化鑒定和革蘭氏染色，符合其特征的判定大腸桿菌檢出； (5) 大腸桿菌殘留的臨界點是游離余氯的量為165mg/L，本處的臨界點指消毒時間大 于2h，水樣中菌落總數(shù)< 10scfu/mL;游離余氯的量大于165mg/L時，底定性檢測大腸桿菌 無殘留。2. 根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于，對每升水樣中加入lmL濃度為0.llg/L的 硫代硫酸鈉溶液還原游離余氯。
【專利摘要】本方法公開了一種測定含氯消毒廢水中大腸桿菌殘留的新方法，包括以下步驟：1)先測定水中游離余氯的量。2)根據(jù)游離余氯的值初步判定是否有大腸桿菌殘留的可能。3)向大腸桿菌有可能殘留的水樣中加入一定量濃度為0.11g/L的硫代硫酸鈉還原游離余氯。4)對水樣進行增菌、分離、生化鑒定，符合其特征的報告大腸桿菌檢出。本發(fā)明的方法簡單、易于操作，污染小，準確度高、干擾小。
【IPC分類】G01N33/18
【公開號】CN105259323
【申請?zhí)枴緾N201510435950
【發(fā)明人】宋薇, 徐麗清
【申請人】譜尼測試科技(天津)有限公司
【公開日】2016年1月20日
【申請日】2015年7月22日