一種炔諾酮衍生物及其中間體的雜質(zhì)檢測分析方法【
技術(shù)領(lǐng)域：
】[0001]本發(fā)明涉及一種醬體化合物的雜質(zhì)分析方法，特別是涉及一種快諾麗衍生物及其中間體的雜質(zhì)檢測分析方法?！?br>背景技術(shù)：
】[0002]快諾麗類藥物為一類孕激素，可W用來治療經(jīng)前綜合癥、痛經(jīng)、經(jīng)期出血量過多、經(jīng)期不正常、更年期綜合癥，也常用來作為口服短效避孕藥?？熘Z麗是首個可W合成的口服高效孕激素，其醋化衍生物具有同樣的藥理作用，而且延長了作用的時間。常見的快諾麗醋化衍生物有醋酸快諾麗、己酸快諾麗、庚酸快諾麗，辛酸快諾麗等，其中庚酸快諾麗與戊酸雌二醇復(fù)方注射液作為長效避孕藥可W持續(xù)避孕1個月，是一種非常理想的避孕制劑。作為復(fù)方庚酸快諾麗注射液主要成分的庚酸快諾麗，其雜質(zhì)檢測方法各國藥典均沒有收載，且文獻(xiàn)報告極少。[0003]現(xiàn)有技術(shù)中關(guān)注點多為庚酸快諾麗的制劑含量檢測方法，或者使用液質(zhì)聯(lián)用檢測方法檢測快基類醬體化合物，諸如：文獻(xiàn)"薄層掃描測定復(fù)方快諾麗庚酸醋注射液中快諾麗庚酸醋的薄層層析條件探討"，金宜効，《中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)》，1988，3:004,公開了用薄層掃描測定復(fù)方快諾麗庚酸醋注射液中主藥和兩個輔料的方法。[0004]文獻(xiàn)"HPLCAnalysisofInjectableContraceptivePreparationContainingNorethisteroneEnanthateandEstradiolValerate'，，Journalofliquidc虹omatography,1990，13(17):3473-3479,公開了一種復(fù)方庚酸快諾麗注射液的高效液相色譜分析方法，方法為；色譜柱；2Z化baX-Cgcolumn(250X46mmI.化）；檢測波長：222nm;柱溫；15°C;流動相；甲醇；水=85;1。此方法主要用來分析復(fù)方庚酸快諾麗注射液中庚酸快諾麗與戊酸雌二醇的含量。[0005][0006]眾所周知，藥物雜質(zhì)對用藥安全影響非常大，藥物副作用在很大比例上都來自雜質(zhì)的問題。藥物雜質(zhì)來源一般包括藥物制備工藝中的中間體、副產(chǎn)物W及降解產(chǎn)物?，F(xiàn)有公開文獻(xiàn)中研究對象多為庚酸快諾麗的制劑含量檢測方法，或者使用液質(zhì)聯(lián)用檢測方法檢測快基類醬體化合物，對于實際原料藥生產(chǎn)過程中潛在的雜質(zhì)，如中間體、降解產(chǎn)物等均沒有涉及，也沒有相關(guān)的雜質(zhì)分析方法可W同時適用于快諾麗衍生物產(chǎn)品和合成該類產(chǎn)品所涉及到的中間體的雜質(zhì)檢測?！?br/>發(fā)明內(nèi)容】[0007]針對上述現(xiàn)有技術(shù)存在的不足和缺點，本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種快諾麗衍生物及其中間體的HPLC雜質(zhì)分析方法。該方法研究參照并符合《中國藥典》2010版二部附錄VD對高效液相色譜法的規(guī)定。[0008]具體說來，發(fā)明人提供如下的技術(shù)方案：一種快諾麗衍生物及其中間體的雜質(zhì)檢測分析方法，包括：(OHPLC色譜分析主要參數(shù)：a、色譜柱選用十八烷基娃焼鍵合硅膠為填充劑的色譜柱；K流動相梯度洗脫，其中；流動相的組成為水、甲醇和己臘，0~25min，按體積百分比，流動相水：甲醇：己臘=45%~20%:0%~35%:30%~73%，水+己醇+己臘=100〇/〇;C、檢測波長為230~254nm;(2)檢測方法：取測試樣品快諾麗衍生物或其中間體適量，精密稱定甲醇溶解并稀釋成一定濃度的樣品溶液，搖勻，進(jìn)樣，在適當(dāng)流速和柱溫下進(jìn)行高效液相色譜分析，記錄色譜圖。[0009]作為優(yōu)選，所述的快諾麗衍生物選自符合式I結(jié)構(gòu)的化合物，所述的中間體選自符合式II結(jié)構(gòu)的化合物，其中，R為-COCH3,-C0(CH2)4CH3,-C0(CH2)5CH3,-C0(CH2)eCH3;其中R'為-Η,-CH2OH。[0010]作為優(yōu)選，所述的步驟（2)中流速為1~2ml/min。更優(yōu)選1.5ml/min。[0011]作為優(yōu)選，所述的步驟（2)中柱溫為20~4(TC。更優(yōu)選3(TC。[001引作為優(yōu)選，所述的樣品溶液的濃度為0.5~2mg/ml。更優(yōu)選Img/ml。[0013]作為優(yōu)選，所述的進(jìn)樣中的進(jìn)樣量為?Τ20μL。更優(yōu)選10μL。[0014]作為優(yōu)選，所述的流動相梯度洗脫之后，進(jìn)行第二梯度洗脫；25~50min，水、甲醇和己臘組成流動相，梯度洗脫的體積百分比為：流動相水：甲醇：己臘=40%~0%:35%~0〇/〇:30%~100%，水+甲醇+己臘=100〇/〇。[0015]更優(yōu)選的是，所述的第二梯度洗脫之后，進(jìn)行第Η梯度洗脫；50~60min，水、甲醇和己臘組成流動相，梯度洗脫的體積百分比為：流動相水：甲醇：己臘=0%~40%:0%:100%~60%，水+甲醇+己臘=100〇/〇。[0016]本發(fā)明還提供該了一種庚酸快諾麗及其中間體的HPLC雜質(zhì)檢測分析方法：a、色譜柱選用十八烷基娃焼鍵合硅膠為填充劑的色譜柱；K流動相梯度洗脫，其中；流動相的組成為水、甲醇和己臘，0~25min，按體積百分比，流動相水：甲醇：己臘=45%~20%:0%~35%:30%~73%，水+甲醇+己臘=100〇/〇;C、檢測波長為230-254nm;t取庚酸快諾麗或其中間體1適量，精密稱定甲醇溶解并稀釋成濃度為0.5-2mg/ml的樣品溶液，搖勻，進(jìn)樣10μL在l-2ml/min的流速和25-4(TC的柱溫下進(jìn)行高效液相色譜分析，記錄色譜圖，所述的中間體為符合式?結(jié)構(gòu)的化合物，其中R'為-Η，-邸2地。[0017]作為優(yōu)選，在所述流動相梯度洗脫之后，進(jìn)行第二梯度洗脫；25~50min，水、甲醇、己臘Η相流動相梯度洗脫的體積百分比為：流動相水：甲醇：己臘=40%~0%:35%~0〇/〇:30%~100%，水+甲醇+己臘=100〇/〇;作為更優(yōu)選，在所述第二梯度洗脫之后，進(jìn)行第Η梯度洗脫；50~60min，水、甲醇、己臘Η相流動相梯度洗脫的體積百分比為：流動相水：甲醇：己臘=0%~40%:0%:100%~60%，水+甲醇+己臘=100%。[001引本發(fā)明中，作為優(yōu)選的檢測波長為240皿。[0019]本發(fā)明的雜質(zhì)檢測分析方法，僅第一梯度的洗脫方法就能夠?qū)崿F(xiàn)主成分與雜質(zhì)有效分離，檢測時間短，可大大提高檢測效率。[0020]本發(fā)明的雜質(zhì)檢測分析方法，第一梯度和第二梯度的洗脫方法能夠?qū)崿F(xiàn)主成分與雜質(zhì)有效分離，較快速準(zhǔn)確得到樣品中主要雜質(zhì)及雜質(zhì)總量結(jié)果，同時可W更有效地監(jiān)控樣品儲存過程中出現(xiàn)單個雜質(zhì)增大的情況。[0021]本發(fā)明的雜質(zhì)檢測分析方法，Η個梯度的洗脫方法，能夠?qū)崿F(xiàn)主成分和可能存在的所有雜質(zhì)的有效分離。[0022]在實際應(yīng)用中因需求不同而對雜質(zhì)的關(guān)注程度不同，一般藥典方法對主要雜質(zhì)及雜質(zhì)總量有要求，而對單個小雜質(zhì)并不要求準(zhǔn)確定量，而在進(jìn)一步提高產(chǎn)品質(zhì)量的研發(fā)或生產(chǎn)過程中會對單個小雜質(zhì)有不同的要求，因此本發(fā)明包含了上述Η種不同的梯度體系。[0023]W庚酸快諾麗及其中間體為例，發(fā)明人對本發(fā)明方法的精密性和有效性做了驗證。[0024]一種庚酸快諾麗及其中間體的HPLC雜質(zhì)檢測分析方法：a、色譜柱選用十八烷基娃焼鍵合硅膠為填充劑的色譜柱；K流動相中A為水、B為甲醇、C為己臘，流動相梯度洗脫，0~25min，按體積百分比，流動相A:B:C=45%~20%:0%~35%:30%~73%，A+B+C=100〇/〇;C、檢測波長為240nm;t取庚酸快諾麗或其中間體1;適量，精密稱定甲醇溶解并稀釋成濃度為Img/ml的樣品溶液，搖勻，進(jìn)樣10μL在1.5ml/min的流速和3(TC的柱溫下進(jìn)行高效液相色譜分析，記錄色譜圖，所述的中間體為符合式?結(jié)構(gòu)的化合物，其中R'為-Η，-邸2地。[0025]上述的庚酸快諾麗及其中間體的HPLC雜質(zhì)檢測分析方法，在所述梯度洗脫之后，進(jìn)行第二梯度洗脫：25~50min，水、甲醇、己臘Η相流動相梯度洗脫的體積百分比為：流動相A:B:C=40%~0%:35%~0%:30%~100%，A+B+C=100〇/〇;上述的庚酸快諾麗及其中間體的HPLC雜質(zhì)檢測分析方法，在所述第二梯度洗脫之后，進(jìn)行第Η梯度洗脫；50~60min，水、甲醇、己臘Η相流動相梯度洗脫的體積百分比為：流動相A:Β:C=0%~40%:0%:100%~60%，A+B+C=100〇/〇。[0026]按表1程序梯度洗脫的方法對上述的庚酸快諾麗及其中間體的HPLC雜質(zhì)檢測分析方法進(jìn)行全面驗證。[0027]表1驗證項目包括專屬性、系統(tǒng)適用性與精密度、準(zhǔn)確度、線性、重復(fù)性、檢測限、定量限、耐用性等項目。驗證結(jié)果，在專屬性試驗中，空白溶劑對樣品檢測無干擾，雜質(zhì)己帰酸快諾麗、辛酸快諾麗、己酸快諾麗、醋酸快諾麗、快諾麗及各相鄰雜質(zhì)與庚酸快諾麗之間的分離度大于1.5;系統(tǒng)適用性與精密度試驗中各個雜質(zhì)量的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD)均小于2.0%;線性試驗中，庚酸快諾麗、己帰酸快諾麗、辛酸快諾麗、己酸快諾麗、醋酸快諾麗、快諾麗在相應(yīng)的測試濃度范圍內(nèi)相關(guān)系數(shù)均大于0.999;方法重復(fù)性實驗中己帰酸快諾麗、己酸快諾麗、辛酸快諾麗、單個未知雜質(zhì)的RSD均小于10.0%，雜質(zhì)總量的RSD小于5.0%，中間精密度試驗結(jié)果良好；方法準(zhǔn)確度試驗結(jié)果表明，其相關(guān)雜質(zhì)的回收率均在90%~110%的范圍內(nèi)；同時通過耐用性試驗結(jié)果表明色譜條件的微小變化不會影響測定結(jié)果的準(zhǔn)確性。結(jié)果均符合中國藥典2010版相關(guān)規(guī)定，證明該方法精密、有效。[0028]由于快諾麗衍生物結(jié)構(gòu)上只在醋鍵碳鏈長短及雙鍵位置有區(qū)別，主要合成路線基本一致，可能存在雜質(zhì)情況類似，所W本發(fā)明的分析方法同時可W作為快諾麗衍生物及其中間體的雜質(zhì)分析，所述的快諾麗衍生物為庚酸快諾麗、辛酸快諾麗、醋酸快諾麗、己酸快諾麗，所述的中間體為19-去甲基孕醬-4-帰-3,17-二麗、19-居基孕醬-4-帰-3,17-二麗。[0029]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有W下優(yōu)點：1、本發(fā)明使用普通四元泉高效液相色譜儀即可，對設(shè)備無特殊要求。[0030]2、本發(fā)明流動相所選擇的介質(zhì)甲醇、己臘、水為最常用的高效液相流動相，簡單易得。[0031]3、本發(fā)明操作過程簡單，對環(huán)境如溫度、濕度等無特殊要求。[0032]4、本發(fā)明包含Η種不同的梯度體系，僅第一梯度的洗脫方法能夠?qū)崿F(xiàn)主成分與雜質(zhì)有效分離，檢測時間短，大大提高檢測效率；第一梯度和第二梯度的洗脫方法能夠?qū)崿F(xiàn)主成分與雜質(zhì)有效分離，較快速準(zhǔn)確得到樣品中主要雜質(zhì)及雜質(zhì)總量結(jié)果，同時可W更有效地監(jiān)控樣品儲存過程中出現(xiàn)單個雜質(zhì)增大的情況；Η個梯度的洗脫方法，能夠?qū)崿F(xiàn)主成分和可能存在的所有雜質(zhì)的有效分離。Η種不同的梯度體系，可W滿足研發(fā)或生產(chǎn)過程中不同的檢測分析需求。[0033]5、本發(fā)明適用性好，可W廣泛用于快諾麗衍生物的雜質(zhì)分析，尤其適用于庚酸快諾麗的雜質(zhì)分析，同時可用于快諾麗衍生物中間體的雜當(dāng)前第1頁1 2