一種分離和測(cè)定泊馬度胺中間體有關(guān)物質(zhì)的液相色譜法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于分析化學(xué)領(lǐng)域，一種分離和測(cè)定泊馬度胺中間體有關(guān)物質(zhì)的液相色譜 法。
【背景技術(shù)】
[0002] 泊馬度胺（pomalidomide)是美國(guó)Celgene制藥公司開(kāi)發(fā)的新型免疫調(diào)節(jié)劑，商品 名為Pomalyst。2013年2月8日，美國(guó)食品和藥品監(jiān)督管理局（FDA)批準(zhǔn)該藥由于治療復(fù) 發(fā)性及難治性多發(fā)性骨髓瘤。
[0003] 泊馬度胺中間體化學(xué)名為3-氨基鄰苯二甲酸，分子式為CsH7N04，其結(jié)構(gòu)式為：
[0004]
[0005] 在合成該化合物的過(guò)程中，有幾步重要的雜質(zhì)可能由于去除不完全而影響藥物的 純度和質(zhì)量，對(duì)于泊馬度胺中間體的合成主要控制的有關(guān)物質(zhì)有3個(gè)，分別是有關(guān)物質(zhì)1 : 3-aminophthalicanhydride、有關(guān)物質(zhì) 2:4_amin〇-2-(1，3_diox〇-l, 3-dihydroisobenzo furan-4-yl)isoindoline-l, 3-dione、有關(guān)物質(zhì) 3:3-(4 -amino-1, 3-dioxoisoindolin-2-y 1)phthalicacid,結(jié)構(gòu)分別如下圖由左至右所示：
[0006]
[0007]有關(guān)物質(zhì) 1 (Impurityl)
[0008]
[0009]有關(guān)物質(zhì) 2 (Impurity2)
[0010]
[0011]有關(guān)物質(zhì) 3 (Impurity3)
[0012] 對(duì)于合成泊馬度胺中間體引入的雜質(zhì)在原料中是需要進(jìn)行質(zhì)量控制的，因此，實(shí) 現(xiàn)泊馬度胺中間體及其有關(guān)物質(zhì)的分離，在泊馬度胺的合成及其質(zhì)量控制方面具有重要的 現(xiàn)實(shí)意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0013] 本發(fā)明的目的在于提供一種分析泊馬度胺中間體化學(xué)純度以及分離其有關(guān)物質(zhì) 的方法，從而實(shí)現(xiàn)泊馬度胺中間體與其有關(guān)物質(zhì)的分離和測(cè)定，保證泊馬度胺及含泊馬度 胺制劑的質(zhì)量控制。
[0014] 本發(fā)明的技術(shù)方案為：
[0015] -種液相色譜法分離測(cè)定泊馬度胺中間體有關(guān)物質(zhì)的方法，包括以下步驟：
[0016] (1)供試品洛液和對(duì)照品洛液的制備；
[0017] ⑵通過(guò)高效液相色譜測(cè)定檢測(cè)所述供試品溶液和對(duì)照品溶液；
[0018] 其中色譜條件為：以十八烷基硅烷鍵合硅膠（250X4. 0mm，5μm)為填充劑，以10: 90(v/v)的乙腈/磷酸緩沖液pH= 2. 6為流動(dòng)相A,以90:10(v/v)的乙腈/磷酸緩沖液 pH= 2. 6為流動(dòng)相B，梯度洗脫，柱溫為25~40°C，優(yōu)選30°C，流速為0. 8~1. 2ml/min，優(yōu) 選1.OmL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm。
[0019] 進(jìn)一步地，所述供試品溶液和對(duì)照品溶液的制備包括：取泊馬度胺中間體待測(cè)樣 品，加溶劑制成濃度為lmg/ml的溶液，作為供試品溶液；量取所述供試品溶液，加溶劑制成 濃度為〇. 〇lmg/ml的溶液，作為對(duì)照溶液。
[0020] 進(jìn)一步地，所述溶劑為體積比為50 :50的所述流動(dòng)相A和流動(dòng)相B。
[0021] 進(jìn)一步地，所述梯度洗脫的條件為：以體積比計(jì)，0分鐘時(shí)，流動(dòng)相A為90%，流動(dòng) 相B為10 % ;5分鐘時(shí)，流動(dòng)相A為90 %，流動(dòng)相B為10 % ;35分鐘時(shí)，流動(dòng)相A為20 %， 流動(dòng)相B為80 % ;36分鐘時(shí)，流動(dòng)相A為90 %，流動(dòng)相B為10 % ;40分鐘時(shí)，流動(dòng)相A為 90%，流動(dòng)相B為10%。
[0022] 進(jìn)一步地,所述色譜柱為Kormasil色譜柱。
[0023] 本發(fā)明還進(jìn)一步提供了所述方法在監(jiān)控泊馬度胺或含泊馬度胺制劑的質(zhì)量中的 用途。
【附圖說(shuō)明】
[0024] 圖1是泊馬度胺中間體樣品的色譜圖。
[0025] 其中，保留時(shí)間為2.319的色譜峰為有關(guān)物質(zhì)Ulmpurityl)、保留時(shí)間為15.873 有關(guān)物質(zhì)2(Impurity2)及保留時(shí)間為16. 358的色譜峰為有關(guān)物質(zhì)3(Impurity3)。
【具體實(shí)施方式】
[0026] 通過(guò)以下實(shí)施例可以進(jìn)一步理解本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)和特點(diǎn)，不應(yīng)該理解為是對(duì)本發(fā)明 范圍的限制。
[0027] 以下實(shí)施例中所用儀器和試劑，除特殊說(shuō)明以外均為普通市售。
[0028] 儀器與試劑
[0029] 儀器：Agilentl260series高效液相色譜儀。
[0030]色譜柱：C18(Kromasi1250*4. 6mm5μm)〇
[0031] 供試品：深圳海王藥業(yè)有限公司生產(chǎn)的泊馬度胺中間體（合成路線(xiàn)：3-硝基鄰苯 二甲酸經(jīng)鈀碳加氫還原得3-氨基鄰苯二甲酸，再與3-氨基-2,6-哌啶二酮縮合得到泊馬 度胺）。
[0032] 試劑：色譜級(jí)乙腈（Merck公司），磷酸（分析純）。
[0033] 溶劑：體積為（50 :50v/v)的流動(dòng)相A和流動(dòng)相B。
[0034]【實(shí)施例1】色譜條件與系統(tǒng)適用性的篩選
[0035] 1.1流動(dòng)相pH值的選擇
[0036] 選擇流動(dòng)相pH值為2. 0、2. 6和3. 0進(jìn)行考察，最后確定流動(dòng)相pH值為2. 6,流動(dòng) 相pH值選擇結(jié)果見(jiàn)表1。
[0037] 表1.流動(dòng)相pH值選擇結(jié)果
[0038]
[0039] 1.2流動(dòng)相的選擇
[0040] 參照相關(guān)文獻(xiàn)并結(jié)合試驗(yàn)具體情況，先后選用乙腈-磷酸緩沖液（用磷酸調(diào)pH值 為2. 6)、乙腈-醋酸緩沖液（用磷酸調(diào)pH值為2. 6)，乙腈-甲酸緩沖液（用甲酸調(diào)pH值 為2. 6)、乙腈-TFA緩沖液
[0041](用TFA調(diào)pH值為2. 6)，各流動(dòng)相條件下的分離效果如下（見(jiàn)表2
[0042] 表2.流動(dòng)相選擇結(jié)果
[0043]
[0044] 1· 3檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇
[0045] 選擇檢測(cè)波長(zhǎng)值為240nm、247nm、250nm及254nm進(jìn)行考察，最后確定檢測(cè)波長(zhǎng)為 254nm，檢測(cè)波長(zhǎng)選測(cè)結(jié)果見(jiàn)表3
[0046] 表3.檢測(cè)波長(zhǎng)選擇結(jié)果
[0047]
[0048] 為了檢出更多的雜質(zhì)，以更好的控制泊馬度胺中間體的質(zhì)量，因此選擇254nm為 泊馬度胺中間體有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)波長(zhǎng)。
[0049] 1.4溶劑的選擇
[0050] 1. 4. 1泊馬度胺中間體在甲醇中的穩(wěn)定性考察
[0051] 考察了泊馬度胺中間體在甲醇溶液中穩(wěn)定性，所配制溶液分別于0、1、2、4、8小時(shí) 注入液相色譜儀，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表4
[0052] 表4.溶劑選擇選擇結(jié)果
[0053]
[0054] 泊馬度胺中間體在甲醇中不穩(wěn)定，主峰逐漸降解成RRT:4. 64雜質(zhì)，因此不能使用 甲醇作為溶解泊馬度胺中間體的溶劑。
[0055] 1. 4. 2泊馬度胺中間體在乙腈中的穩(wěn)定性考察
[0056] 考察了泊馬度胺中間體在乙腈溶液中穩(wěn)定性，所配制溶液分別于0、1、2、8、12小 時(shí)注入液相色譜儀，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表5
[0057] 表5.溶劑選擇選擇結(jié)果
[0058]
[0059] 泊馬度胺中間體（3-氨基鄰苯二甲酸）在乙腈中比較穩(wěn)定，相對(duì)保留時(shí)間為4.64 質(zhì)峰面積逐漸增大。因此配成溶液后在1小時(shí)內(nèi)進(jìn)樣。
[0060] 色譜條件的確定：經(jīng)上述選擇試驗(yàn)，確定的色譜條件為：以十八烷基硅烷鍵合硅 膠（250X4. 0mm，5μm)為填充劑，以乙腈/磷酸緩沖液pH= 2. 6 (10 :90)為流動(dòng)相A，以乙 腈/磷酸緩沖液pH= 2. 6 (90:10)為流動(dòng)相B，梯度洗脫，柱溫為25°C，流速為lml/min，檢 測(cè)波長(zhǎng)為254nm;所述的梯度洗脫條件為：以體積比計(jì)，0分鐘時(shí)，流動(dòng)相A為90%，流動(dòng)相 B為10% ;5分鐘時(shí)，流動(dòng)相A為90%，流動(dòng)相B為10% ;35分鐘時(shí)，流動(dòng)相A為20%，流動(dòng) 相B為80% ;36分鐘時(shí)，流動(dòng)相A為90%，流動(dòng)相B為10% ;40分鐘時(shí)，流動(dòng)相A為90%， 流動(dòng)相B為10%。
[0061]【實(shí)施例2】供試品溶液的制備
[0062] 稱(chēng)取泊馬度胺中間體10mg，置10ml量瓶中，加溶劑溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾 過(guò)，取續(xù)濾液，即得。
[0063]【實(shí)施例3】泊馬度胺中間體樣品有關(guān)物質(zhì)測(cè)定
[0064] 采用實(shí)施例2所述方法制備供試品溶液，稱(chēng)取泊馬度胺中間體10mg，置10ml量瓶 中，加溶劑溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，作為供試品溶液；精密量取供試品溶 液lml置100ml量瓶中，加溶劑至刻度，搖勻，作為對(duì)照溶液。在下列選定的色譜條件下：以 十八烷基硅烷鍵合硅膠（250X4. 0mm，5μm)為填充劑，以乙腈/磷酸緩沖液pH= 2. 6 (10 : 90)為流動(dòng)相A，以乙腈/磷酸緩沖液pH= 2. 6 (90:10)為流動(dòng)相B，梯度洗脫，柱溫為25°C， 流速為lml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm;理論板數(shù)按泊馬度胺中間體3-氨基鄰苯二甲酸峰計(jì)算 應(yīng)不低于2000,主峰與相鄰雜質(zhì)峰的分離度應(yīng)大于1. 5。精密量取對(duì)照溶液10μ1注入液 相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測(cè)靈敏度，使主成分色譜峰高約為滿(mǎn)量程的10~20 %，再精密量取供試 品溶液10μ1注入液相色譜儀，記錄色譜圖至泊馬度胺中間體3-氨基鄰苯二甲酸峰保留時(shí) 間的10倍，供試品溶液色譜圖中如有雜質(zhì)峰，量取各雜質(zhì)峰面積的和，不得大于對(duì)照溶液 主峰面積的6倍（6%)。HPLC結(jié)果顯示，泊馬度胺中間體3-氨基鄰苯二甲酸的保留時(shí)間為 3. 4min，如圖1所示。分別對(duì)三個(gè)批次（20140301、20140401、20140501)的泊馬度胺中間體 進(jìn)行測(cè)定，其中，泊馬度胺中間體有關(guān)物質(zhì)的測(cè)定結(jié)果如下表6所示。
[0065] 表6.泊馬度胺中間體有關(guān)物質(zhì)測(cè)定結(jié)果
[0066]
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種液相色譜法分離測(cè)定泊馬度胺中間體有關(guān)物質(zhì)的方法，包括以下步驟： (1) 供試品洛液和對(duì)照品洛液的制備； (2) 通過(guò)高效液相色譜測(cè)定檢測(cè)所述供試品溶液和對(duì)照品溶液； 其中色譜條件為：以十八烷基硅烷鍵合硅膠（250X4.Omm，5μm)為填充劑，以10 :90 的乙腈/磷酸緩沖液pH= 2. 6為流動(dòng)相A，以90:10的乙腈/磷酸緩沖液pH= 2. 6為流 動(dòng)相B，梯度洗脫，柱溫為25~40°C，流速為0. 8~1. 2ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm。2. 如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述供試品溶液和對(duì)照品溶液的制備包括： 取泊馬度胺中間體待測(cè)樣品，加溶劑制成濃度為lmg/ml的溶液，作為供試品溶液；量取所 述供試品溶液，加溶劑制成濃度為〇. 〇lmg/ml的溶液，作為對(duì)照溶液。3. 如權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述溶劑為體積比為50 :50的所述流動(dòng)相A 和流動(dòng)相B。4. 如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述柱溫為30°C，流速為1.OmL/min。5. 如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述梯度洗脫的條件為：以體積比計(jì)，0分鐘 時(shí)，流動(dòng)相A為90%，流動(dòng)相B為10% ;5分鐘時(shí)，流動(dòng)相A為90%，流動(dòng)相B為10% ;35分 鐘時(shí)，流動(dòng)相A為20 %，流動(dòng)相B為80 % ;36分鐘時(shí)，流動(dòng)相A為90 %，流動(dòng)相B為10 % ; 40分鐘時(shí)，流動(dòng)相A為90 %，流動(dòng)相B為10 %。6. 如權(quán)利要求1所述的分方法，其特征在于，所述色譜柱為Kormasil色譜柱。7. 如權(quán)利要求1所述的方法在監(jiān)控泊馬度胺或含泊馬度胺制劑的質(zhì)量中的應(yīng)用。
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種液相色譜法分離測(cè)定泊馬度胺中間體有關(guān)物質(zhì)的方法，包括以下步驟：(1)供試品溶液和對(duì)照品溶液的制備；(2)通過(guò)高效液相色譜測(cè)定檢測(cè)所述供試品溶液和對(duì)照品溶液；其中色譜條件為：以十八烷基硅烷鍵合硅膠(250×4.0mm，5μm)為填充劑，以10：90的乙腈/磷酸緩沖液pH＝2.6為流動(dòng)相A,以90:10的乙腈/磷酸緩沖液pH＝2.6為流動(dòng)相B，梯度洗脫，柱溫為25～40℃，流速為0.8～1.2ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm。
【IPC分類(lèi)】G01N30/02
【公開(kāi)號(hào)】CN105334270
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201410305848
【發(fā)明人】胥娜, 劉碧秀, 朱丹, 劉小柔, 高媛, 王彥青
【申請(qǐng)人】深圳海王藥業(yè)有限公司
【公開(kāi)日】2016年2月17日
【申請(qǐng)日】2014年6月30日