一種檢測再造煙葉用輔料中九種合成著色劑濃度的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于再造煙葉用輔料如再造煙葉生產(chǎn)過程中使用的涂布液、煙葉浸膏、煙 梗浸膏、香精香料等化學(xué)成分分析測定技術(shù)領(lǐng)域，具體設(shè)及一種采用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜 法檢測再造煙葉用輔料中九種合成著色劑濃度的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 隨著人們對卷煙安全意識的提高，卷煙合成著色劑含量也受到越來越多的關(guān)注。 加強對卷煙產(chǎn)品及原料中合成著色劑含量的控制，已成為煙草企業(yè)和大多數(shù)消費者的共 識。煙用輔料（如再造煙葉用輔料）作為卷煙生產(chǎn)的重要環(huán)節(jié)之一，其安全性目前已受到 行業(yè)內(nèi)的高度重視。特別是對于再造煙葉安全性控制更為嚴(yán)格，因而控制再造煙葉用輔料 中合成著色劑含量，對卷煙企業(yè)質(zhì)量控制及保護消費者利益具有重要意義。
[0003] 合成著色劑是指用人工化學(xué)合成方法所制的化合物，包括食用著色劑及其他用途 的非食用著色劑。合成著色劑具有著色力強、色澤鮮艷、不易稱色、穩(wěn)定性好、易溶解、成本 低等特點，所W合成著色劑備受親睞。為了使再造煙葉色澤艷麗，再造煙葉用輔料中通常都 要添加合成著色劑。但發(fā)現(xiàn)不少食用合成著色劑具有致癌、致崎影響。
[0004] 目前，國內(nèi)針對食品中合成著色劑的測定已經(jīng)有相關(guān)國家標(biāo)準(zhǔn)，并且已經(jīng)制定了 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)來規(guī)定各種著色劑的在不同種類食品中的限量。針對于煙草行業(yè)，未見 國內(nèi)關(guān)于合成著色劑的測定的相關(guān)國家標(biāo)準(zhǔn)。申請人通過前期探索，按GB/T5009. 35-2003 《食品中合成著色劑的測定》標(biāo)準(zhǔn)進行測定卷煙輔材中合成著色劑，W及采用行業(yè)高效液相 色譜法測定再造煙葉中合成著色劑方法進行測定，發(fā)現(xiàn)運些方法均很難適用于再造煙葉用 輔料特別是膏體、液體等樣品的測定，主要是由于卷煙輔料中基質(zhì)較為復(fù)雜，特別是涂布液 基質(zhì)更為復(fù)雜，采用上述2種方法測定運些樣品，均容易出現(xiàn)假陽性，存在嚴(yán)重的檢測定性 定量不準(zhǔn)確，無法判定等問題。
[0005] 為此，基于液相色譜-串聯(lián)Ξ重四級桿質(zhì)譜儀化C-MS/M巧除具有普通高效液相色 譜儀的分離功能，又具有質(zhì)譜離子高選擇性的優(yōu)勢，能夠在定性定量時發(fā)揮更為精準(zhǔn)的功 能，探索開發(fā)采用液相色譜-串聯(lián)Ξ重四級桿質(zhì)譜儀測定煙用輔料中合成著色劑含量的方 法，對準(zhǔn)確檢測再造煙葉用輔料中的合成著色劑具有重要意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的是解決再造煙葉用輔料基質(zhì)復(fù)雜，出現(xiàn)假陽性，存在嚴(yán)重的檢測定 性定量不準(zhǔn)確問題，提供一種檢測再造煙葉用輔料中九種合成著色劑濃度的方法。
[0007] 本發(fā)明的目的通過W下技術(shù)方案實現(xiàn)：
[0008] -種檢測再造煙葉用輔料中九種合成著色劑濃度的方法，方法步驟如下：
[000引 （1)制備九種合成著色劑混合母液：分別稱取巧樣黃、寬菜紅、說藍(lán)、姻脂紅、日落 黃、誘惑紅、亮藍(lán)、酸性紅標(biāo)準(zhǔn)品lOmg于10血容量瓶中，稱取赤薛紅lOOmg于10血容量瓶 中，各采用去離子水溶解并定溶，然后各分別移取ImL上述九種溶液于lOOmL容量瓶中，采 用去離子水定溶得到九種合成著色劑混合母液；
[0010] 0)準(zhǔn)備標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：分別移取0. 02血、0. 05血、0. 10血、0. 50血、1. 0血和2. 0血 九種合成著色劑混合母液于lOmL容量瓶中，采用去離子水定溶，得到標(biāo)準(zhǔn)工作溶液系列； 標(biāo)準(zhǔn)工作溶液含巧樣黃、寬菜紅、說藍(lán)、姻脂紅、日落黃、誘惑紅、亮藍(lán)、酸性紅的濃度范圍均 為 0. 02μg/mL、0. 05μg/mL、0. 10μg/mL、0. 50μg/mL、1. 00μg/mL、2. 00μg/mL，赤薛紅濃 度范圍為 0. 20μg/mL、0. 50μg/mL、1. 00μg/mL、5. 00μg/血、10. 0μg/血、20. 0μg/血；
[0011] (3)制備樣品溶液：進行再造煙葉用輔料中合成著色劑的溶解、萃取與凈化：稱取 0. 2g~0. 5g再造煙葉用輔料于50血錐形瓶中，加入20血去離子水溶解，超聲提取lOmin， 1000化/min離屯、5min，取10血上清液上樣到經(jīng)3血甲醇、3血水活化的Strata-X-AW固相 萃取柱上，然后用3mL水、3mL甲醇洗涂，洗涂后使用5mL5%氨化甲醇洗脫，洗脫液在40°C 條件下氮氣吹干，加入2mL去離子水溶解后，經(jīng)0. 22μm過濾膜后得到樣品溶液；
[0012] 所述再造煙葉用輔料是指再造煙葉生產(chǎn)過程中使用的涂布液或煙葉浸膏或煙梗 浸膏或香精香料；
[0013] (4)進行液相色譜-串聯(lián)Ξ重四級桿質(zhì)譜分析：采用液相色譜-串聯(lián)Ξ重四級桿 質(zhì)譜分析儀，分析檢測的液相色譜、質(zhì)譜條件如下：
[0014] 色譜柱為AgilentSB-C18,柱溫：30°C;流動相A為0. 02mol/L乙酸錠的水溶液，流 動相B為甲醇溶液；梯度洗脫，條件為0~5min:90%A~85%A，5. 1~20min:85%A~ 30 %A，20. 1 ~23min:0 %A，23. 1 ~28min:90 %A;流速：0. 2mL/min，進樣體積 2μL;
[0015] 離子源：采用電噴霧電離源；掃描方式：正離子掃描；檢測方式：多反應(yīng)監(jiān)測MRM; 電噴霧電壓：500V;干燥氣溫度：325°C;干燥氣流量：6L/min;銷氣溫度：380°C;銷氣流量： lOL/min;毛細(xì)管電壓：4000V;
[0016] (5)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線及計算結(jié)果：分別吸取步驟（2)制備的不同濃度標(biāo)準(zhǔn)工作溶液 進行LC-MS/MS分析，在步驟（4)確定的儀器參數(shù)下，W九種合成著色劑定量離子峰面積對 其所對應(yīng)的質(zhì)量濃度進行線性回歸，得到各目標(biāo)化合物的標(biāo)準(zhǔn)工作曲線；再分別吸取步驟 做制備的樣品溶液進行LC-MS/MS分析，在步驟（4)確定的儀器參數(shù)下，得到九種合成著色 劑定量離子峰面積，代入回歸方程，計算得到樣品溶液中九種合成著色劑濃度。
[0017] 本發(fā)明所述的去離子水達(dá)到GB/T6682中一級水的要求。吹干洗脫液的氮氣的純 度> 99. 999%。
[001引本發(fā)明方法具有W下優(yōu)點：
[0019] (1)本發(fā)明建立了一種液相色譜-Ξ重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜儀同時檢測再造煙葉用輔 料中九種合成著色劑的方法，能夠準(zhǔn)確地對再造煙葉用輔料中九種合成著色劑進行定性、 定量。
[0020] 似本發(fā)明使用Strata-X-AW固相萃取柱對樣品進行凈化，能夠有效的去除復(fù)雜 基質(zhì)對檢測信號的干擾。
[0021] (3)本發(fā)明使用SB-C18色譜柱與0. 02mol/L乙酸錠水溶液+甲醇流動相的選擇對 九種合成著色劑的分離達(dá)到了優(yōu)異的分離效果。
[002引 （4)本發(fā)明檢出限在0.07yg/g~0. 12yg/g之間，日內(nèi)精密度RSD(n= 6) 在1.90 %~6. 49%，日間精密度RSD(n= 3)在2. 97 %~5. 48%，穩(wěn)定性好，回收率在 88. 54%~108. 43%之間，準(zhǔn)確性高；液相色譜-串聯(lián)Ξ重四級桿質(zhì)譜儀操作簡單快捷、準(zhǔn) 確可靠、重復(fù)性好。
[0023] 本發(fā)明方法準(zhǔn)確可靠、靈敏度高，非常適合復(fù)雜基質(zhì)再造煙葉用輔料中九種合成 著色劑的分析。
【附圖說明】
[0024] 圖1為九種合成著色劑的總離子流（TIC)圖；
[00巧]圖2為巧樣黃定量離子的MRM圖；
[0026] 圖3為寬菜紅定量離子的MRM圖；
[0027] 圖4為說藍(lán)定量離子的MRM圖；
[002引圖5為姻脂紅定量離子的MRM圖；
[0029] 圖6為日落黃定量離子的MRM圖；
[0030] 圖7為誘惑紅定量離子的MRM圖；
[0031] 圖8為亮藍(lán)定量離子的MRM圖；
[0032] 圖9為酸性紅定量離子的MRM圖；
[0033] 圖10為赤薛紅定量離子的MRM圖；
[0034] 圖11為某涂布液的總離子流（TIC)圖；
[0035] 圖12為某涂布液巧樣黃定量離子的MRM圖；
[0036] 圖13為某涂布液日落黃定量離子的MRM圖。
【具體實施方式】
[0037] 下面通過實施例對本發(fā)明進行進一步說明。
[0038] -種采用液相色譜-串聯(lián)Ξ重四級桿質(zhì)譜法檢測再造煙葉用輔料中九種合成著 色劑濃度的方法，方法步驟如下：
[0039] (1)準(zhǔn)備測定儀器和材料：液相色譜-串聯(lián)Ξ重四級桿質(zhì)譜儀（Agi1ent 1290-6460,美國）；分析天平（梅特勒AB204-S，瑞±);容量瓶，10血、100血、錐形瓶，50血； 去離子水（達(dá)到GB/T6682中一級水的要求）；乙酸錠（分析純，西晚化工股份有限公司）； 甲醇（色譜純，Dikma公司）；氨水（分析純，西晚化工股份有限公司）；Strata-X-AW固相 萃取柱（Phenomenex8陽小柱，6〇111旨/^3血）；高純氮氣（純度> 99. 999%，昆明梅塞爾氣體 產(chǎn)品有限公司）；
[0040] (1)準(zhǔn)備九種合成著色劑混合母液：分別稱取巧樣黃、寬菜紅、說藍(lán)、姻脂紅、日落 黃、誘惑紅、亮藍(lán)、酸性紅標(biāo)準(zhǔn)品lOmg于10血容量瓶中，稱取赤薛紅lOOmg于10血容量瓶 中，各采用去離子水溶解并定溶，然后各分別移取ImL上述九種溶液于lOOmL容量瓶中，采 用去離子水定溶得到九種合成著色劑混合母液；
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