一種檢測產(chǎn)品中非法添加氟西汀的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及中藥、保健食品及食品質(zhì)量檢測領(lǐng)域，具體涉及一種檢測產(chǎn)品中非法添加氟西汀的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]近年來在中藥和保健食品及食品中非法添加減肥類化學(xué)藥物情況嚴重，不法分子為追求經(jīng)濟利益，達到快速減肥的明顯效果，在中藥、保健食品及食品中添加西藥成分，添加量通常達到或接近西藥治療劑量，服用者在不知情時服用，會極大危害身體健康。在日常監(jiān)督檢驗時，常見檢出非法添加西布曲明(瘦肉精)、酚酞，國家食藥監(jiān)局為此先后頒布藥品檢驗補充檢驗方法和檢驗項目批準(zhǔn)件2006004、2012005及食藥監(jiān)辦許
[2010] 114號文件附件2，用于非法添加西布曲明及兩種衍生物、酚酞、咖啡因、呋塞米、芬氟拉明、麻黃堿共8種成分的監(jiān)督檢驗。但不法分子為逃避監(jiān)管，添加手段和種類不斷更新、變化，針對標(biāo)準(zhǔn)進行高科技造假。發(fā)明人最近檢測到減肥類樣品中添加了一種新型化學(xué)藥品一氟西汀。
[0003]氟西汀，又名百憂解(fluoxetine，商品名稱為Prozac)，是一種口服抗抑郁藥，用于治療抑郁癥和其伴隨的焦慮，治療強迫癥及暴食癥，因而具有減肥作用。其為精神類藥物，對服用者的精神將產(chǎn)生極大傷害。目前尚無針對產(chǎn)品中非法添加氟西汀定性篩查和定量測定方法。因此建立產(chǎn)品中非法添加氟西汀的檢測方法是非常必要的。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明旨在克服現(xiàn)有檢測方法的不足，提供一種檢測產(chǎn)品中非法添加氟西汀的方法，可以準(zhǔn)確、快速的檢測出氟西汀。
[0005]本發(fā)明考慮到高效液相色譜儀(配備二極管陣列檢測器)是國內(nèi)檢測實驗室的常規(guī)檢測設(shè)備，因此建立了高效液相色譜法初步篩選和含量測定方法，符合國內(nèi)藥品檢測機構(gòu)的實際情況，有利于監(jiān)督檢驗的有效實施。對于初篩陽性樣品，采用液質(zhì)聯(lián)用法結(jié)構(gòu)確證。配備液質(zhì)聯(lián)用儀的檢測機構(gòu)也可直接使用液質(zhì)聯(lián)用方法篩選和確證。
[0006]為了達到上述目的，本發(fā)明提供的技術(shù)方案為:
[0007]所述檢測產(chǎn)品中非法添加氟西汀初篩方法是將樣品經(jīng)甲醇提取，梯度洗脫分離和二極管陣列檢測器(DAD)檢測。根據(jù)樣品中色譜峰與氟西汀對照品色譜峰保留時間和光譜行為的比較，初步判斷是否檢出氟西汀。
[0008]所述檢測產(chǎn)品中非法添加氟西汀的確證方法是將初篩的陽性樣品經(jīng)甲醇提取，UPLC梯度洗脫分離，質(zhì)譜檢測；通過比較樣品峰與對照品峰的保留時間、準(zhǔn)分子離子峰和二級質(zhì)譜碎片信息，確證樣品中是否非法添加氟西汀。
[0009]所述檢測產(chǎn)品中非法添加氟西汀的含量測定方法是采用初篩方法的高效液相色譜條件，按外標(biāo)法計算含量。
[0010]具體包括如下步驟:
(1)將樣品用甲醇超聲提??；(2)將提取后的供試品溶液注入高效液相色譜儀，梯度洗脫分離和二極管陣列檢測器(DAD)檢測；該步驟中，所述液相色譜儀為戴安U3000高效液相色譜儀；
(3)將提取后的陽性供試品溶液注入液質(zhì)聯(lián)用儀進行超高效液相梯度洗脫分離和質(zhì)譜檢測；該步驟中，所述液質(zhì)聯(lián)用儀為AB Sciex TripleTOF 5600+高分辨質(zhì)譜儀，島津NexeraUHPLC LC-30A高效液相色譜儀。
[〇〇11] 步驟(2)中的色譜條件為:以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-乙腈-0.8%三乙胺溶液(用磷酸調(diào)pH值至5.8) (5:35:60)為流動相；檢測波長為226nm，掃描波長范圍為190?400nm，流速1.0mL/min，進樣量5 μ L〇
[0012]步驟⑶中的色譜條件為:以含0.1 %冰醋酸的10mm〇l/L醋酸銨溶液為流動相A，以甲醇為流動相B，梯度洗脫程序0?lmin，20 % B ; 1?6min，20 %?80 % B ;6?8min，80 % B ;檢測波長為226nm，流速0.3mL/min，進樣量5 μ L〇
[0013]步驟⑶中的質(zhì)譜條件:ESI+，質(zhì)譜參數(shù):GS1 (55psi)，GS2(55psi)，CURGAS(30psi)，離子源溫度(550°C )，電噴霧電壓(5500V)，去簇電壓為80V，碰撞能量為24V。
[0014]本發(fā)明所述產(chǎn)品可為中成藥、保健食品和食品。
[0015]本發(fā)明方法中高效液相色譜法通過比較色譜峰保留時間和光譜行為，初步判斷是否檢出氟西?。灰嘿|(zhì)聯(lián)用法通過比較色譜峰保留時間、準(zhǔn)分子離子峰和二級碎片信息，使氟西汀的結(jié)構(gòu)得到確證，檢驗結(jié)論準(zhǔn)確無誤。本發(fā)明方法專屬性強，靈敏度、準(zhǔn)確度高，穩(wěn)定性好，實用性強。建立的高效液相色譜初篩方法具有儀器價格和維護成本比液質(zhì)聯(lián)用儀低很多的優(yōu)勢，適合基層檢測機構(gòu)使用。由于中藥、保健食品、食品中非法添加化學(xué)藥物的違法現(xiàn)象還將持續(xù)，而分析檢測技術(shù)的發(fā)展總體上滯后于摻假制假的發(fā)展速度，本發(fā)明正是針對目前食品、藥品安全監(jiān)管新情況新問題所創(chuàng)新的檢測方法，為國家制定產(chǎn)品中非法添加氟西汀檢測標(biāo)準(zhǔn)提供了有力的技術(shù)支持。
【附圖說明】
[0016]圖1:本發(fā)明的氟西汀對照品的HPLC色譜圖；圖2:本發(fā)明的陽性樣品的HPLC色譜圖；圖3:本發(fā)明的陰性樣品的HPLC色譜圖；圖4:本發(fā)明的氟西汀對照品的吸收光譜圖；圖5:本發(fā)明的陽性樣品的吸收光譜圖；圖6:本發(fā)明的氟西汀對照品的質(zhì)譜圖；圖7:本發(fā)明的陽性樣品的質(zhì)譜圖；圖8:氟西汀裂解過程圖。
[0017]上述圖2、圖3、圖5、圖7中的陽性樣品的供試品溶液為含氟西汀的樣品按照供試品溶液的制備方法制備的供試品溶液；陰性樣品的供試品溶液為不含氟西汀的樣品按照供試品溶液的制備方法制備的供試品溶液。
【具體實施方式】
[0018]下面結(jié)合附圖和實施例對本發(fā)明作進一步的說明。
[0019]本發(fā)明采用:儀器與試藥:戴安U3000高效液相色譜儀，Inertsil 0DS-SP (:18色譜柱(4.6 X150mm，5 μ m) ;AB Sciex TripleTOF 5600+高分辨質(zhì)譜儀；島津 Nexera UHPLCLC-30A ;色譜柱:島津(Shim-pack XR-0DS，2.0mmX 100mm);天平:Mettler AB135-S/FACT ;昆山禾創(chuàng)超聲儀器有限公司KH-800KDE型高功率數(shù)控超聲儀；試劑:甲醇、乙腈為色譜純(Merck公司)，其他試劑均為分析純，水為超純水；鹽酸氟西汀對照品由中國食品藥品檢定研究院提供，批號100513-200401 ;樣品:抽檢樣品74批，包括陽性樣品3批。
[0020]一、高效液相色譜法初篩及含量測定
[0021]測定波長的選擇取氟西汀對照品溶液在190nm-400nm波長范圍內(nèi)掃描，其最大吸收波長為226nm，故確定檢測波長為226nm。
[0022]流動相的選擇分別以甲醇-乙腈-50mmol/L磷酸二氫鉀(5:30:65)、甲醇-乙腈-0.8%三乙胺溶液(用磷酸調(diào)pH至5.8) (5:35:60)為流動相進行了流動相的優(yōu)化，結(jié)果以甲醇-乙腈-0.8%三乙胺溶液(用磷酸調(diào)pH至5.8)為流動相時，分離較好，氟西汀峰形對稱。
[0023]提取溶劑的選擇由于氟西汀溶于甲醇，因此選用甲醇作為提取溶劑，并采用超聲處理(功率800W，頻率40kHz) 15分鐘，以有效地將其提取出來。
[0024]色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗:以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-乙腈-0.8%三乙胺溶液(用磷酸調(diào)pH值至5.8) (5:35:60)為流動相；檢測波長為226nm，掃描波長范圍為190?400nm ;流速1.0mL/min,進樣量5 μ L。
[0025]對照品溶液的制備:精密稱取鹽酸氟西汀對照品約lOOmg置