一種提高黃芪薄層色譜鑒定的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體設(shè)及一種提高黃巧薄層色譜鑒定的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 本品為豆科植物蒙古黃巧或膜芙黃巧的干燥根，春、秋二季采挖，除去須根和根 頭，沖洗干凈，潤(rùn)透，趁鮮切厚片，干燥，稱為"黃巧片"，本品表面淡棟黃色或淡棟褐色，有不 整齊的縱溝紋或縱溝。質(zhì)硬而初，斷面纖維性強(qiáng)，并顯粉性，皮部黃白色，木部淡黃色，有放 射狀紋理和裂隙。氣微，味微甜，嚼之微有豆腥味。
[0003] 中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的工作現(xiàn)已全面展開，中醫(yī)藥學(xué)者結(jié)合當(dāng)前質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究中有關(guān)問 題，提出了一些看法。首先是標(biāo)題的擬定，最好能體現(xiàn)出檢驗(yàn)方法的建立和標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格的制定 兩項(xiàng)內(nèi)容，其次重要的是鑒別實(shí)驗(yàn)，主要解決被檢藥物的真?zhèn)螁栴}，有性狀鑒別、顯微鑒別 和理化鑒別等。理化鑒別中除一般的化學(xué)實(shí)驗(yàn)如顏色反應(yīng)外，當(dāng)前大量應(yīng)用的是層析法， 而又W薄層層析應(yīng)用最廣泛，因其簡(jiǎn)便、易行、靈敏度高、專屬性強(qiáng)，具有分離與鑒定雙重功 能，特別適用于成分復(fù)雜的中藥及其制劑的鑒別，只要一些特征斑點(diǎn)具再現(xiàn)性，就可作為確 認(rèn)依據(jù)，在薄層實(shí)驗(yàn)中可W選用化學(xué)單體、提取物、藥材對(duì)照品等來做對(duì)照鑒別。
[0004] 中國藥典2010,（附錄VIB)，提供了照薄層色譜法試驗(yàn)，通過對(duì)樣品加熱回流，濾 過，濾液加于中性氧化侶柱，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)芙?，提取、洗涂等步驟完成，作為供試 品溶液，進(jìn)行點(diǎn)樣，但是其需要過中性氧化侶柱，成本高，其色譜清晰度不高。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明為了克服現(xiàn)有技術(shù)中上述不足問題，提供一種提高黃巧薄層色譜鑒定的方 法，在回流過濾后的殘?jiān)屑尤肓嗽砘涸砘椒ê?jiǎn)單，除雜質(zhì)效果明顯且提高了黃巧甲 巧在色譜中的清晰度。
[0006] 為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明一種提高黃巧薄層色譜鑒定的方法包括W下步驟：
[0007] (1)首先將黃巧研磨為粉末，用稱量天平精確稱取該粉末2-3g，加入Ξ氯甲燒-正 下醇75ml，加熱回流，化后，過濾，然后將濾液蒸干，殘?jiān)偌尤?血-10血的K0H-甲醇皂 化液，置于60°C-65°C恒溫水浴30min-40min;濾過，再次加入8血-10血的K0H-甲醇皂化 液，置l〇〇°C水浴加熱回流0. 5-比，蒸干，殘?jiān)铀?0ml使溶解，移至分液漏斗中；再加入 2血甲醇使黃巧殘?jiān)浞秩芙夂?，超聲提?0min-40min后，再加入乙酸乙醋萃取兩次，每 次30mU蒸干萃取液，加入甲醇使之溶解，運(yùn)個(gè)作為供試樣；
[0008] (2)吸取5μ1上述溶液分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，同一展開劑，先展開，再取 出，再驚干，置化-Ρ10Α觀片燈下或日光紫外光燈365nm下檢視，最后拍照，在薄板上可W很 穩(wěn)定的顯示出清晰條帶，且樣品中條帶呈現(xiàn)出規(guī)律的一致性，在3小時(shí)內(nèi)澄黃色顯色較為 穩(wěn)定，即可判斷為黃巧。
[0009] 所述的步驟（1)中Ξ氯甲燒與正下醇體積比為2 :1。
[0010] 所述的步驟（1)中超聲提取功率為40-90W，超聲溫度是4°C-10°c，提取1-4次。
[0011] 所述的步驟（1)中所述的中KOH-甲醇皂化液質(zhì)量濃度：20%。
[0012] 所述的步驟（2)中所述的展開劑為：Ξ氯甲燒與正己燒，其中Ξ氯甲燒：正己燒= 3:1。
[0013] 所述的步驟（2)中所述的展開劑為：石油酸與乙酸乙醋，其中石油酸：乙酸乙醋= 7:1。
[0014] 本發(fā)明的有益效果：與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明在初次回流過濾后的殘?jiān)屑尤肓?造化液皂化，方法簡(jiǎn)單，除雜質(zhì)效果明顯，解決了黃巧甲巧在色譜中的清晰度不高的問題， 是一種準(zhǔn)確、清晰而又快速的鑒別黃巧的方法。
【附圖說明】
[0015] 圖1為日光燈黃巧片薄層色譜鑒別圖，S-黃巧甲巧對(duì)照品，1-10號(hào)為黃巧樣品。
[0016] 圖2為紫外光燈黃巧片薄層色譜鑒別圖，S-黃巧甲巧對(duì)照品，1-10號(hào)為黃巧樣品。
【具體實(shí)施方式】
[0017] W下通過具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說明，但是本發(fā)明所保護(hù)的權(quán)利范圍不僅 限于W下實(shí)施例。
[0018] 本發(fā)明的實(shí)驗(yàn)方法及參數(shù)：
[001引 1.主要材料：
[0020]
[0021]
[00過 2.主要試劑：
[002引Ξ氯甲燒，正下醇，K0H，甲醇，乙酸乙醋，正己燒，石油酸，乙酸乙醋。硅膠G薄層 板、聚酷胺薄板，蒸饋水，90 %乙醇溶液等。
[0024]實(shí)施例1
[00巧](1)首先將10種產(chǎn)地不同的黃巧材料研磨為粉末，過200目的篩，用稱量天平精 確稱取該粉末2g，加入體積比為2 :1的Ξ氯甲燒-正下醇75ml，加熱回流，化后，過濾，然 后將濾液蒸干，殘?jiān)偌尤胭|(zhì)量分?jǐn)?shù)為20%，8mL的K0H-甲醇皂化液，置于60°C恒溫水浴 30min;濾過，再次加入8mL的K0H-甲醇皂化液，置100°C水浴加熱回流比，蒸干，殘?jiān)铀?30ml使溶解，移至分液漏斗中；再加入2mL甲醇使黃巧殘?jiān)浞秩芙夂螅曁崛?0min，超 聲功率為50W，超聲溫度是4°C提取2次后，再加入乙酸乙醋萃取兩次，每次3〇1^，蒸干萃取 液，加入甲醇使之溶解，運(yùn)個(gè)作為供試樣；
[0026] (2)吸取5μL上述溶液分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，同一展開劑為Ξ氯甲燒： 正己燒=3 :1，先展開，再取出，再驚干，置化-Ρ10Α觀片燈下，最后拍照，在薄板上可W很穩(wěn) 定的顯示出清晰條帶，且樣品中條帶呈現(xiàn)出規(guī)律的一致性，在3小時(shí)內(nèi)澄黃色顯色較為穩(wěn) 定，即可判斷為黃巧。參見圖1。
[0027] 實(shí)施例2
[0028] (1)首先將10種產(chǎn)地不同的黃巧材料研磨為粉末，過200目的篩，用稱量天平精 確稱取該粉末2g，加入體積比為2 :1的Ξ氯甲燒-正下醇75ml，加熱回流，化后，過濾，然 后將濾液蒸干，殘?jiān)偌尤胭|(zhì)量分?jǐn)?shù)為20%，8mL的K0H-甲醇皂化液，置于60°C恒溫水浴 30min;濾過，再次加入8mL的K0H-甲醇皂化液，置100°C水浴加熱回流比，蒸干，殘?jiān)铀?30ml使溶解，移至分液漏斗中；再加入2mL甲醇使黃巧殘?jiān)浞秩芙夂?，超聲提?0min，超 聲功率為50W，超聲溫度是4°C提取2次后，再加入乙酸乙醋萃取兩次，每次3〇1^，蒸干萃取 液，加入甲醇使之溶解，運(yùn)個(gè)作為供試樣；
[0029] (2)吸取5μL上述溶液分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，同一展開劑為Ξ氯甲燒： 正己燒=3 :1，先展開，再取出，再驚干，日光紫外光燈365nm下檢視，最后拍照，在薄板上可 W很穩(wěn)定的顯示出清晰條帶，且樣品中條帶呈現(xiàn)出規(guī)律的一致性，在3小時(shí)內(nèi)澄黃色顯色 較為穩(wěn)定，即可判斷為黃巧。參見圖2。
[0030] 實(shí)施例3
[0031] (1)首先將10種產(chǎn)地不同的黃巧材料研磨為粉末，過200目的篩，用稱量天平精 確稱取該粉末3g，加入體積比為2 :1的Ξ氯甲燒-正下醇75ml，加熱回流，化后，過濾，然 后將濾液蒸干，殘?jiān)偌尤胭|(zhì)量分?jǐn)?shù)為20%，lOmL的K0H-甲醇皂化液，置于60°C恒溫水浴 30min;濾過，再次加入lOmL的KOH-甲醇皂化液，置100°C水浴加熱回流比，蒸干，殘?jiān)铀?30ml使溶解，移至分液漏斗中；再加入2mL甲醇使黃巧殘?jiān)浞秩芙夂?，超聲提?0min，超 聲功率為50W，超聲溫度是4°C提取2次后，再加入乙酸乙醋萃取兩次，每次30血，蒸干萃取 液，加入甲醇使之溶解，運(yùn)個(gè)作為供試樣；
[0032] (2)吸取5μL上述溶液分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，同一展開劑為石油酸：乙 酸乙醋=7 :1，先展開，再取出，再驚干，置化-Ρ10Α觀片燈下，最后拍照，在薄板上可W很穩(wěn) 定的顯示出清晰條帶，且樣品中條帶呈現(xiàn)出規(guī)律的一致性，在3小時(shí)內(nèi)澄黃色顯色較為穩(wěn) 定，即可判斷為黃巧，同樣能夠得到清晰的色譜鑒定圖。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種提高黃芪薄層色譜鑒定的方法，其特征在于，包括以下步驟： (1) 首先將黃芪研磨為粉末，用稱量天平精確稱取該粉末2-3g，加入三氯甲烷-正丁 醇75ml，加熱回流，3h后，過濾，然后將濾液蒸干，殘?jiān)偌尤?mL-10mL的KOH-甲醇皂化 液，置于60°C-65°C恒溫水浴30min-40min;濾過，再次加入8mL-10mL的KOH-甲醇皂化液， 置100°C水浴加熱回流0. 5-lh，蒸干，殘?jiān)铀?0ml使溶解，移至分液漏斗中；再加入2mL 甲醇使黃芪殘?jiān)浞秩芙夂?，超聲提?0min-40min后，再加入乙酸乙酯萃取兩次，每次 30mL，蒸干萃取液，加入甲醇使之溶解，這個(gè)作為供試樣； (2) 吸取5μL上述溶液分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，同一展開劑，先展開，再取出，再 晾干，置幾-PlOA觀片燈下或日光紫外光燈365nm下檢視，最后拍照，在薄板上可以很穩(wěn)定 的顯示出清晰條帶，且樣品中條帶呈現(xiàn)出規(guī)律的一致性，在3小時(shí)內(nèi)橙黃色顯色較為穩(wěn)定， 即可判斷為黃芪。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種提高黃芪薄層色譜鑒定的方法，其特征在于，所述步驟 1)中三氯甲烷與正丁醇體積比為2:1。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種提高黃芪薄層色譜鑒定的方法，其特征在于，所述步驟 1)中超聲提取功率為40-90W，超聲溫度是4°C-10°C提取1-4次。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種提高黃芪薄層色譜鑒定的方法，其特征在于，所述步驟 1)中所述的中KOH-甲醇皂化液質(zhì)量濃度：20%。5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種提高黃芪薄層色譜鑒定的方法，其特征在于，所述步驟 1)中的展開劑為：三氯甲烷與正己燒，其中三氯甲烷：正己烷=3 :1。6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種提高黃芪薄層色譜鑒定的方法，其特征在于，所述步驟 1)中所述的展開劑為：石油醚與乙酸乙酯，其中石油醚：乙酸乙酯=7 :1。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種提高黃芪薄層色譜鑒定的方法，具體步驟如下：(1)首先將黃芪研磨為粉末，用稱量天平精確稱取該粉末2-3g，加入三氯甲烷-正丁醇75ml，加熱回流，3h后，過濾，然后將濾液蒸干，殘?jiān)偌尤?mL-10mL的KOH-甲醇皂化液皂化處理，再次加入8mL-10mL的KOH-甲醇皂化液，加熱回流0.5-1h，蒸干，殘?jiān)铀?0ml使溶解，超聲提取30min-40min后，再加入乙酸乙酯萃取兩次這個(gè)作為供試樣，點(diǎn)樣于同一硅膠G薄層板上，同一展開劑，先展開，再取出，再晾干，置JL-P10A觀片燈下或日光紫外光燈365nm下檢視，最后拍照，解決了黃芪甲苷在色譜中的清晰度不高的問題，是一種準(zhǔn)確、清晰而又快速的鑒別黃芪的方法。
【IPC分類】G01N30/90
【公開號(hào)】CN105403654
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510923327
【發(fā)明人】馬中森, 安瑩娟, 趙洋洋, 董立定, 李慧林, 潘麗娟, 常文軍, 李斌, 梁愛軍, 李宏強(qiáng)
【申請(qǐng)人】隴西保和堂藥業(yè)有限責(zé)任公司
【公開日】2016年3月16日
【申請(qǐng)日】2015年12月11日