Ehd2抗體在制備前列腺癌免疫組化試劑中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，設(shè)及一種前列腺癌免疫組化分子病理檢測(cè)試劑的制 備，具體設(shè)及我們開發(fā)的一種E皿2特異抗體在制備前列腺癌免疫組化試劑中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 前列腺癌是威脅男性的常見腫瘤之一，在歐美國(guó)家，僅次于肺癌，位列男性癌癥死 因的第二位。流行病學(xué)資料顯示，前列腺癌發(fā)病具有顯著的地域、種族、年齡差異。多項(xiàng)研 究還指出前列腺癌的發(fā)病與生活習(xí)慣、飲食文化、工作壓力、雄性激素水平及家族病史等有 相關(guān)性。中國(guó)處于前列腺癌的低發(fā)區(qū)，但近年來，我國(guó)男性的前列腺癌的發(fā)病呈上升趨勢(shì)， 與我國(guó)的人口老齡化加劇、生活質(zhì)量改善及生活方式的改變有關(guān)。
[0003] 我國(guó)前列腺癌的基礎(chǔ)研究仍相對(duì)薄弱，現(xiàn)在常用的前列腺癌診斷方法主要有：直 腸指診、血清PSA、超聲和穿刺、影像學(xué)檢查等。運(yùn)些診斷方法都停留在對(duì)前列腺癌發(fā)生的表 象進(jìn)行檢查W作為診斷及預(yù)后判斷的依據(jù)，一方面受病理醫(yī)師經(jīng)驗(yàn)等人為因素影響，另一 方面缺乏更深層次的與病人個(gè)體發(fā)病因素相關(guān)的分子依據(jù)。而在分子水平對(duì)前列腺癌進(jìn)行 相關(guān)檢測(cè)將對(duì)前列腺癌個(gè)體化診斷及精準(zhǔn)醫(yī)療具有重要意義。
[0004] 腫瘤的發(fā)生與多種因素有關(guān)，每個(gè)發(fā)病個(gè)體又具有不同的發(fā)病因素。目前開展的 基因序列檢測(cè)主要從基因突變水平理解腫瘤的異常變化。然而，現(xiàn)有大規(guī)模測(cè)序研究結(jié)果 表明，幾乎所有的腫瘤相關(guān)基因的功能突變率只占腫瘤中的很小部分，在大多數(shù)情況下，其 它因素特別是真正發(fā)揮生物學(xué)作用的蛋白質(zhì)的功能異變才是腫瘤的本質(zhì)，其影響因素又可 包含蛋白的異常表達(dá)、異常修飾、異常調(diào)控和異常細(xì)胞定位。因此，對(duì)腫瘤惡性本質(zhì)的深刻 認(rèn)識(shí)和有效控制的前提是明確運(yùn)些功能蛋白分子的異變情況，免疫組織化學(xué)是最有效的檢 測(cè)手段。免疫組織化學(xué)技術(shù)應(yīng)用免疫學(xué)抗原抗體反應(yīng)基本原理，通過抗體對(duì)體內(nèi)蛋白質(zhì)分 子抗原的特異性識(shí)別，W及化學(xué)標(biāo)記的第二抗體的顯色等作用來檢測(cè)組織細(xì)胞內(nèi)目標(biāo)抗原 的表達(dá)量及其亞細(xì)胞定位。 陽〇化]近年來，隨著免疫組織化學(xué)技術(shù)的發(fā)展和各種特異性抗體的成功研發(fā)，更主要的 是對(duì)腫瘤分子機(jī)制認(rèn)識(shí)的不斷深入，免疫組化在腫瘤診斷與鑒別中的應(yīng)用價(jià)值得到了普遍 的認(rèn)可。雖然前列腺特異性抗原PSA、己糖激酶化2等非免疫組化檢測(cè)指標(biāo)被廣泛用于前列 腺癌的臨床分子病理診斷，但對(duì)前列腺癌的病理分析和臨床用藥所起的作用非常有限、不 夠精準(zhǔn)。為了不斷提高前列腺癌的診治水平，更深入的研究前列腺癌的發(fā)病機(jī)理，有待其它 分子指標(biāo)被掲示并納入到臨床應(yīng)用中，本發(fā)明公開的一種E皿2特異抗體及其免疫組化試 劑為前列腺癌的免疫組化分子病理檢測(cè)提供了一個(gè)新的分子指標(biāo)，將有助于前列腺癌的精 準(zhǔn)診療。
[0006] 本申請(qǐng)項(xiàng)目前期研究發(fā)現(xiàn)E皿2蛋白的表達(dá)與定位在前列腺癌中產(chǎn)生異變，自 主研發(fā)的E皿2特異抗體W及W此抗體為核屯、的免疫組化試劑可對(duì)此異變進(jìn)行檢測(cè)。 E皿 2(lipsinhomology巧H)-domain-containingprotein2)是E皿蛋白的一種，是一類新 型膜轉(zhuǎn)運(yùn)調(diào)控蛋白，含有高度保守的邸結(jié)構(gòu)域。參與受體內(nèi)吞等胞膜轉(zhuǎn)運(yùn)的多步調(diào)控，是 整個(gè)胞膜轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制的必不可少的重要環(huán)節(jié)，在多種細(xì)胞中起分子與物質(zhì)運(yùn)輸及信號(hào)傳導(dǎo)等 關(guān)鍵作用，它的失調(diào)將導(dǎo)致細(xì)胞信號(hào)應(yīng)答失當(dāng)及細(xì)胞功能素亂，并可能進(jìn)而引發(fā)疾病。因此 對(duì)E皿2進(jìn)行免疫組化檢測(cè)將更客觀準(zhǔn)確地反映腫瘤的異化本質(zhì)和患者個(gè)體的臨床特性。 目前，由E皿2特異抗體制備的免疫組化試劑未見報(bào)道，E皿2抗體在制備前列腺癌免疫組化 檢測(cè)試劑中的應(yīng)用也沒有先例。
[0007] 為解決上述問題，本發(fā)明公開了E皿2抗體在制備前列腺癌免疫組化檢測(cè)試劑中 的應(yīng)用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008] 為解決【背景技術(shù)】中提到的問題，本發(fā)明公開了一種E皿2抗體及其在制備前列腺 癌免疫組化檢測(cè)試劑中的應(yīng)用。
[0009] 本發(fā)明解決的技術(shù)問題通過W下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)：
[0010] E皿2抗體在制備前列腺癌免疫組化檢測(cè)試劑中的應(yīng)用，是W-種對(duì)人E皿2蛋白 特異的抗體作為一抗或核屯、抗體。所述前列腺癌免疫組化檢測(cè)試劑，用于前列腺癌診斷和 預(yù)后判斷，其特征是采用前述對(duì)人E皿2蛋白特異的抗體作為一抗或核屯、抗體，配W常規(guī)免 疫組化試劑，用于對(duì)組織細(xì)胞中的E皿2蛋白進(jìn)行定量和定位分析。
[0011] 所述常規(guī)免疫組化試劑，包括二抗、顯色劑及緩沖劑。 陽01引所述E皿2蛋白是指由基因E皿2編碼的蛋白，所述基因E皿2的GeneBank國(guó)際 通用序列編號(hào)為：NM_〇14601，所述基因E皿2編碼蛋白的GeneBank國(guó)際通用序列編號(hào)為： NP-055416。
[0013] 所述一種對(duì)人E皿2蛋白特異的抗體，其特征在于，所述抗體能特異性識(shí)別人E皿2 蛋白，所述識(shí)別位點(diǎn)的氨基酸序列為：503-SEQ ID NO :1-543,由該氨基酸序列構(gòu)成的一種 多膚，其氨基酸序列為SEQ ID N0:1。
[0014] W所述多膚的氨基酸序列為核屯、序列對(duì)其進(jìn)行修飾，所述修飾為在所述多膚N端 連接一個(gè)半脫氨酸；修飾后的所述多膚經(jīng)純化后作為抗原對(duì)動(dòng)物進(jìn)行免疫W制備E皿2抗 體并進(jìn)行純化。
[0015] 有益效果
[0016] 本發(fā)明的有益效果為：
[0017] 本發(fā)明公開了一種E皿2特異抗體在制備前列腺癌免疫組化檢測(cè)試劑中的應(yīng)用， 由于E皿2蛋白參與受體與胞膜轉(zhuǎn)運(yùn)的多步調(diào)控，W及在各種細(xì)胞中對(duì)維持物質(zhì)運(yùn)輸與信 號(hào)傳導(dǎo)等起關(guān)鍵作用，與腫瘤等疾病的發(fā)生密切相關(guān)。因此對(duì)E皿2進(jìn)行免疫組化檢測(cè)將更 客觀準(zhǔn)確地從分子水平反映腫瘤的異化本質(zhì)和患者個(gè)體的臨床特點(diǎn)，符合腫瘤的精準(zhǔn)醫(yī)療 原則和趨勢(shì)。
[0018] 本發(fā)明公開的E皿2抗體在制備前列腺癌免疫組化檢測(cè)試劑中的應(yīng)用，W對(duì)人 E皿2蛋白特異的抗體作為一抗或核屯、抗體，制備前列腺癌免疫組化檢測(cè)試劑，制備出的試 劑特異性好，靈敏度高，顯色性好，能有效判別組織細(xì)胞中E皿2基因在蛋白水平的表達(dá)情 況W及定位特征，為前列腺癌的個(gè)體化精準(zhǔn)醫(yī)療提供新的分子依據(jù)。
【附圖說明】
[0019] 圖1為免疫印跡檢測(cè)結(jié)果圖。
[0020] 圖2為前列腺增生組織200倍鏡下免疫組化圖。
[0021] 圖3為前列腺癌組織200倍鏡下免疫組化圖。
[0022] 圖4為前列腺癌組織400倍鏡下免疫組化圖。
【具體實(shí)施方式】
[0023] 實(shí)施例1 :對(duì)E皿2特異抗體的制備
[0024] 1)實(shí)驗(yàn)材料來源
[00巧]新英格蘭大白兔購(gòu)于上海強(qiáng)耀生物。
[0026] 多膚CD邸FALASHLIEAKLEGHGLPANLPRRLVPPSKRRHKGSAE由天津賽爾生物技術(shù)有限 公司定制并與KLH偶聯(lián)。
[0027] CNBr活化的凝膠珠，福氏完全佐劑及福氏不完全佐劑購(gòu)自Invitrigen公司。 陽0測(cè)。動(dòng)物免疫
[0029] 取4月齡新西蘭大白兔3只，將lOOug抗原多膚溶于0. 2ml0. 1MPBS(pH7. 2)， 與等體積福