納米磁微粒懸浮液。
[0023] 所述生物素化SS-A(R〇60)抗原是生物素與SS-A(R〇60)抗原分子表面的-N此基團 反應(yīng)得到的。所述校準品是由含有抗SS-A(R〇60)抗體的人血清配制而成，用于得到校準曲 線;所述質(zhì)控品是由含有抗SS-A(R〇60)抗體的人血清配制而成。所述磁微粒試劑中磁微粒 的直徑為0.1-0.5μπι，所述磁微粒試劑具有超順磁性。所述化學(xué)發(fā)光底物為3-(2-螺旋金剛 燒）-4-甲氧基-4-(3-憐氧酷）-苯基-1,2-二氧環(huán)乙燒二鋼鹽AMPPD，主要成分為金剛燒 (AMPPD)，在堿性憐酸酶的催化下釋放光子。
[0024] 請參閱圖1，提供一種用抗SS-A(R〇60)抗體試劑盒進行檢測的方法，該方法基于磁 微粒化學(xué)發(fā)光檢測原理來實現(xiàn)的，包括步驟為：將樣本與磁微粒試劑M、生物素化SS-A (R〇60)抗原R1混合并混勻，在37°C下解育15min，得到樣本-M-R1復(fù)合物，洗涂3次，再加入酶 結(jié)合物AP-抗人IgG抗體R2,混勻并在37°C下解育15min，得到樣本-M-R1-R2復(fù)合物，洗涂3 次，再加入化學(xué)發(fā)光底物，混勻并在37°C下解育5min，測定發(fā)光結(jié)果。
[002引實施例二： 本發(fā)明抗SS-A(R060)抗體試劑盒的性能評估： (1)樣本比對 陰、陽性符合率:本發(fā)明試劑盒200例臨床血清檢測抗SS-A(R060)抗體的含量，并與國 外知名公司同類產(chǎn)品進行臨床比對，比對結(jié)果見下表。結(jié)果表明，本發(fā)明抗SS-A(R060)抗體 試劑盒陰性符合率100. 00%( 210/210)，陽性符合率:91.4.00%( 128/140 )，說明本試劑盒臨 床符合率高。
[00%] (2)靈敏度:本發(fā)明抗SS-A(R〇60)抗體檢測試劑盒L0D為0.28RU/mL，而酶聯(lián)免疫法 的靈敏度為2RU/mL。
[0027] (3)線性:將一份高值血清按照 1/2、1/4、1/8,1/16,1/40,1/80,1/200,1/400用本 發(fā)明抗SS-A(R〇60)抗體試劑盒檢測稀釋樣本，將理論濃度與實際檢測濃度做線性回歸，結(jié) 果見圖2。
[00%] (4)準確度:通過加樣回收評估其準確度。W-份高值血清、一份中值血清、一份低 值血清一共Ξ份血清(樣本A)，按照1:9體積比分別添加到兩份基礎(chǔ)血清中（樣本B)，混勻后 形成六份新樣本，分別檢測并計算其濃度。血清加樣回收率在85%-115%之間。
[0029] 添加回收實驗:加樣回收率=添加后樣本值/(0.1*樣本A+0.9樣本B)*100%。
[0030] 巧)精密度:對Ξ種不同濃度的質(zhì)控品進行檢測，每天兩次，分上下午檢測，每次進 行4個重復(fù)，共檢測10天，每種濃度共測定80次，計算變異系數(shù)，結(jié)果表明變異系數(shù)在10%W 內(nèi)。
[0031] (6)穩(wěn)定性:將本發(fā)明抗SS-A(R〇60)抗體檢測試劑盒37°C下放置7天后，測定高、 中、低3個濃度的質(zhì)控，結(jié)果表明3種質(zhì)控的檢測濃度均在質(zhì)控的濃度范圍內(nèi)。表明抗SS-A (R〇60)抗體檢測試劑盒穩(wěn)定好，符合臨床要求。
[0032] (7)特異性:對高、中、低不同濃度值的血清添加不同濃度的膽紅素、血紅蛋白、類 風(fēng)濕因子、脂、RF、HAMA檢測結(jié)果顯示，添加物質(zhì)對本發(fā)明抗SS-A(R〇60)抗體檢測試劑盒檢 測結(jié)果沒有影響。
[0033] 本發(fā)明的有益效果是： 一、 本發(fā)明完成所有流程得出結(jié)果的時間為50min，相比化ISA法大大縮短了反應(yīng)時間； 二、本發(fā)明采用堿性憐酸酶AP-金剛燒AMPPD系統(tǒng)，相比化ISA法檢測系統(tǒng)的靈敏度高10 倍； Ξ、本發(fā)明為全自動封閉操作系統(tǒng)，可靠性高，穩(wěn)定性好，檢測結(jié)果重復(fù)性好； 四、本發(fā)明從稀釋、加樣、解育、清洗W及檢測步驟實現(xiàn)了全自動化，避免了人為操作帶 來的結(jié)果偏差。
[0034] W上所述僅為本發(fā)明的實施例，并非因此限制本發(fā)明的專利范圍，凡是利用本發(fā) 明說明書內(nèi)容所作的等效結(jié)構(gòu)或等效流程變換，或直接或間接運用在其它相關(guān)的技術(shù)領(lǐng) 域，均同理包括在本發(fā)明的專利保護范圍內(nèi)。
【主權(quán)項】
1. 一種抗SS-A(R〇60)抗體試劑盒，其特征在于，包括，所述生物素化SS-A(R〇60)抗原為 偶聯(lián)有生物素的SS-A(R〇60)抗原，所述AP-抗人IgG抗體是AP標記的抗人IgG抗體，所述磁微 粒試劑是表面有親和素的納米磁微粒懸浮液。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗SS-A(R〇60)抗體試劑盒，其特征在于，所述生物素化SS-A (R〇60)抗原是生物素與SS-A(R〇60)抗原分子表面的-NH2基團反應(yīng)得到的。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗SS-A(R〇60)抗體試劑盒，其特征在于，所述校準品是由含有 抗SS-A(R〇60)抗體的人血清配制而成，用于得到校準曲線；所述質(zhì)控品是由含有抗SS-A (R〇60)抗體的人血清配制而成。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗SS-A(R〇60)抗體試劑盒，其特征在于，所述磁微粒試劑中磁 微粒的直徑為0.1-0.5μπι，所述磁微粒試劑具有超順磁性。5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗SS-A(R〇60)抗體試劑盒，其特征在于，所述化學(xué)發(fā)光底物中 包括有3-(2-螺旋金剛烷)-4-甲氧基-4-(3-磷氧酰)-苯基-1，2-二氧環(huán)乙烷二鈉鹽AMPH)， 在堿性磷酸酶的催化下釋放光子。6. -種用抗SS-A(R〇60)抗體試劑盒進行檢測的方法，其特征在于，包括步驟為:將樣本 與磁微粒試劑、生物素化SS-A(R〇60)抗原混勻得到第一復(fù)合物，對所述第一復(fù)合物進行洗 滌，再加入AP-抗人IgG抗體混勻，得到第二復(fù)合物，對所述第二復(fù)合物進行洗滌，再加入化 學(xué)發(fā)光底物，測定發(fā)光結(jié)果。7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的檢測方法，其特征在于，所述方法包括步驟為:將樣本與磁微 粒試劑、生物素化SS-A(R〇60)抗原混勻，在37°C下孵育15min，得到第一復(fù)合物，對所述第一 復(fù)合物洗滌3次，再加入AP-抗人IgG抗體，混勻并在37°C下孵育15min，得到第二復(fù)合物，對 所述第二復(fù)合物洗滌3次，再加入化學(xué)發(fā)光底物，混勻并在37°C下孵育5min，測定發(fā)光結(jié)果。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種抗SS-A(Ro60)抗體試劑盒及其檢測方法，試劑盒包括生物素化SS-A(Ro60)抗原、校準品、質(zhì)控品、AP-抗人IgG抗體、磁微粒試劑、化學(xué)發(fā)光底物和清洗液，檢測方法是通過試劑盒中試劑對樣本進行檢測。通過上述方式，本發(fā)明采用全自動磁微?；瘜W(xué)發(fā)光檢測方法，選取堿性磷酸酶AP-金剛烷AMPPD體系，具有穩(wěn)定性好，靈敏度高，重復(fù)性好等優(yōu)點，同時大大縮短了檢測時間，完成一個測試所需的總時間近在50分鐘以內(nèi)，而且操作簡易方便，真正實現(xiàn)了檢測全自動化。
【IPC分類】G01N33/543, G01N33/68
【公開號】CN105445474
【申請?zhí)枴緾N201510788505
【發(fā)明人】柳樂, 謝云, 秦楓, 趙轉(zhuǎn), 崔利歌, 王健, 王靜, 馬竹鳳, 黃琪, 趙婷, 張偉
【申請人】蘇州浩歐博生物醫(yī)藥有限公司
【公開日】2016年3月30日
【申請日】2015年11月17日