一種使用uplc-msms檢測食品中烏洛托品含量的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及食品檢測技術(shù)領(lǐng)域，特別是一種使用UPLC-MS/MS檢測食品中違禁添 加劑烏洛巧品的檢測方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 烏洛巧品（HMTA)別名六亞甲基四胺，它可作為緩蝕劑、固化劑、防縮劑和殺菌劑 等。烏洛巧品本身是低毒的，但在弱酸的條件下，烏洛巧品能分解出具有毒性的甲醒，同時 甲醒在體內(nèi)還可還原為甲醇，故也表現(xiàn)出甲醇的毒理作用。對人體的腎、肝、中樞神經(jīng)、免疫 功能、消化系統(tǒng)等均有損害。
[0003] 由于近年來，國內(nèi)多次報道從腐竹、粉絲、米線、水產(chǎn)品等食品中檢測出烏洛巧品 而引起一系列的食品安全事件，因此于2010年3月烏洛巧品被全國食品安全整頓工作辦公 室被列為《食品中可能違法添加的非食用物質(zhì)和易濫用的食品添加劑名單》中，被明文禁止 添加到食品當(dāng)中或加工食品過程中使用。
[0004] 在我國食品安全矛盾突出的背景下，國家對于食品安全問題執(zhí)法力度不斷加強(qiáng)的 背景下，對于此項存在的食品安全隱患需要加急應(yīng)對。
[0005] 然而目前在烏洛巧品的檢測主要集中在水和藥物制劑兩個方面，對于基體相對復(fù) 雜的食品中檢測方法研究較少。黃國春（氣相色譜法測定腐竹中烏洛巧品含量的研究[J] 廣西輕工業(yè)，2008 (6)，26-27)報道了用Η氯甲焼提取、氣相色譜氨火焰離子化檢測器檢測 腐竹中烏洛巧品，方法檢測限為0.7 mg/kg。但其處理方法（氣相色譜-質(zhì)譜GC-M巧所需 檢測時間較長，方法檢測限界較低，且單獨采用氣象色譜測定對基體相對復(fù)雜的食品結(jié)果 不夠精準(zhǔn)，而現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)SN/T 2226-2008其方法限界同樣存在限界較低問題；對于目前食品 安令執(zhí)法中遇到的辦歲獻(xiàn)經(jīng)從龍據(jù)討略思不足。對此尋找一種符合當(dāng)前狀況的輸刷方法尤 為必要。

【發(fā)明內(nèi)容】

[000引為解決W上技術(shù)問題，本發(fā)明建立了一種超高壓液相色譜一串聯(lián)質(zhì)譜（UPLC-MS/ MS)測定食品中烏洛巧品的分析方法，通過對不同基質(zhì)樣品進(jìn)行前處理后，在每3 min左右 完成一個樣品的分析，檢出限可達(dá)0. 5 μ g/kg (L0D，S/N=3)，方法回收率為86. 8%~102. 7%， 比SN/T2226-2008提高10倍；精密度RSD為0. 36%~4. 79%，數(shù)值可信。能高效、靈敏、準(zhǔn) 確的適用于各類食品中烏洛巧品的測定。
[0007] 為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用W下技術(shù)方案： (1)標(biāo)準(zhǔn)溶液的配置；準(zhǔn)確稱取烏洛巧品標(biāo)準(zhǔn)品0. 001 g，用超純水溶解并定容至100 1^，搖勻備用，配制成濃度為1.0 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲備液。
[0008] (2)色譜條件；HILIC色譜柱巧0 mmX2. 1 mm，1.7 μL?)，柱溫35 °C，流速0.化血/ min ;進(jìn)樣量5 μ L ;流動相為己臘和10 mmol/L的己酸倭溶液（pH=3. 5)(80/20，V/V)，等度 洗脫。
[0009] (3)質(zhì)譜條件；電噴霧離子源（ESI),正離子掃描模式；碰撞氣（CAD)為8 psi ;氣 簾氣（CUR)為20 psi ;霧化氣（GS1)為45 psi ;輔助加熱器（GS2)為60 psi ;噴霧電壓（IS) 為5500 V;離子源溫度（TEM)為150 °C。
[0010] (4)標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：取（1)所述的烏洛巧品系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，選擇流動相為己臘和 己酸倭，通過固相萃取柱W峰面積Y對濃度X ( μ g/L)作標(biāo)準(zhǔn)曲線。
[0011] 含油脂較高的樣品在液質(zhì)檢測時就會造成非常大的基質(zhì)效應(yīng)，使得回收率極大的 降低，對檢測結(jié)果產(chǎn)生了嚴(yán)重的干擾，所W必須去除樣品中的脂溶性物質(zhì)。本發(fā)明W脂肪含 量> 20%為區(qū)分脂肪含量高低限界，選取的樣品的脂肪含量如下表1 ; 表1本發(fā)明選取的樣品脂肪含量表
(5)含油脂較高樣品的前處理；將20 g食品樣品(脂肪含量> 20%)研磨成均勻的粉末 或勻漿，準(zhǔn)確稱取2. 00 g于離必管中，加入5血己臘并置于超聲萃取10 min, W 3000 r/ min離必5 min,己臘相過無水硫酸鋼，轉(zhuǎn)移至濃縮瓶濃縮近干后取己臘層過C18固相萃取 小柱，使用己臘作為洗脫液，濃縮至1.0 mU待測。
[0012] (6)含油脂較低樣品的前處理；將20 g食品樣品(脂肪含量< 20%)研磨成均勻的 粉末或勻漿，準(zhǔn)確稱取2.00 g于離必管中，加入5 mL己臘并置于超聲萃取10 min, W 3000 r/min離必5 min,己臘相過無水硫酸鋼，轉(zhuǎn)移至濃縮瓶濃縮近干后取己臘層直接過0. 22 μ m濾膜，待測。
[0013] (7)樣品的測定；取上述（2)含油脂較高樣品和（3)含油脂較低樣品的洗脫液添加 一系列濃度梯度的烏洛巧品標(biāo)準(zhǔn)溶液，在上述（4) (5)的條件下進(jìn)行UPLC-MS/MS測定，重 復(fù)測定計算變異系數(shù)，測出樣品中的烏洛巧品的含量。
[0014] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的UPLC-MS/MS測定食品中的烏洛巧品的方法，UPLC-MS 除了可W分析氣相色譜-質(zhì)譜（GC-MS)所不能分析的強(qiáng)極性、難揮發(fā)、熱不穩(wěn)定性的化合物 之外，還具較多方面的優(yōu)勢；如檢測范圍廣，質(zhì)譜幾乎可W檢測所有的化合物，較容易地處 理了分析熱不穩(wěn)定化合物的問題；分離能力強(qiáng)；分析結(jié)果準(zhǔn)確可靠；檢出限低，檢測時間短 等，具有很好的實用性。
【附圖說明】
[0015] 圖1烏洛巧品標(biāo)準(zhǔn)曲線圖； 圖2烏洛巧品標(biāo)準(zhǔn)溶液的離子流圖。
【具體實施方式】
[0016] 下面結(jié)合具體的實施例對本發(fā)明做進(jìn)一步的說明。
[0017] 實驗材料：美國Sigma公司的烏洛巧品，其純度>99. 0% ;美國Merck集團(tuán)的己臘、 己酸倭，其純度為色譜純； 實驗器材；如下表2 表2本發(fā)明所需實驗器材

按照下面步驟測定烏洛巧品的濃度： (1)標(biāo)準(zhǔn)溶液的配置；準(zhǔn)確稱取烏洛巧品標(biāo)準(zhǔn)品0. 001 g，用超純水溶解并定容至100 111以搖勻備用，配制成濃度為1.0 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲備液。
[001引 （2)色譜條件；HILIC色譜柱巧0 mmX2. 1 mm，1.7 μL?)，柱溫35 °C,流速0.化血/ min ;進(jìn)樣量5 μ L ;流動相為己臘和10 mmol/L的己酸倭溶液（pH=3. 5)(80/20，V/V)，等度 洗脫。
[0019] (3)質(zhì)譜條件；電噴霧離子源（ESI),正離子掃描模式；碰撞氣（CAD)為8 psi ;氣 簾氣（CUR)為20 psi ;霧化氣（GS1)為45 psi ;輔助加熱器（GS2)為60 psi ;噴霧電壓（IS) 為5500 V;離子源溫度（TEM)為150 °C。
[0020] (4)標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：取烏洛巧品系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，此流動相為己臘和己酸倭 進(jìn)行檢測，W峰面積Y對濃度X ( μ g/L)作標(biāo)準(zhǔn)曲線，線性方程為Y = 12576X - 304. 29， R2=0. 9999。曲線如圖1所示。
[0021] 標(biāo)準(zhǔn)曲線、線性范圍及檢出限 對監(jiān)測子離子峰與質(zhì)量濃度進(jìn)行線性擬合，結(jié)果表明監(jiān)測離子的質(zhì)譜峰面積與質(zhì)量濃 度在1. 0-50. 0 μ g/L范圍內(nèi)具有很好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)均優(yōu)于0. 999,表明所選定的 特征離子具有很好的穩(wěn)定性。依據(jù)定量離子