同時測定鮮切荸薺黃化組織中柚皮素和圣草酚含量的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于元素含量測定技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種同時測定鮮切荸薺黃化組織中 柚皮素和圣草酚含量的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 荸薺 (Eleocharis tuberosa)，別稱馬蹄、鳧茈、地栗、烏芋等，為多年生草本植物 莎草科荸薺屬形成的地下球莖。荸薺不僅質(zhì)脆多汁、營養(yǎng)豐富，而且還可入藥，對多種疾病 具有輔助治療的作用。自古以來有"地下雪梨"之美譽(yù)，北方人視其為"江南人參"。但是荸薺 經(jīng)鮮切處理之后，切割表面短期內(nèi)會變黃，嚴(yán)重影響了外觀品質(zhì)及其他價值。前期研究發(fā) 現(xiàn)，引起黃化的主要原因是鮮切荸薺組織中某些物質(zhì)經(jīng)過苯丙烷代謝途徑生成黃酮類物質(zhì) 所致，隨著黃色的加深，鮮切荸薺中總黃酮的含量相應(yīng)增加。進(jìn)一步通過對黃化物質(zhì)進(jìn)行分 離純化和結(jié)構(gòu)鑒定，表明鮮切荸薺切割表面的黃化可能主要與圣草酚和柚皮素兩種黃酮類 物質(zhì)有關(guān)。因此，建立一種能夠同時測定鮮切荸薺黃化組織中圣草酚和柚皮素含量對研究 鮮切荸薺黃化機(jī)制具有重要意義。
[0003] 近年來，國內(nèi)外有關(guān)于柚皮素、圣草酚檢測及其含量測定的單獨(dú)文獻(xiàn)報道，主要是 高效液相色譜法(HPLC)，或是與其他方法聯(lián)用，但是HPLC法主要集中于中草藥中柚皮素、圣 草酚檢測及其含量的測定，而且這些條件并不一定適用于鮮切荸薺黃化組織中的柚皮素和 圣草酚檢測及其含量測定。另外，目前也尚未見到HPLC法測定鮮切荸薺黃化組織中柚皮素 或圣草酚的報道，更未曾有同時測定鮮切荸薺黃化組織中柚皮素及圣草酚的報道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的是提供一種同時測定鮮切荸薺黃化組織中柚皮素和圣草酚含量的 方法，該方法能夠同時測定鮮切荸薺黃化組織中柚皮素和圣草酚的含量。
[0005] 本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是，同時測定鮮切荸薺黃化組織中柚皮素和圣草酚含量 的方法，具體按照以下步驟實(shí)施：
[0006] 步驟1，精密稱取標(biāo)準(zhǔn)品柚皮素0.70±0.01 mg置于5mL棕色容量瓶中，甲醇溶解并 稀釋至刻度，搖勻，制成標(biāo)準(zhǔn)品柚皮素儲備液；
[0007] 精密稱取標(biāo)準(zhǔn)品圣草酚0.40±0.01mg置于5mL棕色容量瓶中，甲醇溶解并稀釋至 刻度，搖勻，制成標(biāo)準(zhǔn)品圣草酚儲備液；
[0008] 精確量取標(biāo)準(zhǔn)品柚皮素儲備液和標(biāo)準(zhǔn)品圣草酚儲備液各lmL置于5mL棕色容量瓶 中，甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得濃度為柚皮素28±0.4yg ·πιΙ/1和圣草酚16±0.4μ g · ml/1的混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液，4°C避光保存，備用；
[0009] 步驟2,取步驟1中制備的柚皮素和圣草酚標(biāo)準(zhǔn)品混合溶液，分別配制成濃度為 5.60yg · mL-^llJOyg · mL-'le.SOyg · mL-\22.40yg · mL-ijS.OOyg · mL-1 的柚皮素、濃 度為3.20yg · mL-^6.4048 · mL-^9.6048 · mL-^lS.SOyg · mL-^lG.OOyg · mL-1 圣草酸一系 列標(biāo)準(zhǔn)品混合溶液，采用高效液相色譜法測定色譜峰面積;分別以柚皮素和圣草酚濃度X為 橫坐標(biāo)，色譜峰面積Y為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸得到標(biāo)準(zhǔn)曲線；
[0010] 步驟3，取鮮切荸薺黃化組織表面制備出待測樣品溶液，然后高效液相色譜法測定 色譜峰面積Α，然后通過從步驟2的標(biāo)準(zhǔn)曲線中查得色譜峰面積Α對應(yīng)的柚皮素濃度XI和圣 草酚濃度X2,計算鮮切荸薺黃化組織樣品中柚皮素和圣草酚含量。
[0011] 本發(fā)明的特點(diǎn)還在于，
[0012] 步驟2和4中高效液相色譜法(HPLC)的色譜條件如下：
[0013] 色譜柱：Agilent Eclipse XDB-Ci8(150mmX4.6mm，5ym);柱溫：40°C ;流動相： 0.5%冰醋酸溶液(A)-乙腈(B)，梯度洗脫(0 ~10min，10%-20%B;10 ~15min，20%-30% 8;15~25111丨11，30%440%8;25~30111丨11，40%445%8 ;30~35111丨11，45%450%8)，流動相使 用前需經(jīng)0.22μπι微孔濾膜抽濾并超聲脫氣；流速：lmL · mirT1;進(jìn)樣量：10yL;檢測波長： 280nm。在此條件下，按柚皮素和圣草酚的理論塔板數(shù)計算應(yīng)不低于5000,峰分離度應(yīng)大于 1.5〇
[0014] 步驟3中待測樣品溶液的制備過程如下:新鮮荸薺去皮、切分，置于16土 1°C溫度條 件下保存，待鮮切荸薺表面黃化，精確稱取黃化表面29.60~30.40g，置于三角瓶中，按料液 比為1:5加入無水乙醇，30~40°C溫度下超聲提取30~35min，4000~5000r/min離心分離15 ~20min，取上清液，殘渣采用同樣方法提取，合并上清液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至干，將濃縮部分 用甲醇溶解定容至5mL，搖勻，0.22μπι微孔濾膜過濾，濾液即為待測樣品溶液。
[0015] 本發(fā)明的有益效果是建立了能夠同時測定鮮切荸薺黃化組織中柚皮素和圣草酚 含量的的測定方法一一高效液相色譜法(HPLC)。目前HPLC法主要用于中草藥中柚皮素、圣 草酚分別檢測及其含量的測定，并沒有關(guān)于其同時測定鮮切荸薺黃化組織中柚皮素、圣草 酚含量的案例，而且其條件也不適用于測定鮮切荸薺黃化組織中柚皮素和圣草酚的含量測 定。本發(fā)明中的方法就可以對鮮切荸薺黃化組織中的柚皮素和圣草酚進(jìn)行有效地分離，另 外還同時測定了其柚皮素和圣草酚含量，而且此方法簡便快捷、準(zhǔn)確可靠，能排除鮮切荸薺 黃化組織中所含其他物質(zhì)色譜和其他物質(zhì)產(chǎn)生的干擾。由此，本發(fā)明還可為其他鮮切果蔬 中柚皮素和圣草酚含量同時測定提供一定的依據(jù)。
【附圖說明】
[0016] 圖1是圣草酚和柚皮素標(biāo)準(zhǔn)品HPLC色譜圖；
[0017]圖2是鮮切荸薺黃化組織樣品中圣草酚和柚皮素 HPLC色譜圖。
【具體實(shí)施方式】
[0018] 下面結(jié)合附圖和【具體實(shí)施方式】對本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)說明。
[0019] 本發(fā)明同時測定鮮切荸薺黃化組織中柚皮素和圣草酚含量的方法，具體按照以下 步驟實(shí)施：
[0020] 步驟1，精密稱取標(biāo)準(zhǔn)品柚皮素0.70 ±0.01 mg置于5mL棕色容量瓶中，甲醇溶解并 稀釋至刻度，搖勻，制成標(biāo)準(zhǔn)品柚皮素儲備液；
[0021] 精密稱取標(biāo)準(zhǔn)品圣草酚0.40±0.0 lmg置于5mL棕色容量瓶中，甲醇溶解并稀釋至 刻度，搖勻，制成標(biāo)準(zhǔn)品圣草酚儲備液；
[0022] 精確量取標(biāo)準(zhǔn)品柚皮素儲備液和標(biāo)準(zhǔn)品圣草酚儲備液各lmL置于5mL棕色容量瓶 中，甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得濃度為柚皮素28±0.4yg ·πιΙ/1和圣草酚16±0.4μ g · ml/1的混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液，4°C避光保存，備用；
[0023]步驟2,取步驟1中制備的柚皮素和圣草酚標(biāo)準(zhǔn)品混合溶液，分別配制成濃度為 5.60yg · mL-^llJOyg · mL-^ie.SOyg · mL-^22.4(^8 · ml^JS.OOyg · mL-1 的柚皮素、濃 度為3.20yg · mL-^6.4048 · mL-^9.6048 · mL-^lS.SOyg · mL-^lG.OOyg · mL-1 圣草酸一系 列標(biāo)準(zhǔn)品混合溶液，采用高效液相色譜法測定色譜峰面積;分別以柚皮素和圣草酚濃度X為 橫坐標(biāo)，色譜峰面積Y為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸得到標(biāo)準(zhǔn)曲線；
[0024]高效液相色譜法(HPLC)的色譜條件如下：
[0025] 色譜柱：Agilent Eclipse XDB_Ci8(150mmX 4.6mm，5μηι);柱溫：4