墨烯氮化碳納米片與發(fā)色探針儲備液簡單混合得到的，使用時將混合液用10 mM 50%的磷酸鹽緩沖溶液稀釋至500 yL，其中乙醇為助溶劑，pH 7.4。加入待測樣品孵化一段時間進(jìn)行熒光測定或進(jìn)行細(xì)胞熒光成像。
[0009 ]實(shí)施例1 (水溶液中谷胱甘肽(GSH)測定)
(1)選擇生物硫醇類中代表性物質(zhì)GSH進(jìn)行測定；
(2)石墨烯氮化碳納米片的制備:三聚氰胺500°C加熱3 h得到塊狀石墨烯氮化碳，產(chǎn)物在空氣中靜置4 h降至室溫，取Ig上述產(chǎn)物于100 mL 5M硝酸中連續(xù)超聲4 h，然后120 °C回流24 h，冷卻至室溫后，離心分離，二次水沖洗至中性備用；
(3)有機(jī)小分子發(fā)色探針的制備:14.31mg六水氯化鐵，37.2 mg 4-二乙氨基苯甲醛和
60.1mg I，1-二乙氧基-2-氰基乙烷置于體積比為1:5的2 mL乙醇/乙酸混合液中90 °(:回流5 h，隨后，溶劑在減壓下移除，粗產(chǎn)品通過硅膠柱色譜法提純，流動相體積比為5:1的乙酸乙酯/石油醚混合液；
(4)有機(jī)小分子發(fā)色探針溶解于乙醇中，熒光傳感器是通過所制備的石墨烯氮化碳納米片與發(fā)色探針儲備液簡單混合得到的，使用時將混合液用10 mM 50%的磷酸鹽緩沖溶液稀釋至500 yL，其中乙醇為助溶劑，pH 7.4，加入待測樣品孵化一段時間進(jìn)行熒光測定。熒光內(nèi)濾效應(yīng)傳感器對水溶液樣品中的GSH進(jìn)行檢測。
[0010]實(shí)施例2 (人類、動物血清樣品中硫醇類物質(zhì)測定)
(1)選擇處理過的人類血清樣品進(jìn)行測定；
(2)石墨烯氮化碳納米片的制備:三聚氰胺500°C加熱3 h得到塊狀石墨烯氮化碳，產(chǎn)物在空氣中靜置4 h降至室溫，取Ig上述產(chǎn)物于100 mL 5M硝酸中連續(xù)超聲4 h，然后120 °C回流24 h，冷卻至室溫后，離心分離，二次水沖洗至中性備用；
(3)有機(jī)小分子發(fā)色探針的制備:14.31mg六水氯化鐵，37.2 mg 4-二乙氨基苯甲醛和
60.1mg I，1-二乙氧基-2-氰基乙烷置于體積比為1:5的2 mL乙醇/乙酸混合液中90 °(:回流5 h，隨后，溶劑在減壓下移除，粗產(chǎn)品通過硅膠柱色譜法提純，流動相體積比為5:1的乙酸乙酯/石油醚混合液；
(4)有機(jī)小分子發(fā)色探針溶解于乙醇中，熒光傳感器是通過所制備的石墨烯氮化碳納米片與發(fā)色探針儲備液簡單混合得到的，使用時將混合液用10 mM 50%的磷酸鹽緩沖溶液稀釋至500 yL，其中乙醇為助溶劑，pH 7.4，加入待測樣品孵化一段時間進(jìn)行熒光測定。熒光內(nèi)濾效應(yīng)傳感器對人體、動物血清樣品中的硫醇類進(jìn)行檢測。
[0011]實(shí)施例3(人類乳腺癌細(xì)胞)
(1)選擇人類乳腺癌細(xì)胞進(jìn)行熒光成像研究；
(2)石墨烯氮化碳納米片的制備:三聚氰胺500°C加熱3 h得到塊狀石墨烯氮化碳，產(chǎn)物在空氣中靜置4 h降至室溫，取Ig上述產(chǎn)物于100 mL 5M硝酸中連續(xù)超聲4 h，然后120 °C回流24 h，冷卻至室溫后，離心分離，二次水沖洗至中性備用；
(3)有機(jī)小分子發(fā)色探針的制備:14.31mg六水氯化鐵，37.2 mg 4-二乙氨基苯甲醛和
60.1mg I，1-二乙氧基-2-氰基乙烷置于體積比為1:5的2 mL乙醇/乙酸混合液中90 °(:回流5 h，隨后，溶劑在減壓下移除，粗產(chǎn)品通過硅膠柱色譜法提純，流動相體積比為5:1的乙酸乙酯/石油醚混合液； (4)有機(jī)小分子發(fā)色探針溶解于乙醇中，熒光傳感器是通過所制備的石墨烯氮化碳納米片與發(fā)色探針儲備液簡單混合得到的，使用時將混合液用10 mM 50%的磷酸鹽緩沖溶液稀釋至500 yL，其中乙醇為助溶劑，pH 7.4，加入細(xì)胞樣品孵化一段時間進(jìn)行細(xì)胞成像研究。利用該傳感器對細(xì)胞進(jìn)行成像研究，結(jié)果表明對待測細(xì)胞有著很明亮的成像視野，說明該傳感器可用于監(jiān)測活細(xì)胞內(nèi)的生物硫醇類物質(zhì)，具有很好的應(yīng)用前景。
【主權(quán)項】
1.一種檢測生物硫醇類物質(zhì)的熒光傳感器的制備與檢測方法，其包括以下步驟: (1)按照現(xiàn)有方法制備石墨烯氮化碳納米片，一種有機(jī)小分子發(fā)色探針； (2)用合成的兩種材料構(gòu)成熒光內(nèi)濾效應(yīng)傳感器； (3)利用熒光技術(shù)或熒光成像技術(shù)進(jìn)行對生物硫醇類的檢測。2.根據(jù)權(quán)利要求書I所述的檢測生物硫醇類物質(zhì)的熒光傳感器的制備與檢測方法，其特征是: (1)石墨烯氮化碳納米片的制備:三聚氰胺500°C加熱3 h得到塊狀石墨烯氮化碳，產(chǎn)物在空氣中靜置4 h降至室溫，取Ig上述產(chǎn)物于100 mL 5M硝酸中連續(xù)超聲4 h，然后.120 °C回流24 h，冷卻至室溫后，離心分離，二次水沖洗至中性備用； (2)有機(jī)小分子發(fā)色探針的制備:14.31mg六水氯化鐵，37.2 mg 4-二乙氨基苯甲醛和.60.1mg 1，1-二乙氧基-2-氰基乙烷置于體積比為1:5的2 mL乙醇/乙酸混合液中90 °(:回流5 h，隨后，溶劑在減壓下移除，粗產(chǎn)品通過硅膠柱色譜法提純，流動相體積比為5:1的乙酸乙酯/石油醚混合液； (3)有機(jī)小分子發(fā)色探針溶解于乙醇中，熒光傳感器是通過所制備的石墨烯氮化碳納米片與發(fā)色探針儲備液簡單混合得到的，使用時將混合液用10 mM 50%的磷酸鹽緩沖溶液稀釋至500 yL，其中乙醇為助溶劑，pH 7.4。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種生物硫醇類物質(zhì)檢測的熒光內(nèi)濾效應(yīng)傳感器。該傳感器的制備,包括以下步驟：按照現(xiàn)有方法制備石墨烯氮化碳納米片，一種有機(jī)小分子發(fā)色探針；用合成的兩種材料構(gòu)成熒光內(nèi)濾效應(yīng)傳感器；利用熒光技術(shù)或熒光成像技術(shù)可進(jìn)行對生物硫醇類的檢測。本發(fā)明的傳感器快速簡單，靈敏度高，專一性好，檢測限低。
【IPC分類】G01N21/64
【公開號】CN105588823
【申請?zhí)枴緾N201610031898
【發(fā)明人】顏梅, 楊春蕾, 于京華, 王秀, 鄧文平, 申蕾, 朱少軍, 楊光鑫
【申請人】濟(jì)南大學(xué)
【公開日】2016年5月18日
【申請日】2016年1月19日